Galectin-2在妊娠期糖尿病患者中的表達及其與胰島素抵抗的關系

禤文婷 陳麗霞 黎美金

摘要：目的? 探討半乳糖凝集素-2（Galectin-2）在妊娠期糖尿病（GDM）患者中的表達情況，分析其與胰島素抵抗的關系及臨床意義。方法? 選擇2018年1月～2019年12月在我院定期產檢和住院分娩的GDM患者50例作為觀察組，另選取我院同期健康孕婦35例作為對照組，比較兩組血清和胎盤組織中Galectin-2 mRNA和蛋白的表達水平，并分析Galectin-1表達與胰島素抵抗的關系。結果? GDM組血清中Galectin-2 mRNA相對表達量為（0.621±0.105），高于對照組的（0.152±0.089），差異有統計學意義（P<0.05）。GDM組胎盤組織中Galectin-2蛋白表達陽性率為90.00%，中表達占40.00%，高表達占30.00%，高于對照組的77.14%、20.00%、14.29%，差異有統計學意義（P<0.05）。Spearman相關分析顯示，Galectin-2的表達水平與胰島素抵抗指數呈正相關（r=0.605，P=0.043）。結論? Galectin-2在妊娠期糖尿病患者血清和胎盤組織中的表達增高，且與胰島素抵抗密切相關，提示其可能參與妊娠期糖尿病的病理過程。

關鍵詞：Galectin-2;妊娠期糖尿病;胰島素抵抗

Abstract：Objective? To investigate the expression of Galectin-2 （Galectin-2） in patients with gestational diabetes （GDM）， and to analyze its relationship with insulin resistance and its clinical significance.Methods? 50 patients with GDM who received regular check-ups and hospitalized deliveries in our hospital from January 2018 to December 2019 were selected as the observation group， and 35 healthy pregnant women during the same period in our hospital were selected as the control group，the expression levels of Galectin-2 mRNA and protein in serum and placental tissues of the two groups were compared， and the relationship between Galectin-1 expression and insulin resistance was analyzed.Results? The relative expression of Galectin-2 mRNA in the serum of the GDM group was （0.621±0.105）， which was higher than that of the control group （0.152±0.089），the difference was statistically significant （P<0.05）. The positive rate of Galectin-2 protein expression in placenta tissue of GDM group was 90.00%， medium expression accounted for 40.00%， high expression accounted for 30.00%， which was higher than 77.14%， 20.00%， 14.29% of control group，the difference was statistically significant （P<0.05）.Spearman correlation analysis showed that the expression level of Galectin-2 was positively correlated with insulin resistance index （r=0.605，P=0.043）.Conclusion? The expression of Galectin-2 in serum and placenta tissues of patients with gestational diabetes was increased， and it was closely related to insulin resistance， suggesting that it may be involved in the pathological process of gestational diabetes.

Key words：Galectin-2;Gestational diabetes;Insulin resistance

妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）是指既往無糖尿病的孕婦在妊娠期間首次發生的糖代謝異常。GDM嚴重危害母嬰健康，不僅可導致巨大兒、胎兒窘迫、產后出血等多種不良妊娠結局的發生，并顯著增加孕婦及其子代罹患肥胖、糖尿病等代謝性疾病的風險[1]。GDM發病機制尚未闡明，目前普遍認為胰島素分泌缺陷和胰島素抵抗是其發病的重要環節和特征。Galectin-2屬于半乳糖凝集素（Galectins）家族成員，可通過糖識別結構域與β-半乳糖苷殘基結合，參與細胞生長、分化和免疫反應等生物學過程。近年研究發現Galectins與糖尿病、高脂血癥等代謝性疾病密切相關。Galectin-2在GDM患者中的表達及其作用的研究報道較少。基于此，本研究旨在探究Galectin-2在GDM患者血清和胎盤組織中的表達情況及臨床意義，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料? 選擇2018年1月～2019年12月在南方醫科大學附屬東莞人民醫院產檢并住院分娩的GDM患者50例作為觀察組，年齡23～39歲，平均年齡（28.89±2.91）歲;分娩孕周34～39周，平均分娩孕周（37.13±3.01）周;體重指數（BMI）19～26 kg/m2，平均BMI（22.51±1.52）kg/m2;初產婦22例，經產婦28例。另選取同期年齡、孕周相匹配的健康孕婦35例作為對照組，年齡21～38歲，平均年齡（27.35±4.11）歲;分娩孕周35～39周，平均分娩孕周（38.52±1.52）周;BMI 19～24 kg/m2，平均BMI（20.15±1.23）kg/m2;初產婦16例，經產婦19例。兩組年齡、BMI、分娩孕周比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。本研究經南方醫科大學附屬東莞人民醫院倫理委員會審核批準，所有研究對象均知情同意并簽署知情同意書。

