三種檢測方法在陰道分泌物真菌感染中應用分析

劉宗哲 翁茂婷 張善弟

【摘?要】?目的：比較常規鏡檢法、熒光PCR核酸擴增法（PCR法）和念珠菌顯色培養基培養鑒定（真菌顯色培養法）三種方法對陰道分泌物真菌檢測結果的差異。方法：選取2017年1月至2017年12月就診于本院的婦科陰道炎患者，收集常規鏡檢法真菌陽性和陰性標本各50例。用PCR法鑒定陽性標本念珠菌類型，陰性標本用熒光PCR核酸擴增法重新鑒定。同時將35例PCR法檢測結果為陽性的標本進行真菌顯色培養法培養鑒定，比較三者的結果。結果：50例常規鏡檢法陽性的標本，采用PCR法鑒定陽性47例，以白色念珠菌為主，占37例，光滑假絲酵母菌次之，占5例，熱帶假絲酵母菌2例，白色念珠菌合并光滑假絲酵母菌1例，其他真菌2例。50例常規鏡檢法陰性標本中，采用PCR法鑒定陽性15例，其中白色念珠菌13例，光滑假絲酵母菌1例，熱帶假絲酵母菌1例。常規鏡檢法和PCR法陽性率差異有統計學意義（P<0.05）;35例樣本中，有1份樣本經PCR法鑒定為熱帶假絲酵母菌，而顯色培養基培養未鑒定出，真菌顯色培養法與PCR法陽性率比較無統計學差異（P>0.05）。結論：三種檢測方法各有利弊，常規鏡檢法應為門診常規檢驗中的首選。對于臨床上有典型癥狀而常規鏡檢法陰性的患者，建議采用PCR法或真菌顯色培養法培養檢測，以提高檢測準確性和陽性率。

【關鍵詞】?陰道分泌物;念珠菌;常規鏡檢法;熒光PCR核酸擴增法;念珠菌顯色培養法

文章編號：WHR201910165

陰道炎是臨床上常見的婦科疾病，可由陰道細菌、念珠菌、陰道毛滴蟲等病原體引起。據文獻報道[1]，由真菌引起的陰道炎約占20%～45%。隨著廣譜抗生素的廣泛應用、各種婦科有創無創治療器械的使用，真菌性陰道炎的患病率也呈逐年上升狀態。目前臨床實驗室對陰道念珠菌的檢查主要通過取陰道分泌物生理鹽水涂片進行濕片鏡檢革蘭染色，得出結果[2]。存在鏡檢結果與患者臨床癥狀不符，不利于臨床醫生作出準確診斷。真菌培養鑒定用時較長，需一周才能出結果，限制了其在臨床門診中的應用。本文對100例常規法陰道分泌物進行PCR法和真菌顯色培養基培養鑒定，通過比較三者的檢測結果，分析三種檢測方法的差異性。

1?資料與方法

1.1?一般資料

選取2017年1月至2017年12月就診于本院的陰道炎患者，陰道分泌物由本院婦科臨床醫生用無菌棉拭子按常規采集。密封后立即送至本科進行檢驗。收集常規鏡檢法真菌陽性和陰性標本各50例。

1.2?方法

1）常規鏡檢法：嚴格操作規程，在潔凈的載玻片上加一滴無菌生理鹽水，將陰道分泌物樣本均勻涂抹于載玻片上，再滴加2滴5%的氫氧化鈉溶液，高倍鏡下觀察，找到孢子或發芽體或假菌絲者，判斷為陽性結果。

2）熒光PCR核酸擴增法：提取陰道分泌物DNA，分半吸取5μL提取液加入含有白色念珠菌、光滑假絲酵母菌、熱帶假絲酵母菌核酸特異性Taqman的探針PCR反應液管中，進行熒光定量PCR擴增后分析數據。

3）科瑪嘉念珠菌顯色培養基培養鑒定：將PCR法檢測結果為陽性的陰道分泌物標本35例接種于沙保羅培養基，25℃培養24～48h，挑選單個菌落，接種于真菌顯色培養基上，25℃培養24～48h，根據菌落顏色鑒定念珠菌類型。其中菌落為綠色至翠綠色為白色念珠菌，紫色為光滑念珠菌，熱帶假絲酵母菌為藍灰色，白色至粉紅色為其他念珠菌。

1.3?統計學處理

應用SPSS?22.0軟件進行統計學分析，計數資料采用配對卡方檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2?結果

