頸動(dòng)脈粥樣硬化患者中血清Lp-PLA2、CD147的表達(dá)及意義

譚紅 朱紅霞 張可帥

腦血管病是我國(guó)臨床發(fā)病率最高的疾病之一，其中約4/5 是缺血性腦卒中，而頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊潰瘍、破裂及脫落是誘發(fā)缺血性腦卒中的主要原因［1］。因而，對(duì)頸動(dòng)粥樣硬化斑塊破裂風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估及合理的干預(yù)對(duì)改善患者的預(yù)后具有重要意義。既往研究顯示［2-3］，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊發(fā)生、發(fā)展與炎癥反應(yīng)關(guān)系密切，炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定的原因之一。脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（Lipoprotein-associated phospholipase A2，Lp-PLA2）是新發(fā)現(xiàn)的炎癥因子，可參與血栓形成及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生、發(fā)展［4］。CD147 為高糖基化的跨膜蛋白，歸屬于免疫球蛋白超家族；研究［5］提示動(dòng)脈硬化標(biāo)本檢測(cè)到CD147 高表達(dá)，能夠在動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中分泌及活化MMP，進(jìn)而降解細(xì)胞外基質(zhì)，造成斑塊的易損性，但具體臨床意義研究資料缺乏。因此，本文以Lp-PLA2、CD147 為切入點(diǎn)，探討它們?cè)陬i動(dòng)脈粥樣硬化患者血清中的表達(dá)，并進(jìn)一步研究它們對(duì)斑塊穩(wěn)定性的評(píng)估價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月至2019年2月在本院治療的頸動(dòng)脈粥樣硬化狹窄患者87 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成及狹窄經(jīng)超聲診斷明確；②患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有其他系統(tǒng)惡性腫瘤；②合并有免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病、急慢性感染等；③既往腦卒中病史；④不能規(guī)律治療或隨訪。患者入選后按頸動(dòng)脈粥樣斑塊特點(diǎn)分為穩(wěn)定斑塊組（n=42）及不穩(wěn)定斑塊組（n=45）。另外，同時(shí)選取健康志愿者50 例作為對(duì)照組，各組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1。

1.2 頸動(dòng)脈粥樣斑塊評(píng)估方法

頸動(dòng)脈采用西門(mén)子ACUSON X150 彩色多普勒超聲診斷儀進(jìn)行頸動(dòng)脈掃描，患者仰臥位，頭偏向?qū)?cè)，分別自前位、側(cè)位、側(cè)后位和后側(cè)位進(jìn)行掃描，探頭自頸根部向頭側(cè)移動(dòng)，分別掃描頸總動(dòng)脈、分叉部及頸內(nèi)動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈，并測(cè)量管徑、血流特點(diǎn)、斑塊形態(tài)、回升特點(diǎn)進(jìn)行分類(lèi)（扁平斑：管壁偏心性增厚，血管壁結(jié)構(gòu)原有三層結(jié)構(gòu)破壞，內(nèi)膜光滑，斑塊回聲較為均勻；軟斑：斑塊表現(xiàn)為混合型回聲，內(nèi)膜表面存在連續(xù)光滑纖維帽回聲；硬斑：斑塊出現(xiàn)纖維化或鈣化，部分回聲增強(qiáng)或強(qiáng)回聲，后方回聲衰減或伴聲影；潰瘍斑：斑塊超聲形態(tài)不規(guī)則，表面不光滑。扁平斑塊及硬斑塊為穩(wěn)定型斑塊，軟斑及潰瘍斑為不穩(wěn)定型斑塊）［6］。

表1 3 組一般資料比較Table 1 Comparison of general data between 3 groups［n（%），（±s）］

表1 3 組一般資料比較Table 1 Comparison of general data between 3 groups［n（%），（±s）］

組別穩(wěn)定斑塊組不穩(wěn)定斑塊組對(duì)照組F/χ2值P 值n 42 45 50男/女22/20 23/22 26/24 0.217 0.897年齡（歲）60.12±9.46 59.84±9.17 59.06±8.12 0.632 0.729高血壓21（50.0）23（51.1）24（48.0）1.452 0.484糖尿病8（19.1）9（20.0）10（21.4）0.090 0.956

