生鮮乳抗生素殘留檢測技術研究

摘 要：目的：研究生鮮乳抗生素殘留檢測技術。方法：本研究選擇4個養殖場作為研究對象，抽取80份生鮮乳樣品進行抗生素殘留檢測，主要結合當前生鮮乳抗生素殘留檢測要求、生鮮乳抗生素殘留檢測技術發展趨勢，提出生鮮乳抗生素殘留檢測技術（TTC法），以此來為獸用抗生素規范用藥提供參考，致力于提升生鮮乳抗生素殘留檢測技術水平，保障生鮮乳食品的安全性。結論：TTC法作為臨床常用的一種微生物檢測法，其能有效應用于生鮮乳抗生素殘留檢測，且操作簡單、成本低，值得推廣應用。

關鍵詞：生鮮乳;抗生素殘留;檢測技術;措施

Abstract：Objective： To study the detection technology of antibiotic residues in fresh milk. Methods： in this study， four farms were selected as the research object， and 80 samples of fresh milk were selected for antibiotic residue detection. Combined with the current requirements of antibiotic residue detection in fresh milk and the development trend of antibiotic residue detection technology in raw and fresh milk， TTC method was proposed to provide reference for the standardized use of antibiotics for veterinary use The detection technology level of antibiotic residues in fresh milk can ensure the safety of fresh milk food. Conclusion： TTC method， as a commonly used microbial detection method， can be effectively applied to the detection of antibiotic residues in fresh milk， with simple operation and low cost， which is worthy of promotion and application.

Key words：Fresh milk; Antibiotic residue; Detection technology; Measures

中圖分類號：S859.84

現階段，生鮮乳中存在的抗生素殘留問題是最為主要的藥物殘留因子。根據實際情況進行分析，發現在奶牛飼養、產品加工過程中仍舊存在濫用或者大量應用抗生素問題，其必然會導致奶制品存在抗生素殘留問題，嚴重威脅人們的身體健康[1]。從來源層面進行分析，生鮮乳抗生素殘留的來源：①養殖場治療泌乳期乳牛疾病選擇抗生素進行治療，抗生素會從乳牛體內逐漸進入乳腺，并在乳腺中殘留。根據有關統計數據可知，在使用抗生素治療后的5 d內，奶牛產的奶中都存在抗生素殘留。②為有效預防奶牛疾病，同時提高產奶量，部分養殖戶會在飼料中添加抗生素，引發抗生素殘留問題。③因為養殖場管理工作不完善，在擠奶、儲奶方面沒有嚴格落實對應的衛生制度，或是配套設施不夠完善，也會因為人為添加因素引發抗生素殘留問題[2]。對生鮮乳抗生素殘留問題，不僅需要加強飼養管理、監管，同時還需要科學合理的應用生鮮乳抗生素殘留檢測技術，提升檢測的精準度，以此來有效控制生鮮乳的抗生素殘留問題，保障生鮮乳的安全性。

1 材料與方法

1.1 樣品選擇

本研究分別選擇A、B、C和D共4個養殖場，隨機選擇80份生鮮乳樣品，其中A區16份樣品，B區24份樣品，C區20份樣品，D區20份樣品。

1.2 菌種、試劑以及儀器

菌種：嗜熱乳酸鏈球菌;培養基：MC培養基;試劑：TTC（2，3，5一氯化三苯基四氮唑）;儀器：滅菌試管、滅菌吸管、100 ℃溫度計、天平、恒溫培養箱、水浴鍋、溫箱。

1.3 檢測方法

（1）生鮮乳抗生素殘留檢測技術。選擇GB 5409-

1985TTC法進行檢測。綜合參考生鮮乳抗生素殘留檢測要求，先在生鮮乳制品中融入菌種，進行一段時間培養后，接著融入TTC指示劑，最終試劑會呈現出多種顏色，以此來明確生鮮乳樣品當中存在的抗生素[3]。生鮮乳樣品當中的菌種沒有增殖情況，則不會出現還原顯色情況;而生鮮乳樣品當中的菌種能夠增殖的情況下，則會呈現為紅色。

