早期梅毒患者IL-1β和IL-33表達與梅毒細胞免疫的相關(guān)性研究

崔 莉，劉 智

(1.陜西省人民醫(yī)院皮膚科，陜西 西安 710068 2.陜西省交通醫(yī)院神經(jīng)外科，陜西 西安 710068)

梅毒是由梅毒螺旋體引起的一種傳染性疾病，為人類特有疾病，可侵犯全身多個器官，引發(fā)一系列癥狀，可導(dǎo)致患者死亡，為我國乙類防治管理病種[1]。梅毒可分為早期和晚期，其中早期梅毒經(jīng)過徹底治療是可以達到臨床痊愈的，但并非所有患者均能達到理想療效。研究指出，細胞免疫失衡是導(dǎo)致機體難以有效清除梅毒螺旋體、使病情遷延的重要因素[2]。白細胞介素-1β(IL-1β)、白細胞介素-33(IL-33)均是常見白細胞介質(zhì)，前者參與了2型輔助性T淋巴細胞(Th2)反應(yīng)，后者可與ST2結(jié)合，誘導(dǎo)NF-κB和MAPK活化，繼而使Th2細胞產(chǎn)生增加[3]。本次研究以我院50例早期梅毒患者為研究對象，分析IL-1β和IL-33表達與梅毒細胞免疫的相關(guān)性，以探討上述兩種白細胞介質(zhì)是否參與了梅毒細胞免疫抑制。

1 資料與方法

1.1一般資料：將2018年7月至2019年6月我院收治的50例早期梅毒患者作為研究對象(觀察組)，其均未經(jīng)過驅(qū)梅治療，不加熱血清反應(yīng)素試驗(TRUST)及梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(TPPA)陽性，排除合并其他類型病毒感染、自身免疫性疾病、妊娠及哺乳期女性、酗酒史和人類免疫缺陷病毒(HIV)感染者，且本次研究前6個月未進行過抗病毒和免疫治療。早期梅毒患者中男25例(50.00%)，女25例(50.00%)；年齡22～62歲，平均(41.96±9.27)歲；另選擇50例健康志愿者作為對照組，男27例(54.00%)，女23例(46.00%)；年齡20～63歲，平均(42.18±9.35)歲。觀察組和對照組患者性別、年齡比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本次研究通過我院倫理委員會審批，所有受檢者均對本研究知情同意。

1.2方法：血清IL-1β和IL-33檢測：取兩組受檢者外周靜脈血3mL，置于無菌干燥試管中，離心分離血清，于-80℃環(huán)境中保存待檢。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清IL-1β、IL-33水平，實驗前20min從冰箱內(nèi)取出試劑盒，平衡至室溫。采用標(biāo)準(zhǔn)稀釋液RD6F配制標(biāo)準(zhǔn)品，設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔8孔，各孔均加入100μL樣品稀釋液，第1孔加標(biāo)準(zhǔn)品100μL，混勻后吸出100μL移至第2孔。如此反復(fù)作對倍稀釋至第7孔，于第7孔吸出100μL棄去，各孔體積均為100μL。第8孔為空白對照。向待測品孔中每孔各加入待測樣品100μL，將反應(yīng)板置37℃環(huán)境中2h，之后用洗滌液洗滌4～6次，于濾紙上印干。每孔中加入50μL第一抗體工作液，充分混勻，置37℃環(huán)境中1h。洗滌液充分洗滌4～6次，印干，各孔加入100μL酶標(biāo)抗體工作液。將反應(yīng)板置37℃環(huán)境中1h，再次洗板。各孔加入100μL底物液后置于37℃暗處，反應(yīng)5～10min。各孔加入50μL終止液，混勻。在30min內(nèi)使用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值(OD值)，計算樣品濃度。外周血T淋巴細胞亞群檢測：取兩組受檢者外周靜脈血，使用流式細胞儀(美國BD公司提供)檢測其外周血T淋巴細胞亞群(CD3+、CD4+和CD8+)、自然殺傷(NK)細胞水平。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清IL-1β和IL-33水平比較：觀察組血清IL-1β和IL-33水平均高于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組血清IL-1β和IL-33水平比較

2.2兩組細胞免疫相關(guān)指標(biāo)比較：觀察組外周血T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+以及NK細胞水平均低于對照組(P<0.05)，見表2。

表2 兩組細胞免疫相關(guān)指標(biāo)比較

2.3不同血清IL-1β水平早期梅毒患者一般資料和細胞免疫相關(guān)指標(biāo)比較：根據(jù)所測血清IL-1β水平，以二分法將早期梅毒患者分為高水平IL-1β組和低水平IL-1β組，兩組性別、年齡比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，高水平IL-1β組外周血CD3+、CD4+、CD8+以及NK細胞水平均低于低水平IL-1β組(P<0.05)，見表3。

表3 不同血清IL-1β水平早期梅毒患者一般資料和細胞免疫相關(guān)指標(biāo)比較

2.4不同血清IL-33水平早期梅毒患者一般資料和細胞免疫相關(guān)指標(biāo)比較：根據(jù)所測血清IL-33水平，以二分法將早期梅毒患者分為高水平IL-3 3組和低水平IL-3 3組，兩組性別、年齡比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，高水平IL-3 3組外周血CD3+、CD4+、CD8+以及NK細胞水平均低于低水平IL-3 3組(P<0.05)，見表4。

表4 不同血清IL-33水平早期梅毒患者一般資料和細胞免疫相關(guān)指標(biāo)比較

2.5早期梅毒患者IL-1β和IL-33表達與梅毒細胞免疫的相關(guān)性：早期梅毒患者血清IL-1β和IL-33水平與外周血CD3+、CD4+、CD8+以及NK細胞水平均呈負相關(guān)(P<0.05)，見表5。

