GC-MS/MS測(cè)定葡萄中高效氯氟氰菊酯

陳婷 續(xù)艷麗 張新中

摘要：以GC-MS/MS測(cè)定葡萄中高效氯氟氰菊酯，乙腈提取樣品后，采用QuEChERS鹽析，氮吹至近干，正己烷渦旋溶解后經(jīng)GC-MS/MS法檢測(cè)。結(jié)果表明，高效氯氟氰菊酯在0～800 ng/mL濃度范圍（樣品含量0～1.0 μg/g）內(nèi)，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r）>0.995 0，高效氯氟氰菊酯的檢出限為2.43 ng/g，回收率為87.3%～93.8%，同時(shí)選擇QuEChERS Fatty sample凈化包，氮吹后溶液體積為0.1 mL時(shí)，回收率達(dá)95.62%。

關(guān)鍵詞：氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜;高效氯氟氰菊酯;葡萄

中圖分類號(hào)：X24 ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2020）10-0127-004

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.10.030 ? ? ? ? ? 開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Abstract： GC-MS/MS was used to determine lambda-cyhalothrin in grapes. After acetonitrile extraction， the samples were salted out with QuEChERS， nitrogen was blown to near dryness， and hexane was dissolved by vortexing and then detected by GC-MS/MS. The results showed that lambda-cyhalothrin had a good linear relationship in the concentration range of 0～800 ng/mL （sample content 0～1.0 μg/g）， the correlation coefficient（r）>0.995 0， the detection of lambda-cyhalothrin The output limit was 2.43 ng/g， and the recovery rate was 87.3%～93.8%. The purification method and the volume of the solution after nitrogen improved the recovery rate of cyhalothrin. Select the QuEChERS Fatty sample purification kit. The recovery rate of the solution volume after nitrogen blowing was 0.1 mL， the recovery rate was 95.62%.

Key words： gas chromatography-tandem mass spectrometry; lambda-cyhalothrin; grape

在果蔬的種植過(guò)程中，合理噴施農(nóng)藥已成為防治病蟲害、增產(chǎn)增收的重要措施，但隨著人們安全健康意識(shí)的增強(qiáng)，大量農(nóng)藥濫用、誤用造成的農(nóng)藥殘留問題越來(lái)越受到廣泛關(guān)注。防治病蟲害常用的農(nóng)藥主要為有機(jī)磷、有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類[1]。擬除蟲菊酯類是由天然除蟲菊酯為基礎(chǔ)發(fā)展的一類仿生物農(nóng)藥， 具有殺蟲廣譜、高效、 速度快、 持效期長(zhǎng)等特點(diǎn)[2-5]，已被廣泛應(yīng)用于農(nóng)林果蔬等病蟲害的防治，但擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留在人體內(nèi)會(huì)蓄積，對(duì)人體健康造成一定的威脅。葡萄作為鮮食水果之一，其營(yíng)養(yǎng)成分豐富，具有開胃健脾、助消化、提神等功效，還具有較強(qiáng)的防癌、抗癌功能，備受大眾喜愛[6]。因此，準(zhǔn)確測(cè)定葡萄中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留、保證葡萄質(zhì)量安全具有重要的意義。

目前，擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法主要有色譜和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等方法[7-9]，其中，色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法因其具有準(zhǔn)確、可靠，可同時(shí)定性和定量等優(yōu)點(diǎn)[10，11]，已成為農(nóng)藥殘留分析的主要檢測(cè)手段。因此，本研究通過(guò)優(yōu)化GC-MS/MS方法，建立一種準(zhǔn)確、靈敏檢測(cè)葡萄中高效氯氟氰菊酯的方法，為果蔬產(chǎn)品的安全風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

葡萄（購(gòu)自農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，打漿冷藏備用），乙腈（色譜純，德國(guó)Merck公司），甲醇（色譜純，德國(guó)Merck公司），正己烷（色譜純，德國(guó)Merck公司）;高效氯氟氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品（德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司）;固相萃取柱Bond Elut Carbon/NH2， QuEChERS鹽包， QuEChERS凈化包包括色素樣品凈化盒（pigment sample）、脂肪樣品凈化包（Fatty sample），0.22 μm有機(jī)過(guò)濾膜。

1.2 儀器與設(shè)備

MS205DU型電子天平（梅特勒-托利多公司）;7890B-7000D型氣相質(zhì)譜聯(lián)用儀（安捷倫科技有限公司）;Avanti JXN-26型高速離心機(jī)（貝克曼庫(kù)爾特公司）;SBL-10DT型超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）;VORTEX-5型渦旋混勻器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）;RV10型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國(guó)IKA集團(tuán)）;EVA50A氮吹儀（北京普立泰科儀器有限公司）;R-12型平行溶劑濃縮蒸發(fā)儀（瑞士BUCHI公司）。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理

