木犀草素及其黃酮苷的抗炎、抗氧化作用

王 偉，何 平，江小明

（武漢食品化妝品檢驗所，湖北 武漢 430012）

木犀草素（luteolin，lut）是一類典型C6-C3-C6結構的黃酮類化合物，廣泛存在于抗炎植物原料中[1-6]。木犀草素通常以黃酮苷形式存在，如黃酮氧苷結構的木犀草苷（cynaroside，cyn）[2-4]，以及黃酮碳苷結構的葒草素（orientin，ori）[7]與異葒草素（homoorientin，homo）[8]。木犀草素及其黃酮苷具有廣泛生理活性，如抗炎[2,9]、抗氧化[10]、抗腫瘤[11]、抑制肥胖[12]、緩解II型糖尿病[12]等。而抗炎、抗氧化活性是黃酮類化合物發揮抗腫瘤、抑制肥胖、II型糖尿病等生理活性的基礎[13]。

黃酮類化合物發揮抗炎活性的主要場所在免疫細胞（其中主要是巨噬細胞），黃酮類化合物對巨噬細胞炎性反應的抑制活性可通過抑制核轉錄因子κB（nuclear factor κB，NF-κB）信號通路實現[14]。黃酮類化合物在不同水平抑制NF-κB信號通路下調炎癥介質的產生。Hamalainen等[15]研究NO/誘導型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）和NF-κB抑制的相關性發現，在巨噬細胞模型中類黃酮在減少iNOS產生的同時也抑制了NF-κB蛋白家族的轉錄活性；槲皮素[16]、白藜蘆醇[17]、甘草素[18]、漆黃素[19]、木犀草素[20]等在相似的作用濃度下對NF-κB信號通路上游關鍵調控蛋白κB抑制因子α亞基（α inhibitor of κB，IκBα）具有相似的抑制活性；桑色素[21]、漆黃素[22]均可通過抑制NF-κB信號通路經典途徑的直接上游靶點IκB激酶β亞基（IκB kinase β，IKKβ）從而抑制IKK對IκB的激活作用，進而抑制NF-κB信號通路。

另一方面，Kelch樣ECH相關蛋白-1（Kelch-like ECH-associated protein 1，Keap1）/核因子E2相關性因子2（nuclear factor erythroid 2 related factor 2，Nrf2）信號通路是迄今發現最重要的黃酮類化合物抗氧化信號通路[23-24]。黃酮類化合物主要通過該信號通路降低細胞氧化應激水平發揮抗氧化活性。其通過促使Keap1-Nrf2解偶聯，促進Nrf2解離并發生核移位與抗氧化反應元件（antioxidant response element，ARE）結合，調控一系列抗氧化物質如谷胱甘肽血紅素氧合酶（heme oxygenase-1，HO-1）、還原型輔酶II醌氧化還原酶（nicotinamide adenine dinucleotide phosphat quinone oxidoreductase 1，NQO1）等表達，進而發揮抗氧化作用[25-26]。這是低利用率的黃酮類化合物可在機體內發揮高抗氧化活性的重要原因。

研究表明木犀草素及其黃酮苷具有較好的抗炎和抗氧化活性，然而，木犀草素及其黃酮苷能否在發揮抗炎活性的同時發揮抗氧化活性，其抗炎、抗氧化活性的兩條主要信號通路之間是否存在交叉作用尚鮮見報道。因此，本實驗基于人源巨噬細胞THP-1，從分子水平探究木犀草素及其黃酮苷抑制NF-κB信號通路而發揮的抗炎作用，及對Nrf2轉錄活性的激活作用，解析木犀草素及其黃酮苷的抗炎作用、抗氧化活性及作用機制，為開發天然來源的抗炎、抗氧化活性成分提供依據，為木犀草素作為天然抗氧化劑的拓展應用提供指導。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

THP-1單核巨噬細胞 上海細胞庫；木犀草素上海阿拉丁生化科技股份有限公司；木犀草苷、葒草素、異葒草素（均為色譜級，純度≥98%） 上海源葉生物科技有限公司；NF-κB抑制劑BAY 11-7082 美國MCE公司；RPMI培養基 美國HyClone公司；胎牛血清 澳大利亞AusGeneX公司；青鏈霉素溶液（100×）杭州吉諾生物醫藥技術有限公司； 噻唑藍（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）、脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）、豆蔻佛波醇乙酯（phorbol 12-myristate13-acetate，PMA）、β-巰基乙醇 美國Sigma公司；高純總RNA提取試劑盒 北京艾德萊生物科技有限公司；漿蛋白與核蛋白提取試劑盒、Western Blot分析試劑 美國AspenTech公司；PrimeScriptTMreagent Kit with gDNA Eraser反轉錄試劑盒、聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）SYBR Premix ExTaqTMII熒光定量試劑盒 日本TaKaRa公司；腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細胞介素（interleukin，IL）-6、IL-1β酶聯免疫吸附檢測試劑盒北京欣博盛生物科技有限公司；所有分析用有機溶劑均為國產分析純，購自國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 儀器與設備