1.3 Lp-PLA2 及CD147 檢測(cè)

患者及對(duì)照組入選后，采集空腹靜脈血4 mL置于Ep 管中，3 000 r/min 離心10 min 后取上清，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)血清Lp-PLA2 和血清CD147 水平。采用Lp-PLA2 試劑盒（南京建成生物研究所，規(guī)格：48T/96T，批號(hào)：20151206）、人CD147 ELISA 試劑盒購(gòu)（上海科順生物科技有限公司，規(guī)格：96T/48T，批號(hào)：20170913）。檢測(cè)儀器為T(mén)hermo Multiskan FC 酶標(biāo)儀（賽默飛世爾公司，型號(hào)：Multiskan FC），檢測(cè)波長(zhǎng)為450 nm，實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 22.0 軟件，計(jì)量資料采用（±s）表示，兩組間比較使用t檢驗(yàn)，三組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)分析，繪制ROC 曲線評(píng)估指標(biāo)預(yù)測(cè)小效能，P<0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組和對(duì)照組Lp-PLA2、CD147 水平比較

觀察組血清Lp-PLA2、CD147 明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），不穩(wěn)定斑塊組血清Lp-PLA2、CD147 明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

表2 三組Lp-PLA2、CD147 水平比較（±s）Table 2 Comparison of Lp-PLA2 and CD147 levels in 3 groups（±s）

表2 三組Lp-PLA2、CD147 水平比較（±s）Table 2 Comparison of Lp-PLA2 and CD147 levels in 3 groups（±s）

組別不穩(wěn)定斑塊組穩(wěn)定斑塊組對(duì)照組F 值P 值n 42 45 50 Lp-PLA2（g/L）14.86±4.22 9.46±3.27 6.12±1.30 19.074 0.000 CD147（ng/L）115.63±32.21 79.54±18.76 51.12±13.15 14.285 0.000

2.2 頸動(dòng)脈粥樣硬化患者血清Lp-PLA2 及CD147 水平相關(guān)性分析

頸動(dòng)脈粥樣硬化患者血清Lp-PLA2 與CD147 水平呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系（r=0.443，P<0.05）。見(jiàn)圖1。

圖1 頸動(dòng)脈粥樣硬化患者血清Lp-PLA2 與CD147相關(guān)性分析Figure 1 Correlation Analysis of Lp-PLA2 and CD147 in patients with carotid atherosclerosis

2.3 血清Lp-PLA2 及CD147 對(duì)頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定的評(píng)估價(jià)值

ROC 曲線顯示Lp-PLA2+CD147 評(píng)估頸動(dòng)脈粥樣斑塊不穩(wěn)定的AUC 值最高，提示Lp-PLA2、CD147 聯(lián)合檢測(cè)優(yōu)于單獨(dú)檢測(cè)。見(jiàn)表3、圖1。

表3 血清Lp-PLA2 及CD147 對(duì)頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定的評(píng)估Table 3 Evaluation of serum Lp-PLA2 and CD147 on carotid atherosclerotic plaque instability

圖1 ROC 曲線分析圖Figure 1 ROC curve analysis

3 討論

動(dòng)脈粥樣硬化與腦卒中的關(guān)系極為密切［7-8］，約半數(shù)腦卒中患者發(fā)病是由動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定引起的。因此對(duì)頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性進(jìn)行充分的評(píng)估在腦血管疾病防治中具有極為重要的意義。頸動(dòng)脈粥樣斑塊的形成與高血壓、免疫反應(yīng)等因素有關(guān)，但斑塊不穩(wěn)定的機(jī)制目前尚不完全清楚。有研究提示［9-10］，斑塊內(nèi)新生血管形成是造成斑塊不穩(wěn)定的主要原因。新生血管由于血流速度慢、管腔詳細(xì)且位于斑塊深部，常規(guī)的超聲檢查檢測(cè)新生血管較為困難。因而探尋高準(zhǔn)確度、靈敏度和特異性的相關(guān)因子對(duì)頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的診斷、預(yù)防和病情評(píng)估具有重要意義。