1.2納入及排除標準? 納入標準：①單胎妊娠;②觀察組患者均符合2010年國際糖尿病與妊娠關系研究協會（IAPSG）制定關于GDM診斷標準：空腹血糖<5.1 mmol/L，餐后1 h血糖<10.0 mmol/L，餐后2 h血糖<8.5 mmol/L;其中1項達到或者超過上述界值，即可診斷為GDM。排除標準：既往糖尿病、先天性心臟病、肝炎、甲狀腺功能異常或其他自身免疫性疾病者。

1.3方法? 血液樣本：在孕早期（8～12周）產檢當天空腹采集靜脈血，測定血糖和胰島素水平，根據穩態模型法計算胰島素抵抗指數;分離血清，置于-80 ℃凍存備用。胎盤樣本：孕產婦分娩后取出胎盤，立即用生理鹽水沖洗，近臍帶附著處取組織2塊，其中一份組織置于-80 ℃凍存備用，另一份組織加入10%中性福爾馬林固定24 h，梯度脫水后石蠟包埋備用。RT-PCR法檢測Galectin-2 mRNA表達：使用RNAiso Plus提取總RNA。使用RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit合成cDNA。PCR反應條件：94℃預變性5 min，94 ℃變性1 min，60 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，共30個循環，72℃延伸10 min。PCR引物序列：Galectin-2（上游引物：5-GAAGATCACAGGCAGCATCG-3，下游引物：5-ACAGGTGATCTTCCCGTTGT-3）、β-actin（上游引物：5-AGAGCTACGAGCTGCCTGAC-3，下游引物：5-AGCACTGTGTTGGCGTACAG-3）。PCR產物經過1.5%的瓊脂糖凝膠電泳后，采用凝膠分析儀掃描分析。免疫組化染色法檢測Galectin-2蛋白表達：胎盤石蠟包埋組織切片經脫蠟、水化后，使用PBS磷酸鹽緩沖液進行抗原修復;加入2% H2O2，室溫孵育15 min;加入美國Abcam公司生產的小鼠抗人Galectin-2多克隆抗體（1∶500稀釋），4 ℃孵育過夜;PBS漂洗3次，10 min/次;加入HRP標記羊抗小鼠二抗，室溫孵育25 min，DAB顯色。

1.4結果判讀? 由2名經驗豐富的病理醫師采用雙盲法進行閱片。采用文獻報道的評分方法[2]，結合陽性細胞比例（無=0，<10%=1，10%～50%=2，51%～80%=3，>80%=4）和染色強弱（無=0，弱=1，中=2，強=3）的乘積進行免疫反應評分（IRS），按照評分的分值判斷為陰性（0～3分），低表達（4～6分），中表達（7～9分）和高表達（9～12分）。

1.5統計學方法? 采用SPSS 19.0統計軟件進行數據處理。計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗;計數資料以（n）表示，采用？字2檢驗;采用Spearman相關分析Galectin-2表達狀態與胰島素抵抗指數的關系;以P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1兩組Galectin-2 mRNA相對表達量比較? RT-PCR檢測結果顯示，GDM組血清Galectin-2 mRNA相對表達量為（0.621±0.105），高于對照組的（0.152±0.089），差異有統計學意義（t=13.171，P<0.05），見圖1。

2.2兩組Galectin-2蛋白相對表達量比較? 免疫組化染色結果顯示，Galectin-2蛋白主要表達于胎盤滋養葉細胞的細胞膜和細胞質，見圖2。GDM組胎盤組織中Galectin-2蛋白表達陽性率為90.00%，中表達及高表達占比均高于對照組，差異有統計學意義（？字2=36.026，P<0.05），見表1。

