讓冰凍切片近似石蠟切片的制作方法

吳清萍

【摘要】目的：為改進傳統的操作理念讓冰凍切片更接近石蠟切片的組織結構，以保證術中冰凍切片的高診斷率。方法：本文強調新鮮活體組織取材后迅速凍結，通過恒溫式冰凍切片機切片，HE染色。結果：鏡下組織結構清楚，形態清晰，細胞核、漿色彩鮮艷對比分明，無脫片和冰晶現象產生，近似石蠟切片。結論：要獲得一張高質量的冰凍切片，必須加強責任心，在日常工作中不斷學習，掌握關鍵性技術操作要領，為提高病理診斷率提供更有利的條件。

【關鍵詞】冰凍切片;制片;染色

【中圖分類號】R736.1 【文獻標識碼】A

冰凍切片是借助低溫恒冷條件使組織迅速凍結達到一定硬度進行切片的一種方法，具有快速方便的特點，而大范圍用于臨床手術中的快速病理診斷[1]。術中確診病變性質，是決定手術范圍的依據。因此，制作優質的冰凍切片至關重要。這就要求每個病理技術員不僅要有高度的責任心，還要有熟練的技術，用最短的時間，制作最優的切片。我科在工作中不斷改進，摸索出一種制片效果比較滿意的冰凍切片制作方法，從而保證了冰凍切片更接近石蠟切片的組織結構。

1材料與方法

1.1一般材料

1.1.1冰凍切片機和包埋劑

采用德國LEICA CM 1950冷凍恒溫切片機。包埋劑使用聚乙二醇和聚乙烯醇（OCT）。

1.1.2試劑

95%乙醇、蘇木素染液、伊紅染液、1%鹽酸乙醇、梯度乙醇、二甲苯、樹膠。

1.1.3組織標本

組織來源于2019年全年完成冰凍切1112例。

1.1.4其他材料

一次性刀片、細頭毛筆、硬毛刷、鑷子、組織托，玻片及蓋玻片。[2]

1.2方法

取新鮮活體組織，組織的取材大小<15mm×15mm×3mm為宜，取材使用的工具避免沾濕水。將取材好的組織用擦手紙包繞并稍用力擠壓，使其盡量吸附組織表面的血跡或其他液體及組織間液[2]。然后置標本于制冷臺上，凍頭上先加少量膠，等稍凝固再放上組織，同時再加膠。冰凍后切片，冷風稍吹干，迅速入固定液（95%乙醇）加溫（40℃）固定10s，水洗15s，蘇木素染核2分鐘，水洗15s，1%鹽酸乙醇分化1s，水洗返藍2分鐘，入酒精性伊紅1s，95%乙醇和無水乙醇脫水，二甲苯透明，樹膠封片。

2結果

使用該方法制作的冰凍切片質量好，無皺褶，結構完好，未見冰晶。染色鮮艷，鏡下組織結構和細胞形態清晰，細胞核、漿對比分明，細胞均無腫脹、無萎縮，封片無溢膠和氣泡，近似石蠟切片圖（1，2）。

3討論

冰凍切片在組織學技術中應用范圍較廣，在冰凍切片過程中規定20～25min內完成制片[3]，對臨床手術的快速診斷其意義更大。同時，病理術中冰凍切片診斷準確率直接反映出病理科面對風險的能力以及間接反映出醫院的手術水平。若要提高和保持較高的準確率，病理技術員很關鍵。因此，保證和提高制片質量是每個技術員的責任。我們以此為目標，從以下5個操作環節加以改進：

3.1溫度 冰凍溫度是影響冰凍切片的關鍵。我科冰凍切片機在待機時凍臺和凍頭溫度均設在-18℃，在冰凍切片時，根據不同的組織來設定溫度：腮腺組織設置溫度在-18℃～-16℃;腦組織、淋巴結組織設置溫度在-22℃～-18℃[4];甲狀腺溫度不宜過低在-18℃～-15℃[5];乳腺組織設置溫度在-22℃～-18℃;子宮設置溫度在-20℃-18℃;脂肪組織適宜在-35℃[6]。

3.2冰凍時間 組織冰凍時間不夠就切片，不容易成片或者細胞結構模糊，如果冰凍時間過長切片容易產生龜裂或細胞嚴重收縮。機器溫度的設定，組織的性質、大小厚度，直接影響冰凍時間。因此建議當OCT膠最表面或組織表面凍到發白或凝固后馬上進行修片。

3.3包埋 冰凍頭上先加入少量OCT膠，然后再放組織，同時在組織周圍添加OCT膠，將組織完全置入膠內，這樣可以防止切片時組織邊緣卷起或產生皺褶。

3.4固定 冰凍切片切好后，用吹風機冷風稍吹干，立即放入加溫（40℃）95%乙醇固定液中，避免在空氣中放置時間過長。長時間放置在空氣中，鏡下觀察冰凍切片時細胞有云霧感，組織結構不清晰。

3.5染色 染色時盡量保證染液的新鮮，我們將酒精性伊紅染液50%稀釋，使細胞漿顏色不會太深。細胞核、漿色彩鮮艷對比分明，鏡下組織結構清楚，細胞形態清晰。

如何做好術中冰凍切片，這一領域還有許多值得探討的空間。總之在日常的工作中不斷學習，積累和提高，掌握關鍵性技術操作要領，加強責任心，讓冰凍切片更接近石蠟切片的組織結構，為提高病理診斷提供更有利的條件。

參考文獻：

[1]鄧江，黎相照。固定液溫度對冰凍切片質量的影響。中國實用醫藥，2020（15）22，202-204.

[2]黃燚彬。冰凍切片制片的細節要點總結。實用醫技雜志，2020（27）06，792-793.

[3]楊霞。常用冰凍固定液對冰凍制片效果的差異分析。養身保健指南，2018（7）：238

[4]黃躍，張睿，吳德江等。冰凍切片的制作。現代醫藥衛生，2017，33（21）：3358-3359.

[5]賀德智。淺談如何制作優良的甲狀腺冰凍切片。基層醫學論壇，2016，20（22）：3167-3168

[6]胡垚。富含脂肪及淋巴組織的冰凍切片制片體會。哈爾濱醫藥，2015，35（3）：200-202