Multifuge X1R高速冷凍離心機、全波長讀數儀美國Thermo Fisher Scientific公司；ECLIPSE TS100倒置顯微鏡 日本尼康公司；SW-CJ-1FD超凈操作臺 蘇州安泰空氣技術有限公司；N60超微量分光光度計 德國Implen公司；DW-86L626超低溫冰箱 青島海爾集團公司；24 孔細胞培養板、細胞刮刀、細胞凍存管 美國Corning公司；25 cm2及75 cm2細胞培養瓶 德國Greiner公司；Biospectrometer紫外分光光度計 德國Eppendorf公司；MG96G PCR儀 杭州朗基科學儀器有限公司；ChemiDoc MP凝膠成像系統 美國Bio Legend公司；qTOWER2.2熒光定量PCR儀 德國Analytik Jena公司；DYY-8C凝膠電泳儀、DYY-6C電泳儀、DYCZ-400D轉移電泳儀槽、DYCZ-24DN垂直電泳槽、WD-9405A脫色搖床 北京市六一儀器廠；T GL-16c 臺式離心機上海安亭科學儀器廠；TGL-16冷凍離心機 湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司；IMS-20制冰機 常熟市雪科電器有限公司；HH-W-600水浴鍋 金壇市江南儀器廠；AX-II暗匣 廣東粵華醫療器械廠有限公司；LiDE110 DYY-6C掃描儀 日本Canon公司；0.45 μm聚偏氟乙烯膜 美國Millipore公司；醫用X射線膠片美國Kodak公司。

1.3 方法

1.3.1 細胞培養

細胞培養方法參考Lund等[27]的方法并略作調整。THP-1單核巨噬細胞以RPMI完全培養基培養，培養基由10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 μg/mL鏈霉素、0.1 μmol/L的β-巰基乙醇組成，細胞于5% CO2、相對濕度90%、37 ℃ CO2恒溫培養箱培養，每24 h于倒置顯微鏡下觀察，當密度達到70%～80%左右時進行分瓶傳代。

1.3.2 MTT實驗

采用MTT法[19]測定黃酮類化合物對THP-1單核巨噬細胞的毒性作用。

稀釋細胞懸液，加入PMA試劑（0.1 μmol/L），接種100 μL細胞到96 板中，使其將密度為3×104個/孔，同時留一列不接種細胞（設為空白組1），細胞培養板放入CO2培養箱中使之貼壁。12 h后小心吸去上清液，以溫熱的磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）輕輕清洗細胞，棄去PBS，加入新鮮RPMI完全培養基，靜息24 h。

小心吸去靜息24 h的細胞上清液，加入新的培養液，培養液分為樣品組：含10%胎牛血清的RPMI完全培養基培養細胞，培養液中輕輕加入5 μmol/L黃酮類化合物溶液（lut、cyn、ori、homo）或10 μmol/L NF-κB抑制劑Bay-11-7082（Bay組，陽性對照）；CK組：含10%胎牛血清的RPMI完全培養基培養細胞，培養液不加黃酮類化合物溶液；空白組2：不含胎牛血清的RPMI完全培養基培養細胞，培養液不加黃酮類化合物溶液。處理后的細胞板放入CO2培養箱中培養24 h，樣品組與空白組均設8 個平行。

小心吸去細胞培養板內上清液，輕輕加入配制好的MTT溶液（質量濃度為0.5 mg/mL），放入CO2培養箱中避光孵育3～4 h。小心吸去細胞培養板中MTT溶液，以150 μL二甲亞砜溶解細胞中甲瓚結晶，于37 ℃振蕩孵育10 min，在酶標儀上讀取490 nm波長處吸光度，按下式計算細胞存活率。

