理氣暖胃顆粒質量標準研究*

★ 楊晗 孫嘉文 李勝華 胡浩武 高羽 沈麗琴 周青罡*（江西匯仁藥業股份有限公司 南昌 330052）

理氣暖胃顆粒（原名：氣滯胃炎顆粒）［國藥準字Z20110034］為江西匯仁藥業股份有限公司獨家研制的新藥品種。該方系南昌市草藥科研所副所長孟靈源根據《景岳全書》柴胡疏散加減而成［1］，由柴胡、白芍、甘草、高良姜、香附、枳殼、旋復花、郁金、元胡等9味中藥材組成。功能主治為疏肝理氣，溫胃止痛。適用于肝胃不和挾寒型慢性淺表性胃炎，主治胃脘脹痛或痛竄兩脅，且喜溫喜按，噯氣頻作，嘈雜泛酸，或口泛清涎，舌質淡紅，苔薄白或白厚，脈弦。或遇惱怒復發或加重，或納呆少食，或腹脹。經臨床試驗表明本品應用安全、療效確切［2］、質量穩定。為了有效控制本品制劑的內在質量，本實驗對其質量標準進行研究，分別采用了薄層色譜法（TLC）及高效液相色譜法（HPLC）開展實驗，對本品中的白芍、延胡索、枳殼進行定性鑒別，對芍藥苷進行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1100高效液相色譜儀；Lambda 25紫外可見分光光度儀（PerkinElmer公司）；AB204-S型電子天平（梅特勒—托利多公司）；AG-135型電子天平（梅特勒—托利多公司）。

1.2 試藥 理氣暖胃顆粒（自制，批號：20030501、20030502、20030503）；芍藥苷對照品（購自于中國藥品生物制品檢定所，批號：110737-200312），橙皮甙對照品（購自于中國藥品生物制品檢定所）；延胡索對照藥材（購自于中國藥品生物制品檢定所，批號：928-9001）；所用乙腈為色譜純規格，其余試劑均為分析純規格。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 白芍薄層色譜鑒別 取本品顆粒20 g，研細，加乙醇30 mL后，振搖5 min，濾過。濾液置已處理好的中性氧化鋁固相萃取柱（中性氧化鋁5g，柱子內徑約1.5 cm，用乙醇30 mL進行預洗），采用乙醇30 mL進行洗脫，收集洗脫液后，蒸干，殘渣加入乙醇1 mL，使之溶解，作為供試品溶液。取白芍對照藥材2 g，加水50 mL煎煮30 min，濾過，蒸干，加乙醇5 mL振搖，取上清液從置已處理好的中性氧化鋁固相萃取柱，同法制成對照藥材溶液。另取芍藥苷對照品，加入乙醇，制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。參照薄層色譜法（中國藥典2005版一部附錄ⅥB）進行試驗，吸取上述供試品溶液及對照品溶液各10 μL，分別點樣于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（45∶5∶10∶0.7）為展開劑，展開，取出，晾干，然后噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱使其顯色，至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應的位置上，顯示相同的顏色的斑點。結果見圖1。

圖1 白芍TLC鑒別圖

2.1.2 枳殼薄層色譜鑒別 取本品20 g研細，加甲醇25 mL，超聲波處理30 min，濾過，濾液與1 g聚酰胺（14～30目）混勻，再使溶劑揮發去盡使呈松散狀，加在已制備好的聚酰胺柱上（3 g，內徑1.5 cm，干法裝柱），用水洗脫至近無色，5%乙醇30 mL洗脫。再加20%乙醇進行洗脫，并收集洗脫液40 mL，蒸干，再加入甲醇1 mL，使之溶解，作為供試品溶液。取枳殼對照藥材1 g，加水50 mL煎煮30 min，濾過，蒸干，加入5 mL甲醇溶解，取上清液，與上述濾液同法制成對照藥材溶液。另取橙皮甙對照品，加入甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005版一部附錄ⅥB）進行試驗，吸取上述供試品溶液及對照品溶液各5 μL，分別點樣于同一0.5%氫氧化鈉硅膠G板上，以醋酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）為展開劑，展至約4 cm，取出，晾干；再以甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1）的上層溶液作為展開劑，展開至約10 cm，取出，晾干，再噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應位置上，顯示相同顏色的熒光斑點。結果見圖2。

圖2 枳殼TLC鑒別圖

2.1.3 延胡索薄層色譜鑒別 取本品20 g，研細，加甲醇30 mL，超聲波處理20 min，濾過，濾液蒸干，加1%鹽酸2 mL使溶解，濾過，濾液加濃氨試液調至堿性，用氯仿振搖提取3次，每次10 mL，然后合并氯仿液，蒸干，所得殘渣加氯仿1 mL，使之溶解，作為供試品溶液。另取延胡索對照藥材lg，同法，制成溶液，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005版一部附錄ⅥB）開展試驗，吸取上述供試品溶液及對照品溶液各10 μL，分別點樣于同一硅膠G薄層板上，以正已烷-氯仿-甲醇（10∶6∶1）作為展開劑，置于以展開劑預飽和過的層析缸內，展開，取出，晾干，后噴以碘化鉍鉀試液，放置片刻。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯示相同顏色的斑點。結果見圖3。

