單人份全自動化學發光免疫分析法測定降鈣素原的性能評價

潘曉芳，張小靜，黃宇哲，劉挺，吳靜標（通信作者）

1 廣東省醫療器械質量監督檢驗所 （廣東廣州 510663）；2 深圳天深醫療器械有限公司 （廣東深圳 518104）

降鈣素原（procalcitonin，PCT）由116個氨基酸殘基組成，是降鈣素的前肽物，由降鈣素、下鈣素及1個含有57個氨基酸殘基的N 末端片段組成[1]。在健康情況下人體血清中PCT 含量很低，在發生細菌感染時PCT 含量急劇增加。PCT 是特異性區分細菌感染和其他原因引起的炎癥反應的重要標志物，PCT 含量的檢測可以用于輔助診斷細菌感染，并指導局部細菌感染或者系統性感染患者使用抗生素進行治療[2]。PCT 含量的變化反映了炎癥反應的劇烈程度，其水平高低與感染程度成正相關，若水平過高，則患者極可能發展為膿毒血癥和膿毒性休克[3-4]。

PCT 是早期診斷膿毒癥患者準確客觀的實驗室指標，不僅可以判斷膿毒癥患者的嚴重程度，還對監測和評估患者預后有重要意義[5]。血液中PCT 水平不僅可判斷是否存在細菌感染，還可區分革蘭陽性桿菌的陰陽性，指導早期抗菌藥物的使用[6]。

目前，國內免疫層析和免疫熒光仍然是免疫檢驗的主流技術，與傳統定性或半定量的免疫層析方法學比較，化學發光即時檢驗具有靈敏度高、操作簡單、結果處理及時準確等優勢，化學發光即時檢驗特別是單人份化學發光即時檢驗開始成為行業重點研究方向。

對于患者數量少的基層醫院，單人份化學發光即時檢驗可以降低試劑和耗材成本，減少醫療資源的浪費，單人單次的檢測方式簡單快捷，對操作人員的專業度要求不高，同時便于存儲和低頻次使用，減少了標本收集和送檢等流程，縮短了報告時間，同時可以減少人為誤差。與多人份化學發光即時檢驗比較，單人份化學發光儀器無液路系統，故障率低，無日常維護，試劑不存在開瓶有效期，并且可根據不同類型的免疫反應模式，設計多樣化的組分分配及分裝方式，可擴展性強。因此，單人份化學發光即時檢驗更符合基層和臨床市場的實際需求。

本研究通過單人份全自動化學發光免疫分析法測定PCT，研究單人份全自動化學發光免疫分析系統及其配套的PCT 測定試劑盒的線性、檢測限、準確度和重復性。

1 儀器和試劑

1.1 檢驗儀器

天深單人份全自動化學發光免疫分析系統ACCRE 6，Roche Cobas e411分析系統。

1.2 檢驗試劑

天深PCT 測定試劑盒、天深試劑盒配套校準品準確度樣本、重復性樣本、檢測限樣本。

2 檢驗原理

天深PCT 測定試劑盒采用雙位點夾心化學發光免疫分析法，將樣本和堿性磷酸酶標記的抗人PCT 抗體加入抗人PCT 抗體包被的磁珠中；混勻孵育后，樣本中的抗原與磁珠上的抗體以及堿性磷酸酶標記的抗體結合，形成免疫復合物；反應結束后，磁場吸附磁珠，通過3次清洗去除未結合的物質，加入反應底物，通過光電倍增管檢測發光強度，樣本中待檢測物質的濃度與發光強度成正比，樣本中待檢測物質的量由定標曲線來確定。

3 檢驗方法

按照天深PCT 測定試劑盒和Roche Elecsys BRAHMS PCT檢測試劑盒說明書進行檢測。

4 天深PCT 測定試劑盒性能評價

4.1 線性試驗結果

測試系列濃度的PCT 工作標準溶液，將結果平均值和理論值（表1）用最小二乘法進行線性擬合并計算，得到R2=0.9998，即PCT 的線性相關系數r 為0.99999，PCT 在0～100 ng/ml 范圍內有良好的線性關系，見圖1。

表1 PCT 的線性結果（ng/ml）

圖1 PCT 試劑盒的線性評估結果（ng/ml）

4.2 檢測限試驗結果

對5份濃度近似檢出限的低值樣本進行檢測，每份樣本檢測5次，低于空白限0.02 ng/ml 的檢測結果的數量為0個，見表2。

4.3 準確度試驗結果

測定兩個水平的準確度樣本，每個水平平行測定3次，每次測試結果記為Xi，按公式（1）計算相對偏差，水平1樣本的最大相對偏差為6.12%，水平2樣本的最大相對偏差為-6.88%，見表3。

式中Bi為相對偏差，Xi為實際測定結果，T 為標定濃度。

表2 PCT 檢測限的測試結果（ng/ml）

表3 PCT 準確度的測試結果及相對偏差

4.4 重復性試驗結果

對兩個濃度水平的樣本各重復檢測10次，計算10次測量結果的平均值M 和標準差SD，得出變異系數CV 小于4%，重復性良好，見表4。

表4 PCT 重復性的測試結果及CV

綜上所述，單人份全自動化學發光免疫分析系統測定PCT 具有線性關系良好、靈敏度高、準確性和重復性好的特點，適用于PCT 檢測。

［參考文獻］

［1］ Shen WJ, Zhuo Y, Chai YQ, et al. Enzyme-Free Electrochemical Immunosensor Based on Host–Guest Nanonets Catalyzing Amplification for Procalcitonin Detection[J]. ACS Appl Mater Interfaces, 2015, 7(7): 4127-4134.

［2］ Christ-crain M, Jaccard-stolz D, Bingisser R, et al. Effect of procalcitonin-guided treatment on antibiotic use and outcome in lower respiratory tract infections: cluster-randomised, singleblinded intervention trial[J]. Lancet(London England), 2004, 363(9409): 600-607.

［3］ Gaini S, Koldkjaer OG, Pedersen C, et al. Procalcitonin, lipopolysaccharide-binding protein, interleukin-6 and C-reactive protein in community-acquired infections and sepsis: a prospective study[J]. Critical Care, 2006, 10(2): R53.

［4］ Andreola B, Bressan S, Callegaro S, et al. Procalcitonin and C-reactive protein as diagnostic markers of severe bacterial infections in febrile infants and children in the emergency department[J]. Pediatr Infect Dis J, 2007, 26(8): 672-677.

［5］ Chu CM, Kao KC, Huang SH, et al. Diagnostic value of apoptosis biomarkers in severe sepsis-A pilot study[J]. Cell Mol Biol(Noisyle-grand), 2016, 62(11): 32-37.

［6］ 劉坤賀，張春美.血清降鈣素原對革蘭陰性或革蘭陽性菌血流感染的診斷價值[J].臨床肺科雜志，2018，23（4）： 663 -665.