式中：AT為樣品組在490 nm波長處的吸光度；AN為空白組1在490 nm波長處的吸光度；AC為空白組2在490 nm波長處的吸光度。

1.3.3 酶聯免疫吸附測定法檢測TNF-α、IL-6、IL-1β水平

稀釋細胞懸液，接種2 mL細胞到12 孔板中，使其密度為5×106個/孔，待細胞覆蓋孔板底部80%～90%時，加入PMA試劑（終濃度為0.1 μmol/L），放入CO2培養箱中使之貼壁。培養12 h后小心吸去上清液，以溫熱的PBS輕輕清洗細胞，去PBS，加入新鮮RPMI完全培養基，靜息24 h。

以不含血清的RPMI培養液稀釋黃酮類化合物母液，使其終濃度為5 μmol/L，小心吸去細胞培養板上清液，加入新的培養液，培養液分為樣品組（分組及處理方式同1.3.2節）；LPS組：含10%胎牛血清的RPMI完全培養基培養細胞，培養液不加黃酮類化合物溶液；CK組：含10%胎牛血清的RPMI完全培養基培養細胞，培養液不加黃酮類化合物溶液和LPS。處理后的細胞培養板放入CO2培養箱中培養，3 h后取出12 孔板，樣品組和LPS組加入LPS（LPS終質量濃度為1 μg/mL），CK組不加LPS，將12 孔板放回細胞培養箱，培養12 h。收集細胞上清液，采用酶聯免疫吸附檢測試劑盒測定細胞上清液中TNF-α、IL-6、L-1β水平。

1.3.4 熒光定量PCR法檢測TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的含量

采用熒光定量PCR法[28]相對定量細胞中TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA。稀釋細胞懸液，接種2 mL細胞到12 孔板中，使其密度為5×106個/孔，待細胞覆蓋孔板底部80%～90%時，加入PMA試劑（終濃度為0.1 μmol/L），放入CO2培養箱中使之貼壁。培養12 h后小心吸去上清液，以溫熱的PBS輕輕清洗細胞，棄去PBS，加入新鮮RPMI完全培養基，靜息24 h。

以不含血清的RPMI培養液稀釋黃酮類化合物母液，使其終濃度為5 μmol/L，小心吸去細胞培養板上清液，細胞處理同1.3.3節。以TRIzol試劑裂解細胞收集細胞樣品。采用熒光定量PCR法測定各處理組細胞中TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA水平。

樣品中RNA提取、反轉錄、定量方法分別按試劑盒說明書操作。各指標引物信息見表1。

表 1 熒光定量PCR引物信息Table 1 Primer sequences used for quantitative PCR

1.3.5 Western Blot法檢測NF-κB信號通路關鍵蛋白相對含量

1.3.5.1 Western Blot法檢測P-IκBα、P-IKKβ相對含量

稀釋細胞懸液，接種2 mL細胞到6 孔板中，使其密度為1×107個/孔，待細胞覆蓋孔板底部80%～90%時，加入PMA試劑（終濃度為0.1 μmol/L），放入CO2培養箱中使之貼壁。培養12 h后小心吸去上清液，以溫熱的PBS輕輕清洗細胞，去PBS，加入新鮮RPMI完全培養基，靜息24 h。

以不含血清的RPMI培養液稀釋黃酮類化合物母液，使其終濃度為5 μmol/L，小心吸去細胞培養板上清液，分別加4 種黃酮類化合物溶液或10 μmol/L NF-κB抑制劑Bay；保留部分孔板不加黃酮類化合物，設置為CK組和LPS組，放入CO2培養箱中培養。3 h后取出細胞培養板，樣品組和LPS組加入LPS（LPS終質量濃度為1 μg/mL），CK組不加LPS，將細胞培養板放回細胞培養箱，培養30 min。以RPMI裂解液裂解細胞收集細胞總蛋白樣品，并采用Western Blot法測定總蛋白中P-IκBα、P-IKKβ含量[29]。分析抑制劑和黃酮類化合物對LPS刺激下THP-1單核巨噬細胞中P-IκBα和P-IKKβ影響，以CK組對含量記為0.000，LPS組對含量記為1.000。

1.3.5.2 Western Blot法檢測P65蛋白相對含量

稀釋細胞懸液，接種5 mL細胞到直徑6 cm的細胞培養皿中，使其將密度為5×106個/孔，待細胞覆蓋孔板底部80%～90%時，加入PMA試劑（終濃度為0.1 μmol/L），放入CO2培養箱中使之貼壁。培養12 h后小心吸去上清液，以溫熱的PBS輕輕清洗細胞，棄去PBS，加入新鮮RPMI完全培養基，靜息24 h。