（2）生鮮乳樣品采樣處理。每類生鮮乳樣品選擇500 mL，進行消毒處理以后，將瓶蓋蓋上，選擇25 mL作為備檢樣品，將其置入225 mL滅菌生理鹽水當中，均勻搖晃處理。將實驗室溫度控制為15 ℃，

3 500 r·min-1離心10 min。在進行離心處理后，去掉最高層脂肪，然后將下面的脫脂乳放入其他裝置當中，進行保存。

（3）菌種移種（嗜熱鏈球菌）。脫脂乳為培養基，將其置入恒溫培養箱中培養，溫度36 ℃，培養15 h，接著針對脫脂乳進行滅菌處理，遵循1∶1的比例實施釋放、儲存。

（4）試驗指示劑進行調制處理。稱取標準品TTC1 g，將其放入燒杯當中，然后在燒杯當中倒入24 mL蒸餾水。等到混合均勻以后，將其放入棕色瓶，放置于7 ℃的環境中。在實際使用進程中，需要按照1∶5的比例進行稀釋處理。倘若使用前溶液顏色為淡褐色、玉色，表示其變質，不能用于檢測。

1.4 檢測流程

①生鮮乳樣品加熱處理。將前面環節制作好的生鮮乳樣品取出9 mL，將其倒入試管（16 mm×160 mm），通過水浴進行加熱，使其溫度達到80 ℃的恒溫，持續5 min，等到加熱完成以后，自然冷卻到37 ℃。②接種處理。把1 mL活性菌液置入水浴（36±1）℃當中進行培養，培養時間需要達到2 h。③顯色處理。按照1∶5的比例，針對TTC指示劑（4%濃度）實施稀釋處理，選擇稀釋完的溶液0.3 mL，將其置入水浴培養，進行0.5 h的培養處理，并觀察培養之后的顏色。④復檢處理。對于復檢的生鮮乳樣品，準備一式2份，若第一次檢測結果屬于陽性，則需要實施二次檢測處理。與此同時，還需要進行陰陽性對照組對比分析。對于陰性對照組來說，主要是在沒有抗生素的生鮮乳（9 mL）當中添加菌液;對于陽性對照組來說，主要是在在沒有抗生素的生鮮乳（8 mL）當中添加TTC、抗生素、菌液[4]。

1.5 試驗判斷處理

對生鮮乳抗生素殘留檢測結果判斷來說，即完成1.4中前3步檢測流程后，觀察培養液顏色變化情況。整個結果判斷要快速，進行避光處理。若生鮮乳樣品中存在抗生素殘留情況，通過融入菌液培養，細菌不會增殖，由于添加的指示劑不會被還原，這就使得顏色不會發生變化;若生鮮乳樣品中沒有抗生素殘留情況，通過融入菌液培養，細菌會出現增殖情況，由于添加的指示劑被還原，則導致培養液轉變為紅色。

2 結果與分析

此次A、B、C和D共4個抽樣地點所選取的80份生鮮乳樣品，其中A養殖場2份陽性，C養殖場4份陽性。此外，還存在4份可疑陽性，B養殖場與C養殖場各2份。具體檢查結果見表1。

針對本研究檢測結果存在的4份可疑陽性樣品實施再次檢驗，最終確定均屬于陰性。從整體檢查結果來分析，此次檢查的生鮮乳樣品陽性為6份，生鮮乳抗生素殘留檢查結果為7.5%。

3 討論

根據本研究生鮮乳抗生素殘留檢測結果來看，綜合參考農業部《無公害食品生鮮牛乳行業標準》，其明確提出生鮮乳衛生標準為抗生素不得檢出[5]。由此可以看出，當前部分養殖場在質量管理工作方面還存在一定的疏漏，包括市場監管、食品安全監管等領域，因此加強生鮮乳抗生素殘留監管勢在必行。需積極分析生鮮乳抗生素殘留檢測工作常見影響因素，致力于加強生鮮乳抗生素殘留檢測工作的同時，全面加強生鮮乳監管力度。