表5 早期梅毒患者IL-1β和IL-33表達與梅毒細胞免疫的相關(guān)性

3 討 論

梅毒螺旋體是一種具有極強侵襲性的古老病原體，皮膚和黏膜的微小破損接觸到10個及以上梅毒螺旋體便可發(fā)生感染，經(jīng)過一段時間的增殖，機體相應(yīng)器官和系統(tǒng)便會出現(xiàn)臨床癥狀，若治療不當(dāng)或不及時，患者可發(fā)生晚期神經(jīng)梅毒、樹膠腫性神經(jīng)梅毒等，且該病還可通過母嬰傳播，造成新生兒死亡或嬰兒先天性梅毒[4]。一般而言，病毒入侵人體后會受到宿主免疫系統(tǒng)(細胞免疫和體液免疫)防御作用，兩者之間會發(fā)生復(fù)雜相互作用，經(jīng)過一定時間，機體免疫系統(tǒng)控制病毒感染。但由于梅毒螺旋體侵襲性強，且存在免疫逃逸特性，加之梅毒是人類特有疾病，難以進行體外培養(yǎng)，因此關(guān)于該病的具體致病機制、人體免疫系統(tǒng)清除梅毒螺旋體、梅毒螺旋體免疫逃逸性的具體機理仍不明確[5]。人體免疫系統(tǒng)在梅毒螺旋體清除過程中具有重要作用，早期梅毒引發(fā)感染的風(fēng)險最高，健康人與早期梅毒患者單次性接觸，其感染梅毒的幾率可達到60%[6]。相關(guān)研究也指出，同梅毒患者進行無保護措施的性行為，接近40%的性伴侶血清檢查為陰性[7]，這意味著宿主的某些因素可能會對梅毒螺旋體感染敏感性產(chǎn)生影響。

近年來，人們在梅毒發(fā)病機制的研究主要集中在人體免疫失衡方面。研究表示，隨著梅毒螺旋體感染延長，機體Th1型反應(yīng)介導(dǎo)向Th2型反應(yīng)介導(dǎo)轉(zhuǎn)變[8]。理論上梅毒螺旋體侵入人體后，免疫系統(tǒng)會對其進行清除處理，清除以Th1型細胞免疫為主，但免疫平衡卻從Th1型遷移轉(zhuǎn)變成Th2型，平衡被打破，機體細胞免疫受到抑制，使得梅毒病程遷延。IL-1β為白細胞介素1家族成員，是由巨噬細胞分泌的前炎癥細胞因子，可參與機體炎癥反應(yīng)，在自身免疫性疾病、感染性疾病中均有重要作用。張躍軍等[9]研究指出，梅毒螺旋體膜蛋白Tp0971可通過激活NF-κB和MAPKs誘導(dǎo)巨噬細胞分泌IL-1β，促進機體炎癥反應(yīng)。IL-33基因序列與IL-1β相似，其是通過前體蛋白形式分泌，經(jīng)過相應(yīng)加工后轉(zhuǎn)化成活性成熟蛋白。IL-33能夠和特異性受體ST2結(jié)合，而該受體位于人2號染色體中，在Th2細胞表面穩(wěn)定表達，IL-33結(jié)合ST2后能夠誘導(dǎo)NF-kB和MAPK活化，增加Th2細胞活性，參與Th2介導(dǎo)的炎性反應(yīng)。本研究對比早期梅毒患者與健康人血清IL-1β和IL-33水平，顯示早期梅毒患者血清IL-1β和IL-33水平均高于健康志愿者，提示IL-1β和IL-33可能與早期梅毒發(fā)生有關(guān)。T淋巴細胞亞群(CD3+、CD4+和CD8+)和NK細胞是維持人體正常細胞免疫功能的重要基礎(chǔ)，本次研究比較早期梅毒患者與健康志愿者細胞免疫情況，顯示早期梅毒患者外周血CD3+、CD4+、CD8+以及NK細胞水平均低于健康志愿者，提示細胞免疫與早期梅毒患者病情發(fā)作存在一定關(guān)聯(lián)性。綜合上述結(jié)果，考慮IL-1β和IL-33可能與細胞免疫具有相關(guān)性。

本次研究對不同IL-1β、IL-33水平梅毒患者的細胞免疫情況進行比較，發(fā)現(xiàn)高水平IL-1β組、高水平IL-3 3組外周血CD3+、CD4+、CD8+以及NK細胞水平均分別低于低水平IL-1β組、低水平IL-3 3組，提示IL-1β和IL-33與細胞免疫具有一定相關(guān)性。進一步行Pearson相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)早期梅毒患者血清IL-1β和IL-33水平與外周血CD3+、CD4+、CD8+以及NK細胞水平均呈負相關(guān)。考慮原因，可能是T淋巴細胞和NK細胞的增殖和分化受到IL-33/ST2、IL-1β介導(dǎo)的某種或某些通路的影響，水平下降，機體炎癥反應(yīng)加重，免疫防御機制減弱，這有利于梅毒螺旋體增殖復(fù)制，且IL-1β和IL-33水平越高，細胞免疫功能受限越嚴重，梅毒螺旋體復(fù)制能力越強，病情越嚴重。

綜上，早期梅毒患者血清IL-1β和IL-33水平升高，且與細胞免疫呈負相關(guān)，其可能參與了梅毒發(fā)展的免疫應(yīng)答過程，對細胞免疫具有一定調(diào)控作用，但關(guān)于其具體作用機制，還有待更進一步的探討。