試析高效液相色譜法測(cè)定啟脾丸中橙皮苷的含量

孫未娜

【摘 ?要】目的：對(duì)高效液相色譜法測(cè)定啟脾丸中的橙皮苷的含量進(jìn)行測(cè)定。方法：在測(cè)定的方法中使用的色譜柱為ZORBAX Eclipse XDB-C 18（4.6 mm×150 mm，5μm），其流動(dòng)相為0.2molL-1醋酸銨-冰醋酸-甲醇的比例為57.24∶2.76∶40，柱溫為23度，設(shè)置成流速為0.8ml min-1，最后檢測(cè)其波長(zhǎng)的長(zhǎng)度為285nm，進(jìn)樣量使用的是外標(biāo)峰面積法進(jìn)行定量。結(jié)果：經(jīng)過測(cè)試后發(fā)現(xiàn)橙皮苷的保留時(shí)間可以達(dá)到5.6min，進(jìn)樣量在0.04μg～0.36μg之間，具有良好的內(nèi)線性關(guān)系，經(jīng)過計(jì)算可以得出其平均回收率為95.878%，RSD=1.963%。結(jié)論：使用高效液相色譜法對(duì)啟脾丸中橙皮苷的含量進(jìn)行測(cè)定，不僅操作起來高效，而且具備重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)，最后的結(jié)果達(dá)標(biāo)，因此可以用于啟脾丸的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法;啟脾丸;橙皮苷;含量測(cè)定

啟脾丸的主要成分是人參、茯苓、甘草、陳皮、山藥、山楂、六神曲、麥芽等，其主要的功能是健脾護(hù)胃、促進(jìn)消化等功效，尤其是對(duì)胃腸功能較差的患者具有較強(qiáng)的調(diào)節(jié)功能。其中白術(shù)、陳皮、茯苓和甘草對(duì)腸道的平滑肌具有較好的調(diào)節(jié)作用;而白術(shù)、茯苓多肝又具有很好的保護(hù)功能，同時(shí)還可以對(duì)胃腸虛弱的癥狀起到良好的改善作用，對(duì)腸道感染具有一定的抑制作用。對(duì)于脾胃虛弱和消化不良等癥狀具有較為明顯的療效。基于啟脾丸在臨床上的重要作用，其質(zhì)量的高低對(duì)治療會(huì)有較高的影響，本文采用HPLC法對(duì)啟脾丸中的橙皮苷進(jìn)行了詳細(xì)的測(cè)定，其方法具有操作簡(jiǎn)單方便且對(duì)成分的分離效果好，測(cè)驗(yàn)結(jié)果的誤差也較小。

1儀器與試藥

1.1儀器

Agilent 1200型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司），ZORBAX Eclipse XDB-C 1 8色譜柱（4.6×150mm，5μm），高壓四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，二極管陳列檢測(cè)器DAD1 DL-720D數(shù)控超聲波清洗器（上海之信儀器有限公司），M ETTL ER TOL EDO電子天平（德國(guó)）。

1.2試藥

甲醇（色譜純，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司），甲醇（分析純，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司），冰醋酸（分析純，上海中秦化學(xué)試劑有限公司），乙酸銨（NH 4 A C）（分析純，天津市標(biāo)準(zhǔn)科技有限公司），甘草酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110731-200409，約5 mg），啟脾丸（蘭州佛慈制藥股份有限公司，批號(hào)：20081、20086、20089），水為娃哈哈純凈水經(jīng)蒸餾得。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

固定相為ZORBAX Eclipse XDB-C 18（4.6 mm×150 mm，5μm），流動(dòng)相為0.2 molL-1醋酸銨-冰醋酸-甲醇（57.24∶2.76∶40），檢測(cè)波長(zhǎng)為285 nm，流速為0.8 mLmin-1，進(jìn)樣量為5μL，柱溫為23℃（室溫）。

2.2溶液的配制

2.2.1對(duì)照品溶液配制取橙皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇（色譜純）制成每1 mL含40μg的溶液。