以不含血清的RPMI培養液稀釋黃酮類化合物母液，使其終濃度為5 μmol/L，小心吸去細胞培養板上清液，細胞處理同1.3.5.1節。按試劑盒說明分別收集提取細胞質與細胞核蛋白樣品，采用Western Blot法測定樣品中P65相對含量[29]。

1.3.6 Western Blot法檢測Nrf2、HO-1蛋白相對含量

細胞處理同1.3.5.2節，按試劑盒說明分別收集提取細胞質與細胞核蛋白樣品，采用Western Blot法測定蛋白中Nrf2、HO-1相對含量[29]。

1.4 數據處理與分析

實驗結果表示為平均值±標準差，采用SAS 8.0軟件最小顯著差法進行多重比較，分析數據顯著性差異，P＜0.05表明差異顯著，P＜0.01表明差異極顯著。

2 結果與分析

2.1 黃酮類化合物對TPH-1單核巨噬細胞的毒性作用

表 2 5μmol/L黃酮類化合物對THP-1單核巨噬細胞的毒性作用Table 2 Toxicity of 5μmol/L flavonoids on THP-1 macrophages

由表2可知，在作用濃度下，與CK組對比，5 μmol/L的黃酮類化合物對THP-1單核巨噬細胞無細胞毒性作用（P＞0.05）。Bay-11-7082是NF-κB抑制劑，其推薦使用濃度為10 μmol/L左右，因此，實驗時，對10 μmol/L的Bay抑制劑細胞毒性進行評價，10 μmol/L的Bay抑制劑對THP-1單核巨噬細胞無細胞毒害作用。

2.2 黃酮類化合物對THP-1單核巨噬細胞炎性模型細胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α水平的影響

TNF-α是一種細胞因子，本質上是一種信號蛋白，參與調控機體的炎癥反應，也是炎性反應早起的主要細胞因子之一，主要由單核巨噬細胞受到炎性刺激后產生，LPS是誘導TNF-α產生的較強刺激劑[30]。當THP-1被誘導形成單核巨噬細胞后經LPS刺激，細胞內TNF-α含量顯著提高，TNF-α是判斷炎性發生的重要炎癥因子之一[31]。

圖 1 4 種黃酮類化合物對LPS刺激下THP-1單核巨噬細胞中TNF-α的影響Fig. 1 TNF-α contents of THP-1 macrophages pretreated with 4 flavonoids before being stimulated with LPS

在本實驗中，經過LPS刺激后，THP-1單核巨噬細胞內TNF-αmRNA（圖1a）和上清液中TNF-α（圖1b）的含量極顯著上升（P＜0.01）。與LPS刺激組相比，木犀草素及NF-κB抑制劑Bay均可顯著降低細胞內TNF-αmRNA和上清液中TNF-α的表達，同Bay抑制劑類似，木犀草素可通過抑制NF-κB信號通路發揮抗炎活性，且5 μmol/L的木犀草素對TNF-α的抑制作用與10 μmol/L抑制劑Bay的抑制作用相當（P＞0.05）。木犀草苷、葒草素、異葒草素均可顯著降低細胞中上清液中TNF-α的表達（圖1b）（P＜0.05，P＜0.01）。

圖 2 4 種黃酮類化合物對LPS刺激下THP-1單核巨噬細胞中IL-6的影響Fig. 2 IL-6 contents of THP-1 macrophages pretreated with 4 flavonoids before being stimulated with LPS

NF-κB信號通路激活后，NF-κB蛋白家族迅速進入細胞核打開各種κB依賴性基因的表達，如IL-6和IL-1β，同時IL-6和IL-1β可以反饋調控NF-κB。

IL-6是一種多效性的促炎因子。如圖2所示，經過LPS刺激后，THP-1單核巨噬細胞上清液中IL-6濃度極顯著上升（P＜0.01），木犀草素和Bay均可極顯著抑制細胞內IL-6mRNA和上清液中IL-6的表達（P＜0.01），且木犀草素對IL-6的抑制作用與抑制劑Bay相當（P＞0.05）。木犀草苷、葒草素、異葒草素均可極顯著降低細胞中上清液中IL-6的表達（P＜0.01）。

IL-1β是IL-1的主要成分[32]，是一種多功能的炎癥因子，主要表現在致炎和對組織的膠原降解的破壞作用。如圖3所示，LPS作用于THP-1單核巨噬細胞后，胞內IL-1β濃度極顯著增高（P＜0.01）。

