新型冠狀病毒感染者T淋巴細胞亞群的改變及動態觀察

蔣 奕，胡 騰，司 果，劉 冰

(四川綿陽四○四醫院 a.感染科，b.心內科，四川 綿陽 621000)

2019年12月以來，湖北省武漢陸續出現多起不明原因肺炎患者，目前已明確為新型冠狀病毒感染導致的病毒性肺炎，部分病例出現急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)，甚至進展致多器官功能障礙，病情進展快，病死率較高。2020年2月7日發表在JAMA上的臨床研究顯示，138例新型冠狀病毒性肺炎住院患者中有26%需入住ICU，病死率高達4.3%[1]。T淋巴細胞是人體細胞免疫中重要組成部分，在病毒感染的免疫應答中有著極其重要的作用，目前發現諸多疾病的發生發展均與T淋巴細胞亞群的變化相關。為了解COVID-19患者外周血 T淋巴細胞亞群變化及其意義，本研究對18例確診COVID-19患者的外周血T淋巴細胞亞群進行檢測及動態觀察，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料本院2020年1月21日至2月17日確診的18例成年新型冠狀病毒肺炎患者，診斷和臨床分型符合《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第五版)[2]。其中重癥及危重癥3例，普通型13例，輕型2例。男10例，女6例。年齡19～75歲[(39±19)歲]。選擇同期6例健康體檢者作為正常對照組，男4例，女2例，年齡19～51歲[(31±12)歲]。體溫正常，臨床癥狀明顯好轉，肺部影像學有明顯吸收者為好轉期病例。

1.2 檢測方法入院采集外周靜脈血2 ml。EDTA抗凝，行全血細胞分析(血常規檢查)及淋巴細胞分析。全血細胞分析采用日本Sysmex XE-210血細胞分析儀及原裝配套試劑。外周血淋巴細胞亞群檢測采用Beckman FC500流式細胞儀及其配套試劑完成。運行MultiSET程序檢測T細胞，進行CD3+、CD4+、CD8+絕對值計數。CD4+計數正常范圍550～1 440個/μl，CD8+計數正常范圍320～1250個/μl。

1.3 統計學方法采用SPSS 20.0統計軟件分析數據。計量資料比較采用Kruskal-Wallis檢驗或Manu-Whitney-U檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 外周血白細胞及淋巴細胞絕對計數18例COVID-19患者外周血白細胞計數大于10×109/L 2例(11%)，小于4×109/L 3例(17%)，正常者13例(72%)；淋巴細胞絕對計數小于1.1×109/L 4例(22%)，正常者14例(78%)，平均(1.42±0.62)×109/L。其中3例重癥及危重癥患者淋巴細胞絕對計數均低于正常值。

2.2 各組T淋巴細胞亞群、淋巴細胞、白細胞檢測結果比較COVID-19重型及危重型患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T細胞、淋巴細胞與對照組比較明顯降低(P<0.05)，輕型和普通型患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T細胞與對照組比較，差異無統計學意義(P>0.05)。CD4+/CD8+比值三組之間比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組T淋巴細胞亞群、淋巴細胞、白細胞檢測結果比較

2.3 COVID-19重型及危重型患者急性期與好轉期T淋巴細胞亞群檢測結果比較由表2可見，COVID-19重型及危重型患者在發病急性期，CD3+、CD4+、CD8+T細胞絕對值相對于對照組減低(P<0.05)；好轉期與急性期各項指標比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

表2 COVID-19重癥患者急性期與好轉期T淋巴細胞亞群檢測結果比較 (%)

3 討論

2019年12月中國武漢出現的新型冠狀病毒性肺炎流行在國際上引起了廣泛關注，世界衛生組織已證實其病原是一種新型冠狀病毒COVID-19，但目前致病機理尚不明確。部分患者發病后病情快速進展，預后極為不良。通過對2003年的嚴重急性呼吸道綜合征(SARS)及之后多次流感疫情的研究，可以推測，宿主的免疫狀態可能是COVID-19感染臨床預后結局的決定因素。T淋巴細胞是免疫系統實現細胞免疫和免疫調節的主要工具，其發揮免疫應答的過程中有賴于多種細胞因子的參與?！读~刀》在線發表一項研究顯示，在COVID-19感染患者中，多數存在淋巴細胞絕對值降低，尤其是T淋巴細胞降低，部分患者在體內發生細胞因子風暴，導致ARDS和多臟器功能衰竭[3]，所以T淋巴細胞的變化趨勢對病情的預后可能有重要的提示作用，T細胞各亞群的變化也許能敏感地反映新型冠狀病毒感染的狀態與程度。

本研究觀察了18例COVID-19確診患者，結果發現，發病初期經外周全血細胞分析，淋巴細胞計數下降的比例比白細胞總數下降的比例高，在重型及危重型患者中尤為明顯，表明這種新型冠狀病毒同2003年的SARS病毒(SARS-CoV)相似，對人體免疫系統的破壞具有嗜淋巴細胞的特性，其損傷機制可能與病毒對淋巴細胞的直接損傷、誘導凋亡、細胞因子介導免疫損傷、淋巴細胞分化障礙有關[4]。

從本研究結果看，COVID-19重型及危重型患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T細胞與正常人比較均明顯降低，而輕型和普通型外周血CD3+、CD4+、CD8+T細胞相比較對照組變化不大。說明患者感染新型冠狀病毒后，其T細胞亞群的變化對病情輕重和預后的判斷可能有重要的參考價值。同時，CD4+/CD8+比值三組之間均無統計學差異，說明病毒對T淋巴細胞亞群的損傷沒有選擇性。

重癥及危重癥患者CD3+、CD4+、CD8+T細胞絕對值在發病初期即有大幅度減低，說明此類患者在發病早期(一周內)細胞免疫功能急劇下降，下降的時間窗急，甚至先于癥狀和影像的出現，提示其在發病的早期即有顯著的甚至是非常嚴重的免疫抑制或破壞，這可能是加速其病情進展的主要原因之一。

處于好轉期的重癥及危重癥患者，雖然體溫正常，臨床癥狀和肺部影像學均有改善，但外周血CD3+、CD4+、CD8+T細胞與急性期相比較并沒有明顯變化。說明雖然患者病情緩解，但其細胞免疫功能并沒有恢復。而SARS患者在感染2周后，其CD4+、CD8+細胞計數則開始明顯回升，這可能是因為SARS-CoV感染機體后，T淋巴細胞在組織和外周血之間的分布發生可逆性的改變，導致外周血T淋巴細胞數量減少，隨著病毒的逐漸清除，T淋巴細胞重新從組織中釋放出來，回到外周血中，使得短時間內外周血中T淋巴細胞數量能夠回升或恢復[5]。COVID-19患者外周血T淋巴細胞減少的機制尚不明確。其重癥患者持續細胞免疫功能低下，易導致繼發細菌、真菌感染，預后不良。但由于此組患者樣本量太小，其統計結果暫時是不確定的，須待大樣本試驗進一步明確。

本研究的意義在于，揭示了T淋巴細胞的變化對病情預警有重要的參考價值，同時在對COVID-19患者臨床救治中，給予免疫調節治療可能會減少“炎癥風暴”發生的概率，這對于降低重型及危重型的死亡率具有重大意義。