2.2.2在對(duì)樣品溶液進(jìn)行配置時(shí)，需要取啟脾丸3g，對(duì)樣品經(jīng)過精密后使用研缽進(jìn)行精細(xì)的研磨，最后使用20ml的甲醇進(jìn)行定量轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移至25ml的容量瓶中，提取30分鐘，對(duì)其進(jìn)行冷卻后使其溫度降至室溫即可，加入甲醇，加入量以刻度為準(zhǔn)，再對(duì)液體進(jìn)行搖勻和靜置，并取出上清液，最后使用孔徑為0.45μm的微孔過濾膜對(duì)溶液記性過濾，將初濾液進(jìn)行去除，剩下的續(xù)濾液留置瓶中。

2.2.3陰性樣品溶液的配制按處方比例稱取除去陳皮的其他藥材，依照啟脾丸的制備工藝和制備樣品溶液的方法制備陰性樣品溶液。

2.3專屬性試驗(yàn)

分別精密吸取對(duì)照品溶液、樣品溶液、陰性樣品溶液各5μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，樣品溶液和對(duì)照品溶液色譜圖上有一保留時(shí)間相同的特征色譜峰，保留時(shí)間為1 0.34 min，而陰性樣品溶液在此保留時(shí)間無此特征峰，如附圖1。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及線性范圍考察

分別精密吸取2.2.1項(xiàng)下的對(duì)照品溶液（濃度為40μgmL-1）1、3、5、7、9μL注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖，得橙皮苷線性回歸方程為Y=429.23 X-206.79，r=0.9998，結(jié)果表明：橙皮苷在0.04μg～0.36μg范圍內(nèi)線性良好。

2.5樣品含量測(cè)定

需要取啟脾丸的樣品3.0g，對(duì)樣品經(jīng)過嚴(yán)謹(jǐn)?shù)姆Q量和研細(xì)，再將20ml的甲醇轉(zhuǎn)移到25ml的大小的瓶子中，使用超聲對(duì)其進(jìn)行提取，時(shí)間為30min，在對(duì)其進(jìn)行冷卻直至達(dá)到室溫為止，使用甲醇進(jìn)行定容，最后對(duì)甲醇進(jìn)行混勻。用孔徑為0.45μm的濾微孔過濾膜濾掉并且去除初濾液，取得續(xù)濾液組后即可得到樣品溶液。然后對(duì)該溶液進(jìn)行精密吸取5μL，將高效液相色譜儀注入其中，將色譜圖記錄下來，其色譜圖的結(jié)果如表1 所示，在進(jìn)行外標(biāo)法計(jì)算出每1g的啟脾丸樣品中含有的橙皮苷的量。

2.6精密度試驗(yàn)

分別精密吸取同一濃度的橙皮苷對(duì)照品溶液5μL，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，結(jié)果RSD=1.179%，結(jié)果表明該方法精密度良好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別精密吸取批號(hào)為的供試品溶液5μL，每隔進(jìn)樣次，共進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，結(jié)果RSD=3%表明供試品在內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)（20081）樣品共5份，分別精密稱定，按2.2.4項(xiàng)下樣品溶液的制備方法制備，按2.1項(xiàng)下色譜條件下分別進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，外標(biāo)法計(jì)算每份樣品中甘草酸的含量，RSD=1.21 22%。

2.9回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法，分別精密稱取已知含量為416.155 7μg g-1的同一批號(hào)（20081）樣品適量，共9份，分別精密加入一定量的橙皮苷對(duì)照品，按2.2.2項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件下分別進(jìn)樣分析，結(jié)果如表2，平均回收率為95.8778%，RSD=1.963%。

3小結(jié)

通過高效液相色譜法對(duì)啟脾丸中橙皮苷的含量進(jìn)行測(cè)定后，可以得出以下結(jié)論：橙皮苷的保留時(shí)間可以達(dá)到5.6min，其進(jìn)樣量可以達(dá)到0.04μg～0.36μg之間并且具有穩(wěn)定且良好的內(nèi)線性關(guān)系，使用其回收率的計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算可以得其平均回收率為95.878%，RSD=1.963%。通過高效液相色譜法對(duì)啟脾丸中的額橙皮苷進(jìn)行測(cè)定可以得出以下總結(jié)，其方法不僅操作起來十分的便捷，還具有良好的重現(xiàn)性，最終達(dá)到滿意的測(cè)定效果，可以很好的應(yīng)用于對(duì)啟脾丸的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

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