1）提取。準(zhǔn)確稱取打漿均勻葡萄樣品5 g，置于50 mL高速離心管中，加入10.00 mL乙腈，振蕩10 min，加入QuEChERS鹽包6.5 g，渦旋混合均勻1 min，在室溫下靜置5 min，3 900 r/min離心5 min，取上清液，待凈化。

2）凈化。將所有上清液轉(zhuǎn)入QuEChERS凈化管中，渦旋混合均勻1 min，3 900 r/min離心5 min，取2.00 mL上清液于7 mL離心管中，氮吹至近干，加入2.00 mL正己烷，渦旋溶解，過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜后，待氣質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定。

1.3.2 高效氯氟氰菊酯測(cè)定方法的優(yōu)化

1）儀器條件。氣相升溫程序如表1所示。質(zhì)譜條件：離子源溫度：230 ℃，傳輸線溫度：280 ℃，離子源電離能量：70eV。

2）對(duì)照品溶液配制。準(zhǔn)確稱取高效氯氟氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.1%）12.26 mg，置于10 mL容量瓶中，用丙酮溶液定容，即得高效氯氟氰菊酯濃度為1.215 mg/mL的對(duì)照品溶液。

3）線性關(guān)系考察。用正己烷稀釋儲(chǔ)備液至濃度為4.86 μg/mL，分別取溶液0、0.025、0.05、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80 mL于10 mL容量瓶中，定容至刻度混勻，制成高效氯氟氰菊酯濃度分別為0、12.15、24.30、97.20、194.40、291.60、388.80 ng/mL。以峰面積Y對(duì)高效氯氟氰菊酯的質(zhì)量濃度X （ng/mL）進(jìn)行線性回歸。

4）檢出限。稱取不含高效氯氟氰菊酯的葡萄樣品5 g，添加高效氯氟氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品，用基質(zhì)溶液逐步稀釋后上機(jī)，直至檢出限對(duì)應(yīng)的響應(yīng)值為噪聲的3～5倍、計(jì)算信噪比（S/N）為3時(shí)。

5）加標(biāo)回收試驗(yàn)。取已知高效氯氟氰菊酯含量的樣品，分別加入相當(dāng)于樣品中高效氯氟氰菊酯含量的80%、100%、120%的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，每份樣做3次平行，上機(jī)進(jìn)行測(cè)定。回收率=（測(cè)得量-樣品含量）/加入量×100%。

1.3.3 ?基質(zhì)對(duì)高效氯氟氰菊酯標(biāo)曲線性關(guān)系的影響 ?分別稱取10份不含高效氯氟氰菊酯的葡萄、蘋果、草莓樣品各5 g，復(fù)溶過(guò)膜，分別收集葡萄、蘋果、草莓基質(zhì)各50 mL，再分別用正己烷、葡萄基質(zhì)、蘋果基質(zhì)、草莓基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，考察不同基質(zhì)對(duì)測(cè)定高效氯氟氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)曲線的影響。

1.3.4 ?不同凈化方法對(duì)高效氯氟氰菊酯回收率的影響 ?取葡萄樣品，每批3份，分別用兩種固相萃取柱Carbon/NH2、SPE C18柱和QuEChERS方法中色素樣品（pigment sample）、脂肪樣品（Fatty sample）兩種凈化包，測(cè)定供試品溶液的峰面積，計(jì)算高效氯氟氰菊酯含量。

1.3.5 ?氮吹對(duì)高效氯氟氰菊酯回收率的影響 ?以氮吹剩余的體積為研究對(duì)象，分別用氮后溶液體積為0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，考察氮吹程度對(duì)高效氯氟氰菊酯回收率的影響。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?方法學(xué)驗(yàn)證

2.1.1 精密度試驗(yàn) ?精密吸取質(zhì)量濃度為97.2 ng/mL對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得吸收峰的平均響應(yīng)為53 503，RSD為1.36%，表明該儀器精密度良好。

2.1.2 線性范圍 ?高效氯氟氰菊酯在0～800 ng/mL濃度范圍內(nèi)（含量0～1.0 μg/g）線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r）>0.995。

2.1.3 檢出限 ?當(dāng)高效氯氟氰菊酯添加量為12.15 ng時(shí)，S/N為2.99。高效氯氟氰菊酯為1.215 ng/mL，葡萄樣品進(jìn)樣量為1 μL，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）即葡萄中高效氯氟氰菊酯的檢出限為2.43 ng/g。2.1.4 ?回收率 ?準(zhǔn)確稱取5 g葡萄樣品，其高效氯氟氰菊酯含量為199.2 ng/g，分別加入4.86 μg/mL高效氯氟氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品0.16、0.20、0.24 mL（相當(dāng)于777.6、972.0、 1 166.4 ng 高效氯氟氰菊酯），每份樣做3次平行，測(cè)定結(jié)果如表2所示。由表2可知，高效氯氟氰菊酯添加量為777.6 ng時(shí)，回收率為87.3%;添加量972.0 ng時(shí)，回收率為93.1%;添加量為1 166.4 ng時(shí)，回收率為93.8%。在一定的范圍內(nèi)，回收率隨添加量上升而上升，可能與樣品的基質(zhì)有一定的關(guān)系。

