W112抗小鼠癲癇作用機制

王清 李響 吳迪 張殿文 李偉

(吉林省中醫藥科學院，吉林 長春 130012)

W112化學名為4-正庚氧基-1，2，4-三唑-3-酮。W112是一類全新結構的化合物，其具有療效好、毒性低、價格低廉等特點。本文通過4種化學物質誘發驚厥模型，探討W112的抗癲癇作用機制。

1 材料與方法

1.1動物 昆明種小鼠，體重19～21 g，雌雄各半，購自長春生物制品研究所有限責任公司，合格證號：SCXK(吉)2011-0003。

1.2實驗用藥與試劑 W112單體化合物，類白色粉末，純度大于98.5%，由延邊大學藥化教研室提供，批號：20140502；陽性對照藥：托吡酯片，西安楊森制藥有限公司，批號：131216725；卡馬西平片，北京諾華制藥有限公司，批號：X0477；苯妥英鈉片，天津力生制藥有限公司，批號：1302005。戊四唑(PTZ)，批號：1401097；荷包牡丹堿(Bic)，批號：20100601；3-巰基丙酸(MP)，批號：32755；硫代氨基脲(TSZ)，批號：34931，以上試劑均由上海晶純生化科技股份有限公司生產。羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，批號：F20071228，國藥集團化學試劑有限公司。

1.3儀器 JA1003B型電子天平，上海越平科學儀器有限公司；T-1000型電子天平，常熟市雙杰測試儀器廠。

1.4對PTZ、Bic、3-MP、TSZ所致小鼠驚厥的影響 ①PTZ致小鼠驚厥：采用戊四唑驚厥發作閾試驗(MET)〔1～3〕方法，取昆明種小鼠60只，隨機等分為六組，模型對照組、卡馬西平100 mg/kg、托吡酯片25 mg/kg、W112大、中、小劑量(120、80、40 mg/kg)組。灌胃給藥一次，體積均為20 ml/kg，模型對照組給予同體積0.5%CMC-Na。于給藥后1 h，每鼠均腹腔注射PTZ 100 mg/kg誘發驚厥模型，體積為10 ml/kg，觀察60 min。以全身陣攣性驚厥為觀察指標，記錄驚厥潛伏期、強直率、死亡率及發作級別。若驚厥潛伏期超過60 min則按60 min計算。②采用文獻方法〔1～3〕，取昆明種小鼠60只，隨機等分為六組，模型對照組，托吡酯片25 mg/kg，苯妥英鈉40 mg/kg，W112大、中、小劑量組。灌胃給藥一次，體積均為20 ml/kg。模型對照組給予同體積0.5%CMC-Na。于給藥后1 h，每鼠均皮下注射Bic 2.7 mg/kg誘發驚厥模型，體積為10 ml/kg，觀察30 min。觀察指標及記錄同PTZ誘發，若驚厥潛伏期超過30 min則按30 min計算。③采用文獻方法〔1～3〕，取昆明種小鼠60只，分組及給藥同Bic誘發。于給藥后1 h，每鼠均皮下注射3-MP 60 mg/kg誘發驚厥模型，體積為10 ml/kg，觀察30 min。觀察指標及記錄同PTZ誘發，若驚厥潛伏期超過30 min則按30 min計算。④采用文獻方法〔1～3〕，取昆明種小鼠60只，分組及給藥同Bic誘發。于給藥后1 h，每鼠均腹腔注射TSZ 16 mg/kg誘發驚厥模型，體積為10 ml/kg，觀察120 min。觀察指標同PTZ誘發，若驚厥潛伏期超過120 min則按120 min計算。

1.5統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件進行t檢驗，Z檢驗。

2 結 果

W112大劑量能明顯延長PTZ誘發驚厥鼠的驚厥潛伏期，降低強直率、死亡率和發作級別，作用強于托吡酯，與卡馬西平相近，見表1。W112大劑量能顯著降低Bic誘發驚厥鼠的強直率、發作級別，作用與托吡酯相近，但弱于苯妥英鈉。W112大劑量顯著降低3-MP驚厥鼠的強直率、發作級別，作用弱于苯妥英鈉。W112大劑量可顯著降低TSZ驚厥鼠的強直率、死亡率及發作級別，作用弱于苯妥英鈉，見表2。

表1 對PTZ所致小鼠驚厥的影響

表2 對Bic、3-MP、TSZ所致小鼠驚厥的影響

3 討 論

研究表明〔4〕，PTZ主要作用于腦干嘴側區及大腦，促使興奮性突觸的易化的過程增強，容易引起驚厥。PTZ是GABA受體拮抗劑，主要通過影響與GABA相關的氯離子通道的活性，使中樞抑制功能減弱，神經元過度興奮而引發癲癇發作。文獻報道〔5〕，PTZ致驚厥發作可能還與提高中樞神經系統細胞外K+濃度，使細胞膜部分去極化而使其興奮性增高有關。Bic是GABA受體的選擇性拮抗劑，它能降低腦中GABA能神經系統的功能，從而誘發動物驚厥。3-MP是GABA形成酶谷氨酸脫羧酶(GAD)的競爭性抑制劑，可抑制GABA的合成，降低腦中的GABA含量。除抑制GAD的活性外，還能特異性地抑制大鼠腦片中GABA的釋放，降低腦內GABA能神經系統的功能，從而引起動物驚厥；TSZ是GAD抑制劑，抑制谷氨酸生成GABA，使GABA合成減少，腦內GABA水平下降引起驚厥〔6，7〕。

本實驗結果表明，灌胃W112對4種化學物質誘導的驚厥均具有顯著的對抗作用，其抗癲癇作用機制可能主要是通過激活GABA神經遞質系統，產生類GABA活性，從而起到抗癲癇作用。