桑芎膠囊定性定量分析研究

梁海月,劉濤

(1.煙臺(tái)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東 煙臺(tái)264000；2.濱州醫(yī)學(xué)院煙臺(tái)附屬醫(yī)院，山東 煙臺(tái) 264000)

桑芎膠囊由桑白皮、川芎、白芷、黃芩、黃連等12味中藥材組成，是依據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論，有多年臨床基礎(chǔ)的醫(yī)院制劑。煙臺(tái)市某中醫(yī)醫(yī)院在多年臨床基礎(chǔ)上依據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論研制而成的中藥復(fù)方制劑，具有疏風(fēng)活血，清熱燥濕，化痰散結(jié)之功效，主要用于治療尋常型痤瘡、胃腸濕熱癥、癥見(jiàn)顏面、胸背皮膚油膩、丘疹色紅、癢痛，并且伴有口臭、溲黃、大便秘結(jié)、舌質(zhì)紅等癥。現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒別項(xiàng)下只對(duì)黃連、梔子、甘草三味藥材進(jìn)行了鑒別控制，且無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)。本文在查閱了方中桑白皮、黃芩、白芷等藥材的化學(xué)及物理特性后[1-4]，增加了對(duì)桑白皮、黃芩的薄層色譜(TLC)鑒別試驗(yàn)，并且對(duì)白芷中歐前胡素的含量進(jìn)行了測(cè)定，以期為桑芎膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高和完善提供相關(guān)參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津 LC-20A高效液相色譜儀；梅特勒AB265-S電子分析天平；濟(jì)寧市奧波超聲電氣有限公司生產(chǎn)的JAC-500型數(shù)控超聲波清洗機(jī)(功率500 W，頻率40 Hz)；密理博超純水儀。

1.2 試藥 桑白皮(批號(hào)：121124-200805)、黃芩(批號(hào)：120955-201307)、黃芩苷(批號(hào)：110715-201117)、歐前胡素(批號(hào)：110826-200511)等對(duì)照品與對(duì)照藥材均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜純(美國(guó)Tedia公司)；水為超純水，其余試劑均為分析純；桑芎膠囊(煙臺(tái)天正藥業(yè)，批號(hào)：180001、180002、180003、180004、180005、180006)；陰性樣品為實(shí)驗(yàn)室自制。

2 薄層鑒別

2.1 桑白皮薄層鑒別 取本品內(nèi)容物適量，研細(xì)，取粉末3 g置具塞錐形瓶，加飽和碳酸氫鈉溶液25 mL浸泡24 h，超聲10 min，濾過(guò)，取濾液加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置后濾過(guò)，濾液用20 mL乙酸乙酯分兩次提取，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液[5]。另取桑白皮對(duì)照藥材1 g及缺桑白皮對(duì)照藥材的陰性樣品3 g，同法制成對(duì)照藥材溶液及桑白皮陰性對(duì)照溶液。取上述制備液于同一色譜板展開(kāi)，結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.2 黃芩薄層鑒別 取本品適量，研細(xì)，取粉末3 g置具塞錐形瓶，加50%乙醇30 mL超聲15 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用水飽和的正丁醇提取兩次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液[6-7]。另取黃芩對(duì)照藥材1 g及缺黃芩藥材的陰性樣品3 g，同法制成對(duì)照藥材溶液及黃芩陰性對(duì)照溶液。再取黃芩苷對(duì)照品加甲醇制成每1 mL含1 mg溶液，作為對(duì)照品溶液。取上述制備液于同一色譜板展開(kāi)，結(jié)果見(jiàn)圖2。

3 歐前胡素含量測(cè)定

3.1 色譜條件 色譜柱：Agilent XDB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈(A)-水(B)梯度洗脫；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm[8]。理論塔板數(shù)按照歐前胡素峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。梯度洗脫條件見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫條件

3.2 溶液的制備

3.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取歐前胡素19.36 mg置100 mL量瓶中，加適量甲醇超聲使溶解，放冷后定容，取上述溶液5 mL至50 mL容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，制成每1 mL含歐前胡素19.36 μg的對(duì)照品混合溶液。

3.2.2 供試品溶液的制備 本品內(nèi)容物置研缽中研細(xì)，取約2.7 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，超聲30 min(功率500 W，頻率40 Hz)，放至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得[5]。

3.2.3 陰性供試品溶液的制備 按照處方和工藝要求制備缺白芷的陰性樣品，按照“3.2.2”項(xiàng)下方法制備缺少白芷的陰性供試品溶液。

3.3 方法學(xué)考察

3.3.1 專屬性考察 精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性供試品溶液各10 μL，按照“3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示，供試品色譜中在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，有相同的吸收峰，而缺白芷供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，則未見(jiàn)明顯色譜峰出現(xiàn)，陰性無(wú)明顯干擾(見(jiàn)圖3～5)。