圖3 延胡索TLC鑒別圖

2.2 芍藥苷的含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜條件：色譜柱為YMC-AQ C18（6.0×150 mm）；0.1%磷酸水溶液－乙腈（87∶13）為流動相；檢測波長為230 nm，理論板數按芍藥苷峰計算，應不低于4 000。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品適量，加入甲醇，制成每1 mL含46 μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品顆粒適量，研細，稱取0.5 g，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加入稀乙醇45 mL，超聲提取30 min，取出，放至室溫，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.4 系統適應性試驗 分別取對照品溶液、供試品溶液以及陰性對照溶液， 按上述色譜條件測定。結果供試品芍藥苷主峰與樣品中其他組分色譜峰達到基線分離，見圖4。

圖4 理氣暖胃顆粒中芍藥苷的HPLC圖

2.2.5 方法學考察

2.2.5.1 線性關系考察 精密稱取對照品適量制成含量為206.80 μg/mL的對照品母液，分別精密吸取適量，稀釋成含量為8.272、20.68、41.36、82.72 μg/mL的對照品溶液，分別吸取上述對照品溶液及母液10 μL，注入液相色譜儀，進行測定。以質量濃度（μg/mL）作為橫坐標，以色譜峰峰面積作為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程，為Y=11.34166X-13.28180（r=0.9999），表明芍藥苷濃度在8.272～206.8 μg/mL的范圍內，呈現良好的線性關系。

2.2.5.2 精密度試驗 吸取芍藥苷對照品溶液，重復進樣6次，采用HPLC法進行測定，結果芍藥苷峰面積的RSD為0.32%，表明所用儀器的精密度較好。

2.2.5.3 穩定性試驗 取同一批樣品（批號：20030501），按供試品溶液制備方法制備后，分別在0、4、8、12、24 h測定，記錄峰面積，結果其RSD為1.9%，表明供試品在16 h之內穩定。

2.2.5.4 重復性試驗 精密稱取同一樣品（批號：20030501）6份，按照供試品溶液的制備方法進行制備，采用高效液相色譜法進行測定，記錄芍藥苷峰面積，結果該批樣品的芍藥苷平均含量為4.55 mg/g，RSD為0.32%，表明本試驗的方法重復性較好。

2.2.5.5 回收率試驗 采用加樣回收法進行試驗，精密稱取已知含量的同一批號樣品（批號：20030501）6份，分別精密加入芍藥苷對照品溶液，配制成同一濃度的6份，按供試品溶液的制備方法制備后，進行高效液相色譜測定，結果見表1。結果顯示平均加樣回收率為100.1%，RSD%為0.2%，表明本方法回收率較好。

表1 回收率試驗結果

2.2.5.6 樣品含量測定 精密稱取3批樣品，每批各0.5g，按上述方法進行測定，結果見表2。

表2 3批樣品含量測定 mg/袋

3 討論

本品方中共9味藥，藥材的成分復雜，有芍藥苷、生物堿、黃酮類化合物、萜類化合物、姜黃素、橙皮甙、柚皮甙、柴胡皂甙、旋復花內酯、槲皮素等，部分藥材還含有揮發油。通過摸索了多種前處理及薄層色譜的條件，再結合其藥味的藥理作用，從中選取了白芍、延胡索、枳殼三種藥味作為鑒別項。白芍作為方中臣藥，入肝、脾、肺三經，養血柔肝，緩急止痛；延胡索入心包、肝、脾、肺經，能夠活血理氣止痛；枳殼入脾、胃二經，疏利氣機。所選取的藥味在功效上的作用顯著，且具有明顯的特征，薄層色譜的展開及顯色效果較好，重復性好，穩定性好，能夠有效的進行本品的質量控制。

現代藥理學研究表明，白芍中所含的有效成分白芍總苷，具有明顯的抗炎作用、鎮痛作用、保肝作用［3］，與本品的功能主治針對肝胃不和挾寒型慢性淺表性胃炎具有極強的相關性。白芍作為方中臣藥，又作為用量最大的藥味之一，故選取其所含的芍藥苷作為指標化學成分，進行含量測定。根據選取指標化學成分芍藥苷的性質，在供試品提取溶媒選擇上，本實驗在參考了2005版《中國藥典》中白芍“含量測定”項下供試品溶液制備方法基礎上［4］，又比較了不同溶劑的超聲提取（甲醇、無水乙醇、稀乙醇），結果發現稀乙醇的提取效果好。確定采用高效液相色譜法進行檢測，經過方法學驗證，該方法操作便捷，準確度高，穩定性好。采用該法對三批樣品中的芍藥苷進行含量測定，結果表明其含量差異不大，表明了本制劑質量穩定可控。本研究所建立的質量標準相關方法，準確可靠、穩定性高、重復性好，能夠用于理氣暖胃顆粒的質量控制。