木犀草素及其黃酮苷對IL-1β的抑制作用較其對TNF-α和IL-6的弱，木犀草素對細胞內IL-1βmRNA的表達具有顯著抑制作用（P＜0.05），葒草素對細胞上清液液中IL-1β表現出顯著抑制作用（P＜0.05）。

圖 3 4 種黃酮類化合物對LPS刺激下THP-1單核巨噬細胞中IL-1β的影響Fig. 3 IL-6 contents of THP-1 macrophages pretreated with 4 flavonoids before being stimulated with LPS

2.3 黃酮類化合物對THP-1單核巨噬細胞炎性模型P-IκBα、P-IKKβ信號通路的調控作用

圖 4 黃酮類化合物對LPS刺激下THP-1單核巨噬細胞P-IκBα、P-IKKβ的影響Fig. 4 P-IκBα and P-IKKβ contents of THP-1 macrophages pretreated with flavonoids before being stimulated with LPS

由圖4可見，陽性對照組NF-κB抑制劑Bay的預處理可以抑制IκBα和IKKβ發生磷酸化，降低P-IκBα和P-IKKβ的含量。木犀草素、木犀草苷、葒草素、異葒草素均可以下調細胞中P-IκBα和P-IKKβ的產生，木犀草素及其黃酮苷對于抑制IκBα和IKKβ發生磷酸化具有較好的作用。

2.4 黃酮類化合物對THP-1單核巨噬細胞炎性模型中P65調控作用

同樣通過計算相對比率分析抑制劑及黃酮類化合物對LPS刺激下THP-1單核巨噬細胞核和細胞質中P65的影響。LPS作用30 min后，細胞核和細胞質中P65較大程度地增加（圖5）。陽性對照組NF-κB抑制劑Bay的預處理抑制了P65的生成，同時抑制了P65含量的核移位，這可以直接抑制NF-κB核轉錄因子調控的炎性介質的表達。木犀草苷、葒草素和異葒草素也可以通過抑制P65入核而發揮抗炎活性。

圖 5 黃酮類化合物對LPS刺激下THP-1單核巨噬細胞核內與胞漿中P65的影響Fig. 5 P65 contents in THP-1 macrophages pretreated with flavonoids before being stimulated with LPS

2.5 黃酮類化合物對THP-1單核巨噬細胞炎性模型中Nrf2和HO-1的調控作用

LPS刺激后，較CK組相比，細胞中總Nrf2表達量降低，細胞核中Nrf2相對含量顯著減少，而細胞質中Nrf2相對含量顯著增多，表明LPS誘導的炎性反應中，Nrf2發生核移位程度低，LPS刺激THP-1單核巨噬細胞建立的炎性細胞中細胞內源Keap1-Nrf2抗氧化系統受到一定程度抑制。

Bay-11-7082作為NF-κB抑制劑可以顯著提高細胞中Nrf2的表達，但不能使表達的Nrf2進入細胞核，啟動抗氧化系統，發揮抗氧化活性。而葒草素不僅可以顯著促進細胞中Nrf2的表達，還可以顯著促進Nrf2發生核移位；木犀草苷、異葒草素同Bay類似，僅可促進Nrf2的表達（P＜0.01）。

圖 6 黃酮類化合物對LPS刺激下THP-1單核巨噬細胞核內與胞漿中Nrf2的影響Fig. 6 Nrf2 contents of THP-1 macrophages pretreated with flavonoids before being stimulated with LPS

LPS增強了細胞內產生氧化應激反應，為增強細胞內抗氧化活性，HO-1表達增多（P＜0.01）。在作用12 h后，葒草素中HO-1表達量處于較低水平，可能是由于其通過顯著促進細胞中Nrf2的表達，顯著促進Nrf2發生核移位（圖6c、e），黃酮類化合物發揮了一定的抗氧化活性，細胞內氧化水平已經得到控制（圖7b），因而細胞內HO-1表達處于較低水平；木犀草素、木犀草苷、異葒草素3 種黃酮類化合物對HO-1的表達具有下調作用，這可能是經過黃酮類化合物的預處理后，抑制了IκBα和IKKβ發生磷酸化反應，直接抑制了NE-κB信號通路，較強程度上抑制了細胞內炎性反應（圖6），細胞氧化應激水平不高，HO-1表達量較低。

圖 7 黃酮類化合物對LPS刺激下THP-1單核巨噬細胞HO-1的影響Fig. 7 HO-1 contents of THP-1 macrophages pretreated with flavonoids before being stimulated with LPS