3.1 生鮮乳抗生素殘留檢測影響因素及控制措施

對生鮮乳抗生素殘留檢測來說，存在諸多因素影響最終的監測結果，包括實驗環境、設備因素、人為操作等。對實驗室管理來說，內部環境、各實驗平臺均需要嚴格按照要求進行清潔、消毒處理，同時選擇的各種儀器設備均需要按照要求進行檢定、校正，保障儀器設備本身的規范性[6]。與此同時，生鮮乳抗生素殘留檢測涉及的各個玻璃器皿均需要進行滅菌處理，通常需要在121 ℃的環境中進行0.5 h的滅菌處理。

3.2 加大養殖場監督管理工作的措施

綜合參考上文所述生鮮乳抗生素殘留的原因，制定針對性的養殖場監督管理措施：①基于規范疫苗防治各種疫病。各個養殖場在進行疫病防治的進程中，需要全面強化疫病監測、診斷工作，綜合參考養殖場各個地區常見疫病類型，結合對應的監測依據，按照要求選擇疫苗開展預防工作，保障各種疫病的未病先防。如果在已經發生疫病的情況下，若診斷尚不夠明確，則需要控制抗生素的應用，等到明確確診以后，再嚴格按照要求進行治療。②提升奶牛飼養管理水平。對奶牛飼養管理不當所引發的生鮮乳抗生素殘留問題，必需全面加強奶牛飼養管理工作，減少奶牛發生疾病幾率。具體來說，對奶牛的飼養來說，需要開展分階段、分群體標準飼養管理，同時有關的飼料也需要嚴格按照要求進行科學搭配、合理應用，并且需要參考奶牛狀態、季節差異性進行飼料的搭配，保障飼料能有效滿足不同階段奶牛對于營養的需求。③落實抗生素藥敏試驗工作。養殖場在需要使用抗生素的情況下，必需要嚴格按照要求落實抗生素藥敏試驗工作，避免盲目使用抗生素的問題，從而有效提升抗生素使用的科學性、規范性，保障臨床治療效果。④加大環境衛生控制力度。綜合參考奶牛健康養殖方面的要求及有關標準，分別針對養殖場涉及的圈舍、布局、場址、設施等領域實施優化，保持養殖場的清潔、干凈，避免環境對奶牛養殖造成二次污染問題。

參考文獻：

[1]王 婷，陳明濤.基于多反應監測模式下的超高效液相色譜-串聯質譜法檢測動物源性食品中19種氟喹諾酮類抗生素殘留[J].食品安全導刊，2020（7）：66-70.

[2]張 睿，劉 妤，金麗瓊，等.不同凈化方式在聚醚類抗生素殘留檢測中應用[J].食品與發酵科技，2020，56（1）：116-119.

[3]李周敏，李心愛，姚開安，等.可視化蛋白芯片法同時檢測牛奶中喹諾酮類抗生素殘留的含量[J].藥物分析雜志，2019，39（6）：1139-1147.

[4]方 靈，韋 航，黃 彪，等.超高效液相色譜-串聯質譜法同時測定牛奶中38種抗生素殘留[J].分析測試學報，2019，38（6）：681-686，692.

[5]劉彥東，張 權，陳文生，等.高效液相色譜法比較3種固相萃取柱凈化對乳品中8種抗生素殘留檢測的影響[J].分析測試學報，2015，34（3）：362-366.

[6]舒黛廉，王 玨.乳及乳制品中抗生素殘留微生物檢測法研究進展及其控制措施[J].中國畜牧獸醫，2008（1）：74-77.

作者簡介：鐘紅萍（1991—），女，助理工程師;研究方向為生鮮奶抗生素檢測。