2.3 Galectin-1表達與胰島素抵抗的關系? GDM患者胎盤組織中Galectin-1蛋白的免疫反應評分與胰島素抵抗指數呈正相關關系（r=0.605，P=0.043），見圖3。

3討論

GDM是妊娠常見的并發癥，其發病率在不同地區、不同人群中存在較大差異，變化范圍在9.3%～25.5%之間[3]。近年來，隨著人們生活方式改變和高齡孕婦日漸增多，我國GDM的發病率有逐年增加的趨勢。北京地區的流行病學調查顯示，2005～2012年GDM的發病率從14.7上升至19.7%[4]。GDM臨床過程復雜，容易造成多種不良妊娠結局，增加母嬰遠期心血管和代謝性疾病患病風險[5-8]。GDM孕婦產后5～16年內發展為糖尿病的累積發病率可高達36%，與孕期血糖正常的孕婦相比較，GDM孕婦未來發生糖尿病的幾率增加7倍。因此，深入研究GDM的發病機制，尋找早期診斷的生物標志物具有重要意義。

GDM的病因和發病機制目前尚未完全闡明，GDM患者存在不同程度的胰島素抵抗、胰島素分泌不足和炎癥反應狀態[9]。Galectin-2是一種β-半乳糖苷結合蛋白，參與調節機體的炎癥免疫反應、葡萄糖和脂肪代謝等多種生物學過程[10]，其中Galectin-2表達于多種炎癥免疫細胞，通過誘導細胞遷移、激活和釋放炎癥因子發揮重要的免疫調節作用;Galectin-2參與葡萄糖和脂肪代謝過程，其基因多態性已被證實與高空腹胰島素水平和心血管疾病發生風險密切相關。另外，Galectin-2可與淋巴毒素-α（LTA）相結合并調節LTA的表達，下調Galectin-2表達可降低LTA細胞外的水平，同時降低炎癥反應和冠心病發生風險。本研究結果發現，GDM組血清Galectin-2 mRNA相對表達量高于對照組（P<0.05），說明將血清Galectin-2 mRNA表達作為GDM早期診斷生物標記物具有可行性。另外，GDM組胎盤中Galectin-2蛋白表達水平高于高于對照組（P<0.05），而且GDM患者胎盤組織中Galectin-2蛋白的免疫反應評分與胰島素抵抗呈正相關（P<0.05），說明GDM患者胎盤組織中Galectin-2蛋白表達隨著胰島素抵抗程度的增加而升高，提示Galectin-2可能通過調控胰島素抵抗參與GDM的發病，臨床可通過靶向干預Galectin-2表達，減輕胰島素抵抗，可能成為GDM藥物治療研究的新方向。 綜上所述，Galectin-2在妊娠期糖尿病患者血清和胎盤組織中的表達增高，且與胰島素抵抗密切相關，提示其可能參與妊娠期糖尿病的病理過程。

參考文獻：

[1]李利平，姜宏衛，龐秋霞，等.國際糖尿病與妊娠研究組標準對妊娠期糖尿病患者母嬰結局的影響[J].中國糖尿病雜志，2016，24（5）：416-418.

[2]Weidner N.Current pathologic methods for measuring intratumoral microvessel density within breast carcinoma and other solid tumors[J].Breast Cancer Res Treat，1995，36（2）：169-180.

[3]Sacks DA，Hadden DR，Maresh MJ，et al.Frequency of gestational diabetes mellitus at collaborating centers based on IADPSG consensus panel-recommended criteria[J].Diabetes Care，2012，35（3）：526-528.

[4]蘇日娜，朱微微，魏玉梅，等.北京地區妊娠期糖尿病發病情況及妊娠結局的回顧性調查[J].中華圍產醫學雜志，2016，19（5）：330-335.

[5]黃玲玲，張明珠.妊娠期糖尿病對子代近期及遠期生長發育的影響研究[J].糖尿病新世界，2019，22（19）：111-112.

[6]李玉明，閆海洋.基于美國女性大型前瞻性隊列研究探討妊娠期糖尿病與遠期心血管疾病的關系[J].循證醫學，2018，18（6）：337-340.

[7]王永，張呈玲，劉翠英.肥胖與妊娠期及遠期母兒并發癥[J].中國計劃生育學雜志，2018，26（11）：1135-1136.

[8]謝雨芳，高武紅，陳妤煌，王歡，蔡娜，易烈致.妊娠期糖尿病子代遠期生長發育及糖代謝影響[J].江西醫藥，2017，52（7）：599-603.

[9]于成華，張碩.妊娠期糖尿病患者產后胰島素抵抗及胰島β細胞功能變化及其影響因素[J].中國生育健康雜志，2020，31（3）：215-218.

[10]Hepp P，Unverdorben L，Hutter S，et al.Placental Galectin-2 Expression in Gestational Diabetes：A Systematic，Histological Analysis[J].Int J Mol Sci，2020，21（7）：2404.

收稿日期：2020-05-22;修回日期：2020-06-01

編輯/杜帆