3 討 論

NF-κB信號通路是目前發現的最關鍵的抗炎信號通路之一，它是參與炎癥和先天免疫應答的主要效應通路[33]。許多參與炎癥反應啟動的炎性介質與細胞因子在轉錄水平上受到NF-κB的調控，如TNF-α、IL-6、IL-1β等炎性因子。本研究發現木犀草素黃酮碳苷葒草素可極顯著地抑制促炎因子TNF-α、IL-6、IL-1β的蛋白表達，且葒草素通過抑制NF-κB信號通路關鍵調控蛋白上游調控器IKKβ、上游調控蛋白IκBα的活性及下游調控蛋白P65的活性發揮抗炎活性，表現出了更好的NF-κB信號通路抑制活性，發揮了極強的抗炎活性。

Nrf2是細胞抗氧化應激的關鍵核轉錄因子，正常狀態下，Nrf2與Keap1呈結合形式，存在于細胞漿中，處于穩定狀態，細胞核內Nrf2處于較低水平[34]。在氧化應激條件下，Nrf2與Keap1解離轉譯，大量的Nrf2迅速發生核移位，并激活多種抗氧化酶如HO-1等表達。激活的HO-1能夠催化血紅素分解釋放出膽綠素，膽綠素在膽綠素還原酶作用下進一步降解為具有強大抗氧化能力的膽紅素[35]。HO-1在氧化應激水平增高時表達則明顯增高，迅速對沉積的血紅素做出反應，催化血紅素代謝產生膽綠素，通過抗氧化活性的調節細胞內氧化/抗氧化的平衡[36]。實驗中葒草素使細胞處于較低水平的氧化應激水平，發現其主要通過可以顯著促進細胞中Nrf2的表達，顯著促進Nrf2發生核移位，發揮了較強的抗氧化活性。

具有IKKβ抑制活性可能是葒草素同時發揮抗炎、抗氧化活性的基礎。IKKβ可與抗氧化信號通路Keap1-Nrf2中Keap1蛋白通過一段保守基序直接結合，抑制IKKβ或IKK復合體的活性，降低其對IκB的激活活性，這種Keap1介導IKKβ泛素化并降解的反應只發生在高等哺乳動物中[37]。在Keap1敲除的人巨噬細胞中，IKK復合體和NF-κB家族的總量及磷酸化程度均顯著升高，NF-κB信號通路活化程度升高[38]，證明IKKβ的存在與Keap1蛋白結合可抑制NF-κB信號通路的活化。類似地，本研究中葒草素通過抑制IKKβ上游調節器抑制NF-κB信號通路，發揮了抗炎活性，進一步地實驗發現，葒草素促進Nrf2表達及核移位，使細胞中HO-1處于較低水平，發揮了一定的抗氧化活性。即IKKβ作為葒草素抑制NF-κB信號通路并激活Nrf2的交叉靶點發揮了抗炎/抗氧化雙重生物活性。

此外，葒草素是以木犀草素為黃酮苷元母核，在C8位形成的黃酮碳苷，研究發現相同濃度下，葒草素在發揮抗炎活性和抗氧化活性時，其活性強于木犀草素，較木犀草素表現出更高的生物利用度。有研究表明II相代謝酶中的葡萄糖醛酸轉移酶引起的首過效應是黃酮類化合物生物利用度低的重要原因[39]。木犀草素在體內易被代謝稱為葡萄糖醛酸代謝產物，而被排出細胞而無法發揮藥理作用[40]。李燁[41]的研究也發現，在人、大鼠肝微粒體反應體系中，木犀草素的葡萄糖醛酸代謝代謝速率均高于葒草素。這可能是相同濃度下，葒草素較木犀草素發揮了更強抗炎、抗氧化活性的原因。

4 結 論

木犀草素及其黃酮苷具有較好的抗炎活性，其中黃酮碳苷葒草素可以通過抑制NF-κB信號通路關鍵調控蛋白上游調控器P-IKKβ、上游調控蛋白IκBα的活性及下游調控蛋白P65的活性，下調細胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β，發揮較強的抗炎活性；同時葒草素通過促進Nrf2核轉錄因子的表達和核移位發揮較好的抗氧化活性，IKKβ可能是葒草素抑制NF-κB信號通路并激活Nrf2發揮抗炎/抗氧化雙重生物活性的交叉靶點；葒草素較木犀草素發揮了更強的抗炎、抗氧化活性，原因可能是其較木犀草素具有更低的代謝速率和更高的生物利用度。