3.3.2 線性范圍考察 取對(duì)照品溶液(歐前胡素19.36 μg·mL-1)2、5、10、20、40 μL，按照上述試驗(yàn)條件測(cè)定，以歐前胡素進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y),進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明，在此進(jìn)樣量范圍內(nèi)，歐前胡素呈良好的線性關(guān)系，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 線性范圍考察

3.3.3 精密度考察 吸取“3.2”項(xiàng)下所制備的對(duì)照品溶液10 μL，按照“3.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定，以歐前胡素峰面積進(jìn)行計(jì)算，RSD為0.4%，符合含量測(cè)定要求。

3.3.4 穩(wěn)定性考察 吸取“3.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液10 μL，分別于0、1、3、5、8、12 h進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算歐前胡素峰面積，RSD為0.6%(n=6)，表明在該試驗(yàn)條件下樣品的穩(wěn)定性符合要求。

3.3.5 加樣回收試驗(yàn) 取已知?dú)W前胡素含量的桑芎膠囊(批號(hào):180001)9份，分為3組，分別加入對(duì)照品溶液(歐前胡素0.512 mg·mL-1)1、2、3 mL，按照“3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，回收率符合要求，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

3.3.6 樣品的測(cè)定 取不同批次的白芷及其余十一味藥材制備的6批桑芎膠囊，批號(hào)分別為180001、180002、180003、180004、180005、180006，按照“3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照上述試驗(yàn)條件進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 樣品含量測(cè)定結(jié)果

根據(jù)桑芎膠囊制法可知，每克膠囊內(nèi)容物實(shí)際相當(dāng)于所含0.35 g白芷藥材，上述試驗(yàn)結(jié)果表明，在桑芎膠囊的制備過(guò)程中，歐前胡素的轉(zhuǎn)移率均超過(guò)80%，按照《中國(guó)藥典》2015年版歐前胡素含量不低于0.080%計(jì)算，故將0.46 g/粒的歐前胡素的含量規(guī)定為不低于0.10 mg/粒。

4 討論與結(jié)果

4.1 桑白皮及黃芩鑒別條件的選擇

4.1.1 桑白皮 桑芎膠囊是由方中十二味藥材經(jīng)水煎煮濃縮后的浸膏制備而成，故桑白皮鑒別供試品的制備參照《中國(guó)藥典》中桑白皮的提取方法進(jìn)行，試驗(yàn)過(guò)程中分別用聚酰胺薄膜板(藥典展開(kāi)方法)和MERK板(本文展開(kāi)方法)進(jìn)行展開(kāi)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，聚酰胺薄層板展開(kāi)后，桑白皮陰性樣品及桑芎膠囊樣品有拖尾現(xiàn)象，展開(kāi)效果欠佳，故選擇了MERK板進(jìn)行展開(kāi)。

4.1.2 黃芩 經(jīng)查閱文獻(xiàn)[6]得知，桑芎膠囊的制備過(guò)程中，黃芩的提取方法與小柴胡片中黃芩的提取方法類似，采用小柴胡片中黃芩的鑒別和展開(kāi)條件進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果符合薄層鑒別的要求，故選用本試驗(yàn)中的鑒別方法。

4.2 含量測(cè)定條件的選擇

4.2.1 提取溶劑的選擇 本文分別用超聲30 min考察了甲醇、乙醇、70%乙醇[7]3種提取溶劑，發(fā)現(xiàn)甲醇基本能將歐前胡素提取完全，并且液相圖譜相對(duì)雜質(zhì)峰較少，故選擇甲醇作為提取溶劑。

4.2.2 提取方法及時(shí)間的選擇 本文用甲醇做提取溶劑，分別超聲20、30、45 min以及回流30、60 min，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲30、60 min與回流45 min提取效果相差不大，考慮到操作簡(jiǎn)單等因素故將提取方法確定為甲醇為溶劑超聲處理30 min。

4.3 本試驗(yàn)研究所采用的方法能夠準(zhǔn)確地對(duì)處方中桑白皮、黃芩進(jìn)行定性分析，對(duì)處方白芷中所含歐前胡素能夠準(zhǔn)確進(jìn)行定量，并且本試驗(yàn)所采用的方法穩(wěn)定性較好，抗干擾性較強(qiáng)，能夠?yàn)樯＼耗z囊標(biāo)準(zhǔn)的提高提供試驗(yàn)依據(jù)。