高效液相色譜法同時測定食品中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸

【摘 ?要】建立一種高效液相色譜同時測定食品中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸的方法，實驗選擇條件是賽默飛ACES C18 Plus反相色譜柱（250*4.6 *5um），柱溫30℃，甲醇與0.02mol/L乙酸銨水溶液比例為5：95，流速為1.00mL/min，PDA檢測器，在波長為230nm下檢測，該方法樣品前處理簡單，回收率、精密度和準確度良好，在常規檢測中非常實用。

【關鍵詞】高效液相色譜、安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉

脫氫乙酸

食品添加劑是添加到食品中以保持風味或增強口感，改善外觀或其他品質的物質。食品添加劑用途可以分為防腐劑、甜味劑、著色劑，增稠劑等。食品安全國家標準《食品添加劑使用標準GB 2760-2014》規定了不同食品中可以使用的食品添加劑的種類和限量，按照標準要求，使用添加劑對食品工業發展、食品安全、延長食品保質期有重要的作用，但是違規使用或超量使用添加劑就會給人體帶來危害。目前測定食品添加劑的方法主要有氣相色譜法，液相色譜法，氣相色譜質譜連用法，液相色譜質譜連用法等。本文涉及的五種食品添加劑主要是運用高效液相色譜法，根據食品安全國家標準食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的測定（GB 5009.28-2016）、食品安全國家標準食品中脫氫乙酸的測定（GB 5009.121-2016）、飲料中乙酰磺胺酸鉀的測定（GB/T 5009.140-2003），對于同一食品樣品，需要多個標準，進行多次檢驗，效率較低，給基層工作者帶來很大的工作難度。需建立一種簡單、通用的方法，能同時測定多種食品添加劑。對比國標方法本法案具有，前處理步驟簡單、回收率高、方法穩定性好、靈敏度和準確度高等優點。

1材料與方法：

1.1儀器設備

1、高效液相色譜儀（配二極管陣列檢測器，Thermo scientific ultiMate 3000）2、KQ3200DE型數控超聲波清洗器3、METTLER TOLEDO酸度計4、ELITIST 21K-R 高速冷凍離心機5、天津天馬衡基萬分之一的天平。

1.2材料與試劑

1、安賽蜜：濃度1.00mg/mL（中國計量科學研究院;2、苯甲酸：濃度1.00mg/mL（中國計量科學研究院;3、山梨酸：濃度1.00mg/mL（中國計量科學研究院4、糖精鈉;濃度1.00mg/mL（中國計量科學研究院5、脫氫乙酸（Dehydroacetic Acid，25G，CAS：520-45-6）（純度98%）6、甲醇：（色譜純，美國Fisher公司7、氨水（優級純）8、無水乙醇（分析純）9、正己烷（分析純）9、超純水

（1）脫氫乙酸（98.0%）儲備液。用10mL 20g/L的氫氧化鈉溶液溶解，加水配置成1.00mg/mL的儲備液。

（2）0.02mol/L乙酸銨溶液。稱取1.54g優級純的乙酸銨用水溶解后定容至1000mL，經0.22um濾膜過濾超聲后備用。

（3）220g/L乙酸鋅溶液，稱取220g分析純乙酸鋅溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，用水定容至1000mL.

（4）106g/L亞鐵氰化鉀溶液。稱取106g亞鐵氰化鉀用水定容至1000mL.

（5）20g/L氫氧化鈉溶液。稱取20g分析純氫氧化鈉用水溶解后定容至1000mL.

（6）氨水溶液（1+99）.取氨水1mL，加99mL水中，混勻。

實驗方案：

1.3試驗方法

1.3.1色譜柱：（ACES C18Plus 250*4.6 SN：4F30809），流動相：甲醇：乙酸銨=5：95，總流速：1.00mL/min，柱壓：69MPa，柱溫：30℃，檢測波長：230nm，進樣體積：10uL，采集時間：25min.