Lp-PLA2 是重要的炎性標(biāo)志物，是腦血管疾病和冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素［11］。國(guó)外研究［12］發(fā)現(xiàn)冠心病患者多存在CD147 的高表達(dá)，認(rèn)為高水平的CD147 能夠刺激成纖維細(xì)胞或平滑肌細(xì)胞分泌和釋放MMP，進(jìn)而加速動(dòng)脈硬化的發(fā)展。國(guó)內(nèi)的研究［13］也發(fā)現(xiàn)了急性心血管事件與CD147 具有相關(guān)性并通過(guò)他啶類(lèi)藥物的干預(yù)能夠降低頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊患者機(jī)體CD147 水平。本研究結(jié)果提示Lp-PLA2、CD147 在頸動(dòng)脈粥樣斑塊的形成及進(jìn)展過(guò)程中具有重要的作用。在ROC 曲線分析中發(fā)現(xiàn)，Lp-PLA2、CD147 及Lp-PLA2+CD147 對(duì)粥樣斑塊具有良好的預(yù)測(cè)價(jià)值，說(shuō)明聯(lián)合檢測(cè)血清Lp-PLA2 和CD147，能夠有效的對(duì)頸動(dòng)脈粥樣斑塊不穩(wěn)定進(jìn)行評(píng)估和預(yù)測(cè)。

研究發(fā)現(xiàn)［14］，Lp-PLA2 能夠增強(qiáng)單核巨噬細(xì)胞介導(dǎo)炎癥反應(yīng)作用，降低低密度脂蛋白膽固醇氧化磷脂水平，進(jìn)而造成機(jī)體氧化應(yīng)激水平升高和血管內(nèi)皮損傷，可能導(dǎo)致粥樣斑塊的破裂。Lp-PLA2 與相關(guān)產(chǎn)物代謝后能夠產(chǎn)生血小板源性生長(zhǎng)因子、白細(xì)胞介素等多種炎癥介質(zhì)，上述因子相互促進(jìn)、相互聯(lián)系，形成Lp-PLA2 介導(dǎo)的信號(hào)通路，進(jìn)而參與形成頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊［15］。相關(guān)文獻(xiàn)［16］提示CD147 參與動(dòng)脈硬化的機(jī)制可能加快單核細(xì)胞的黏附和趨化、介導(dǎo)血管生成，進(jìn)而促進(jìn)平滑肌的增殖，本研究發(fā)現(xiàn)不同性質(zhì)斑塊的CD147 存在差異，斑塊易損性升高后血清CD147水平升高，因而CD147 可在一定程度上反映斑塊的穩(wěn)定性。

本研究結(jié)果顯示，血漿Lp-PLA2 和血清CD147 呈正相關(guān)。該結(jié)果說(shuō)明頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊患者血清Lp-PLA2、CD147 存在關(guān)聯(lián)性，可通過(guò)某種機(jī)制相互作用。Lp-PLA2 可介導(dǎo)細(xì)胞因子使頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶，降級(jí)的纖維帽的膠原基質(zhì)和平滑肌細(xì)胞，使斑塊更易破裂、脆弱［17］。一方面，CD147 能夠促進(jìn)白細(xì)胞和血小板的聚集，激活炎癥反應(yīng)并促進(jìn)炎癥介質(zhì)的分泌；另一方面，CD147 作為細(xì)胞金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子，能夠降解細(xì)胞基質(zhì)，產(chǎn)生金屬蛋白酶，使內(nèi)皮下纖維帽的溶解，增加斑塊易損性［18］。因而，血清Lp-PLA2 和CD147 相互作用，形成一個(gè)正反饋，進(jìn)一步加重頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的易損性。

綜上所述，頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊患者血清Lp-PLA2、CD147 明顯升高，與斑塊性質(zhì)有一定關(guān)系，兩者間存在正相關(guān)性。