2.2 ?不同基質(zhì)對(duì)高效氯氟氰菊酯線性關(guān)系的影響

基質(zhì)對(duì)分析物的分析過(guò)程有干擾，影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。分別用正己烷、葡萄基質(zhì)、蘋果基質(zhì)、草莓基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以高效氯氟氰菊酯質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)作擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程（表3）。同一葡萄基質(zhì)加標(biāo)濃度為194.4 ng/mL峰面積為152 358的樣品，正己烷溶劑配制的標(biāo)準(zhǔn)曲線處理葡萄加標(biāo)樣品，結(jié)果為319.1 ng/mL;蘋果基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線處理葡萄加標(biāo)樣品，結(jié)果為243.1 ng/mL;草莓基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線處理葡萄加標(biāo)樣品，結(jié)果為115.6 ng/mL;葡萄基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線處理葡萄加標(biāo)樣品，結(jié)果為200.0 ng/mL，接近194.4 ng/mL。正己烷溶劑、蘋果基質(zhì)對(duì)葡萄中高效氯氟氰菊酯有增強(qiáng)作用，草莓基質(zhì)對(duì)葡萄中高效氯氟氰菊酯有抑制作用。因此，分析葡萄樣品時(shí)用葡萄基質(zhì)配制標(biāo)曲效果較好。

2.3 不同凈化方法對(duì)高效氯氟氰菊酯回收率的影響

取葡萄樣品4份，每份3平行，其中2份樣品經(jīng)10 mL乙腈溶液充分提取后，分別用Carbon/NH2、SPE C18 兩種固相萃取柱凈化得到待測(cè)物，經(jīng)氮吹復(fù)溶后上機(jī)。凈化時(shí)分別用QuEChERS方法中色素樣品（pigment sample）、脂肪樣品（Fatty sample）兩種凈化包，測(cè)定供試品溶液的峰面積，計(jì)算高效氯氟氰菊酯含量，取3平行樣品的平均值。由圖2可知，QuEChERS Fatty sample凈化包對(duì)葡萄中高效氯氟氰菊酯的提取凈化效果最好，Carbon/NH2柱凈化效果次之，SPE C18柱和QuEChERS pigment sample的凈化效果不好。SPE C18柱的選擇性沒有專用柱的選擇性強(qiáng)，對(duì)高效氯氟氰菊酯的提取不完全，待測(cè)物回收率不高。由于QuEChERS pigment sample凈化包里含碳粉，對(duì)高效氯氟氰菊酯有吸附作用，影響待測(cè)物的提取，加標(biāo)回收率低。

2.4 氮吹對(duì)高效氯氟氰菊酯回收率的影響

由圖3可知，氮吹后溶液的體積對(duì)高效氯氟氰菊酯回收率的影響較大， 當(dāng)?shù)岛蟮娜芤后w積略增加至0.05 mL時(shí)，高效氯氟氰菊酯的回收率達(dá)到94.74%;當(dāng)體積為0.1 mL時(shí)達(dá)到最高，為95.62%，吹干后定容時(shí)回收率為75.67%，回收率相差20個(gè)百分點(diǎn);當(dāng)?shù)岛笕芤后w積繼續(xù)增加時(shí)，回收率慢慢下降，氮吹時(shí)吹干后復(fù)溶降低了高效氯氟氰菊酯的回收率。

3 ?小結(jié)與討論

樣品的基質(zhì)、處理方法對(duì)高效氯氟氰菊酯的回收率均有一定的影響。果蔬的成分較復(fù)雜，不同的化合物對(duì)高效氯氟氰菊酯的影響不同[12]，不同基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的絕對(duì)基質(zhì)效應(yīng)因子不同，對(duì)被測(cè)樣品擬合的數(shù)據(jù)結(jié)果不同。因此，測(cè)定樣品是要用相應(yīng)的基質(zhì)處理。樣品處理時(shí)，其凈化方式對(duì)高效氯氟氰菊酯的回收率有一定的影響，含碳粉的凈化管對(duì)樣品中的色素有吸附作用，但同時(shí)也對(duì)被測(cè)物有一定的作用，從而影響回收率。氮吹后的體積對(duì)高效氯氟氰菊酯回收效果有相當(dāng)大的關(guān)系，氮吹干再?gòu)?fù)溶，降低了被測(cè)物的回收率，當(dāng)?shù)岛篌w積為0.1mL時(shí)，回收率達(dá)到最高，當(dāng)體積超過(guò)0.1 mL時(shí)，樣品中高效氯氟氰菊酯的回收率呈緩慢下降的趨勢(shì)。

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