2.1?常規鏡檢法與PCR法檢測結果比較

3例陰道分泌物標本常規鏡檢法檢測結果為陽性，熒光PCR核酸擴增法檢測結果卻為陰性;15例陰道分泌物標本常規鏡檢法檢測結果為陰性，熒光PCR核酸擴增法檢測結果卻為陽性;兩種方法比較差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2?PCR法真菌鑒定結果

50例常規鏡檢法陽性的陰道分泌物標本中，采用PCR法鑒定其真菌類型，在47例陽性標本中，白色念珠菌37例（78.7%），光滑假絲酵母菌5例（13.5%），熱帶假絲酵母菌2例（4.3%），白色念珠菌合并光滑假絲酵母菌1例（2.1%），其他真菌2例（4.3%）。50例常規鏡檢法真菌陰性的標本，采用PCR法鑒定陽性15例，分型為：白色念珠菌13例（86.7%），光滑假絲酵母菌例1（6.7%），熱帶假絲酵母菌1例（6.7%）。

2.3?PCR法與真菌顯色培養法結果比較

35例樣本中，有1份樣本經PCR法鑒定為熱帶假絲酵母菌，而顯色培養法未鑒定出結果，兩種方法陽性率比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表2。

3?討論

念珠菌是人體正常定居菌之一。目前，真菌感染引起霉菌陰道病呈逐年上升趨勢，為陰道病第二大病因[3]。白色黏稠豆渣樣陰道分泌物是其典型特征。陰道分泌物涂片鏡下可觀察到典型的孢子、發芽體和假菌絲，通過臨床癥狀結合常規鏡檢法不難診斷。本文結果顯示，15例陰道分泌物標本常規鏡檢法檢測結果為陰性，熒光PCR核酸擴增法檢測結果卻為陽性，提示常規鏡檢法可能導致部分念珠菌性陰道炎患者漏診。當患者臨床癥狀與鏡檢不符，而常規鏡檢法未觀察到真菌的患者，有必要采用熒光PCR核酸擴增法或真菌培養進行明確診斷。本文中，3例常規鏡檢法檢測結果為陽性的標本，熒光PCR核酸擴增法檢測結果卻為陰性，原因可能是這3例常規鏡檢法陽性標本所感染的真菌非本文監測的3種真菌，從而導致兩者檢測結果不一致。因此，方法互補極為重要。

盡早為臨床提供診斷，解除患者痛苦，快速鑒定方法顯得尤為重要。本文結果顯示，白色念珠菌在真菌陰道炎中占比較大，其次為光滑假絲酵母菌，這與Martens等[4]和吳允暉[5]研究結果一致。科瑪嘉念珠菌顯色培養基培養鑒定可通過菌落的不同顏色和不同形態對念珠菌進行分離和快速鑒定，使用方便，但檢測過程較為費時，且手工通過沙保羅培養基培養，易遺漏對念珠菌的診斷[6-7]。而采用熒光PCR核酸擴增法真菌鑒定無需進行菌落培養，直接提取陰道分泌物DNA進行熒光PCR擴增，可快速鑒定出常見的致病念珠菌菌種，有利于快速、準確診斷念珠菌性陰道炎[8]。本文結果顯示，PCR法真菌鑒定與顯色培養法結果差異無統計學意義（P>0.05），提示熒光PCR核酸擴增法真菌鑒定結果準確。

由此可見，常規鏡檢法、熒光PCR核酸擴增法和真菌顯色培養法在陰道分泌物念珠菌感染檢測中各有利弊[9-10]。常規鏡檢法操作簡單、快速，有利于早期診斷，但由于陰道分泌物標本成分復雜，易造成假陰性和假陽性。熒光PCR法可快速準確得到結果，并鑒定出念珠菌菌型。念珠菌顯色培養基培養鑒定陽性率和準確度與PCR法相似，同時能提供藥物敏感試驗結果，為臨床合理用藥提供依據[11]，但檢測過程較為繁瑣，間時要求較長，不利于早期診斷大規模檢查[12]。因此，應根據臨床要求，采用不同的檢測方法。常規鏡檢法應為門診常規檢驗中的首選。與臨床癥狀不符，而常規鏡檢法為陰性或陽性的患者，建議采用熒光PCR核酸擴增法或念珠菌顯色培養法進行鑒定。

參考文獻

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