液相色譜法測定芝麻醬中乙二胺四乙酸二鈉的方法驗證

常景琿

摘要：本研究參照GB 5009.278-2016建立的液相色譜法測定食品中的乙二胺四乙酸二鈉的方法，標準曲線相關(guān)系數(shù)為0.99993，線性良好，檢出限與定量限分別為0.003g/kg、0.0065g/kg，加標回收率為91.0%～105.6%，相對標準偏差RSD為0.65%，可以滿足食品中中乙二胺四乙酸二鈉檢測的需求。

關(guān)鍵詞：液相色譜法;芝麻醬;乙二胺四乙酸二鈉

引言

乙二胺四乙酸二鈉是一種食品添加劑，其通過與食品中金屬離子螯合成穩(wěn)定的絡(luò)合物，從而達到保持食品性狀穩(wěn)定，延長食品保存時間的目的，在食品加工中主要用做防腐劑、抗氧化劑、穩(wěn)定劑、凝固劑等。然而，由于乙二胺四乙酸可與鈣、鎂等人體所必需的微量金屬形成螯合物，長期過量攝入會在一定程度上導(dǎo)致人體中微量元素流失，對人體健康造成損害，因此，世界各國對用作食品添加劑的乙二胺四乙酸二鈉均有嚴格的限量規(guī)定。我國食品安全標準GB 2760-2014 規(guī)定了乙二胺四乙酸二鈉在不同產(chǎn)品中最大使用量范圍為0.03～0.25g/kg。本研究結(jié)合本中心實驗室現(xiàn)有設(shè)備條件，參照GB 5009.278-2016建立和驗證液相色譜法測定食品中的乙二胺四乙酸二鈉，以拓展中心液相色譜檢驗領(lǐng)域。

一、材料與方法

（一）材料與設(shè)備

芝麻醬樣品購自某超市。

乙二胺四乙酸二鈉標準品由壇墨質(zhì)檢提供。

甲醇、甲酸均為色譜純;鹽酸、磷酸、四丁基溴酸銨、乙酸鈉、三氯化鐵均為分析純;實驗用水為一級水。

液相色譜儀，配紫外檢測器;電子天平;渦旋振蕩器;超聲波清洗機;pH計;混合陰離子（PXA）固相萃取柱;0.45μm微孔濾膜。

（二）實驗方法

1.試樣前處理過程

稱取試樣5g（精確到0.001g），置于50mL比色管中，加入25mL水，渦旋混勻，超聲20min，5000r/min離心5min，取上清液置于50mL比色管中。剩余殘渣重復(fù)提取一次，離心后合并上清液，加水定容至50mL。

分別取上述提取液5mL于離心管中，加入0.5mL三氯化鐵溶液，渦旋混勻1min，超聲20min，5000r/min離心5min，待凈化。

依次用5mL甲醇、5mL水活化PXA（混合陰離子固相萃取柱），將待凈化液全部上樣過柱，依次用5mL水、5mL甲醇淋洗，吹干，用5mL5%甲酸甲醇水溶液洗脫，吹干，收集洗脫液并定容至5mL，過膜供液相色譜儀測定。

2.標準系列溶液配制

參照GB 5009.278-2016《食品安全國家標準 食品中乙二胺四乙酸鹽的測定》中標準溶液配制步驟。

3.高效液相色譜條件

色譜柱：Plus-C18柱，柱長250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5.0μm;檢測器：二極管陣列檢測器;流動相：甲醇/四丁基溴化銨-乙酸鈉混合溶液（pH4.0）=15：85;流速：0.8mL/min;柱溫：35℃;波長：254nm;進樣量：10μL。

二、結(jié)果與分析

（一）線性關(guān)系及檢出限

將配制的乙二胺四乙酸二鈉標準工作系列按照上述液相色譜條件測試，繪制標準曲線，回歸方程為Area=13.63402*Amt-4.6902801，相關(guān)系數(shù)為0.99993。以3倍信噪比對應(yīng)的乙二胺四乙酸二鈉含量為檢出限，上機濃度為1μg/mL時，信噪比為10.2，當信噪比為3時，所得濃度為0.3μg/mL，計算得出乙二胺四乙酸二鈉檢出限為0.003g/kg;以10倍信噪比對應(yīng)的脫氫乙酸含量為定量限，上機濃度為3μg/mL時，信噪比為46.3，當信噪比為10時，所得濃度為0.65μg/mL，計算得出乙二胺四乙酸二鈉定量限為0.0065g/kg。

（二）加標回收率與精密度

在芝麻醬試樣中，添加低（30 mg/kg）、中（60 mg/kg）、高（150 mg/kg）三個濃度水平的乙二胺四乙酸二鈉標準溶液，按照上述前處理過程操作、液相色譜條件測試，考察其加標回收率。選取某一含有乙二胺四乙酸二鈉的芝麻醬樣品進行6次平行測定，計算RSD，考察其精密度。經(jīng)測試，該方法的加標回收率為91.0%～105.6%，RSD為0.65%，滿足GB/T 27404-2008的要求。

（三）實驗室內(nèi)部比對試驗

為確認本實驗方法的準確性，將用本法測得乙二胺四乙酸二鈉含量為30.5mg/kg的某芝麻醬，在期間精密度條件下由另一位檢驗員再次測定，測得其中乙二胺四乙酸二鈉含量為31.1μg/kg，兩次測定絕對差值/算術(shù)平均值為0.2%，符合GB 5009.278-2016的規(guī)定。

三、結(jié)論

本方法參照國標方法建立的液相色譜法測定芝麻醬中乙二胺四乙酸二鈉的檢測方法，準確度高、精密度、靈敏度高、重現(xiàn)性好，且操作較為簡單，干擾少，所用試劑毒害性低，可為基層食品安全監(jiān)管提供檢測方法和技術(shù)支撐， 對強化食品添加劑監(jiān)管，保障食品安全具有實際意義。

參考文獻：

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