1.3.2標準溶液的配制：

分別準確吸取安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸標準儲備液（1000mg/L）各10mL于100mL容量瓶中，用水定容成混合標準中間溶液（100mg/L）.分別準確吸取混合標準儲備液0.0、0.10、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成質量濃度為：0.00、1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、100mg/L，經0.22um水系濾頭過濾后上機檢測，繪制標準曲線。

樣品前處理：

（1）液體樣品：碳酸飲料、配制酒、醬油、醋等液體樣品，稱取混勻樣品2-5g（精確至0.0001g），放入50mL的比色管中，用水定容至刻度，混勻，過0.22um微孔濾膜過濾，濾液待機分析，含蛋白較多的液體樣品各加5mL的亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉淀蛋白。

（2）固體樣品：含油脂較多的試樣，精確稱取2-5g試樣于100mL比色管中，加10mL正己烷，于60水浴加熱5min，輕搖以溶解脂肪，然后加氨水溶液（1+99）50mL，無水乙醇2mL，棄去有機相，水相轉移至100mL比色管中。一般固體試樣精確稱取2-5g樣品于100mL的比色管中，加入50mL的水，搖勻浸泡30min.分別在上述樣液中各加5mL的亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉淀蛋白，最后定容、靜置，取上層液經0.22um水系濾頭過濾后上機。采用外標準與標準曲線比較定量。待測樣液待測組分濃度應在標準曲線范圍內，超出曲線應將樣液稀釋后再進行分析。

結果計算：樣中待測組分含量的計算公式如（1）所示。

式（1）中，X為試樣中待測組分含量，g/kg。

c為由標準曲線得出的試樣中待測物的質量濃度，mg/L.

v為試樣定容體積，mL.

1000為mg/kg轉換為g/kg的換算因子。

2 實驗結果與分析：

2.1波長選擇

實驗中對安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸5種添加劑進行波長掃描，發現最大吸收波長分別在：225.4nm、219.2nm、228.7nm、255.0nm、310.8nm處（其中脫氫乙酸的最大吸收波長310.8nm處有干擾，而次級波長為230.2nm），綜合考慮各組分的靈敏度，本實驗選擇的波長為230nm.

2.2流動相選擇

如果選乙腈和0.02mol/L乙酸銨水溶液為流動相時，由于乙腈洗脫能力強，還沒分離就被沖了下來。無法達到分離效果。如果提高甲醇比例，會使糖精鈉和脫氫乙酸疊加在一起。實驗中采用甲醇與0.02mol/L乙酸銨水溶液做流動相，流速為1.0mL/min.甲醇與乙酸氨水溶液流動相比例為5：95時，分離效果最好。

2.3 線性回歸方程、檢出限和回收率

將配制好的標準曲線上機分析，得到每種物質線性方程，在線性范圍內較好，相關系數R均大于0.998，以3倍噪聲為檢出限，以飲料為代表樣品，添加低水平的5種混標，每個水平重復測定6次，計算平均回收率和精密度，結果見表1。5種添加劑的加標回收率為96.4%-98.5%，相對標準偏差為1.02%-1.89%。

3 結論：

本文建立一種同時測定食品中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸5種食品添加劑的液相色譜法，解決了國家標準不能同時檢測的弊端，適用范圍基本上覆蓋了所有食品類別，通過二極管檢測器對定性結果做了進一步論證，提高了檢測結果的準確性，該方法耗時短，操作簡單，適用于樣品的快速檢驗，可作為國家標準的補充進行推廣。

參考文獻：

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[3]中華人民共和國衛生部GB/T 5009.121-2016食品中脫氫乙酸的測定[S]。北京中國標準出版社，2016。

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[7]張春玲.高效液相色譜法同時測定食品中的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉[J]，中國衛生檢驗雜志，2007，17（5）：936-937.

作者簡介：

劉曉霞（1981年-），女，山西臨汾人，臨汾市綜合檢驗檢測中心工程師，大學本科。