動物類中藥材穩定性研究中適宜條件的選擇-以水蛭、地龍為例*

馬旭彤，劉羿廷，張 瀛，張立強，皮佳鑫，劉志東

（1.天津中醫藥大學，天津 301617；2.天津中醫藥大學中醫藥研究院，天津 301617；3.天津中醫藥大學，現代中藥發現與制劑技術教育部工程中心，天津 301617，4.牡丹江友搏藥業有限責任公司，牡丹江 157000）

穩定性是藥品必須具有的基本屬性，是其質量可控性的主要內容之一。中藥材質量問題較為復雜，除采收期和采收年限影響其質量外，在生產、貯存、使用過程中會導致藥材發生變質，從而降低療效或產生有毒物質。故穩定性也是直接影響中藥材、中藥飲片和中成藥的臨床療效的重要環節之一。

動物類中藥材，指來源于動物的干燥體、除去內臟的動物干燥體、部分器官、病理或生理產物等藥用中藥材，是中藥材的重要組成部分，具有強心、鎮靜、抗血栓、抗驚厥等作用[1]，體現獨特的藥用價值。目前，中藥材穩定性多聚焦在植物藥，通常以植物藥中主要有效成分、特殊成分為依據，檢測不同儲存條件下有效成分的含量，通過比較含量變化得到藥材穩定性結論。然而，動物類中藥材穩定性研究基礎薄弱，缺乏針對動物藥易腐敗變質特點的穩定性評價手段。因此，如何能結合動物類中藥材溫度敏感及濕度關聯性大的特點，制定符合目前動物類中藥材應用實際的穩定性實驗方法與指標，是解決動物類中藥材質量控制問題的關鍵。

水蛭和地龍是疏血通注射液的主要成分，也是臨床常用的動物類中藥材。課題組前期依據穩定性研究指導原則，進行了穩定性實驗，發現常規條件下，水蛭和地龍藥材在短時間內即出現發霉變質現象，導致穩定性實驗無法進行。因此，文章對實驗條件進行了優化，設定了更為溫和的實驗條件，進一步開展了水蛭、地龍藥材穩定性補充研究，為動物類中藥材選擇適宜條件開展穩定性研究提供重要實驗依據。

1 儀器與藥品

1.1 儀器 十萬分之一天平（梅特勒托利多國際貿易有限公司，型號XP205）；pH計（德國Sartorius公司，型號PB-10）；離心機（賽默飛世爾科技公司，型號SORVALLST16RCentrifuge）；電熱恒溫水浴鍋（天津泰斯特儀器有限公司，型號DK-98-ⅡA）；馬弗爐（天津中環電爐股份有限公司，型號SX-G07123）；電熱鼓風干燥箱（上海博訊實業有限公司醫療設備廠，型號BG2-140）；安捷倫高效液相色譜儀（美國安捷倫公司，Agient1260型高效液相色譜儀）。

1.2 試藥和試劑 水蛭（批號171207，181101，181202）、地龍（批號171015，171016，171017）藥材由牡丹江友搏藥業有限責任公司提供；乙酸乙酯（純度：99.5%天津市康科德科技有限公司）；硫酸（純度：96% 天津市大茂化學試劑廠）；鹽酸（純度：38%天津市大茂化學試劑廠）均為分析純；纖維蛋白原（北京索萊寶科技有限公司）；凝血酶（北京索萊寶科技有限公司）為生物試劑。

2 方法與結果

2.1 實驗條件的選擇 前期參考藥典穩定性實驗指導原則，進行了穩定性實驗。但由于實驗過程中水蛭地龍大量霉變，因此，依據藥典穩定性指導原則中對溫度特別敏感原料藥物的（低溫）實驗條件以及包裝在半透性容器中的藥物制劑的（低濕）實驗條件，對實驗條件進行優化和改變，在更溫和的條件下，繼續實驗。實驗條件見表1。

2.2 考察項目及標準 水蛭、地龍為《中華人民共和國藥典》一部收載品種，水蛭檢測項目包括鑒別、水分、含量測定等，地龍的檢測項目包括鑒別、酸堿度、浸出物等，考察項目及標準見表2。

2.3 影響因素實驗 在高溫實驗（溫度60℃），高濕實驗（相對濕度（75±5）%）和強光照（4 500±500）lx）[2]條件下進行影響因素實驗，水蛭結果見下表3；地龍結果見下表4。

2.4 水蛭加速及長期實驗結果 水蛭藥材在（30±2）℃、相對濕度（65±5）%條件下進行加速實驗，在低溫條件（6±2）℃、低濕條件[（25±2）℃，相對濕度（40±5）%]下進行長期實驗，實驗結果如表5。

結果顯示，由于批間差異及質量變化，水蛭藥材水分、總灰分、指紋圖譜等穩定性實驗結果數據存在波動情況。加速實驗中，水蛭藥材3批樣品在溫度（30±2）℃、（相對濕度 65±5）%的條件下放置6個月，藥材性狀、薄層鑒別、水分、總灰分、酸不溶性灰分、指紋圖譜以及含量均符合藥材質量標準規定；長期實驗中，在低溫條件（6±2）℃和低濕條件（溫度（25±2）℃，相對濕度（40±5）%）下進行長期實驗，放置9個月，各項檢驗結果均符合水蛭藥材質量標準規定。

2.5 地龍加速及長期實驗結果 地龍藥材在（30±2）℃、相對濕度（65±5）%條件下進行加速實驗，在低溫條件（6±2）℃、低濕條件[（25±2）℃，相對濕度（40±5）%]下進行長期實驗，實驗結果如表6。

結果顯示，由于批間差異及質量變化，地龍藥材水分、總灰分、指紋圖譜等穩定性實驗結果數據存在波動情況。加速實驗中，地龍藥材在加速條件[溫度（30±2）℃、相對濕度（65±5）%]下放置 6 個月，藥材各項指標均符合質量標準規定；長期實驗結果表明，在低溫條件（溫度（6±2）℃和低濕條件[溫度（25±2）℃，相對濕度（40±5）%]下進行長期實驗，放置9個月，各項檢驗結果均符合地龍藥材質量標準規定。

表1 實驗條件的選擇

表2 考察項目及標準

表3 水蛭影響因素實驗結果

表4 地龍影響因素實驗結果

3 討論

動物類中藥材是中藥材的重要組成部分。《中華人民共和國藥典（2015版）》共收載102味動物類中藥材，其中一部收載動物類中藥材55味、提取物1種及含動物的藥制劑458種，占全部品種的18%[3]。此外，《現代中藥大辭典》收載740種動物類中藥材，《中華本草》收載1051種動物類中藥材[4]。

水蛭和地龍為《中國藥典（2015版）》一部收載的品種。水蛭俗稱螞蟥，主要成分為水蛭素、組織胺等[5]，有抗凝、抗血栓等作用[6]；地龍是蚯蚓的干燥體，主要成分有蚯蚓素、地龍毒素，有抗凝血、降壓等作用[7]。由于受到人工粗放式養殖，加工工藝落后及技術缺陷的限制，水蛭、地龍等動物類中藥材質量存在諸多問題，因其對溫濕度敏感，儲存條件不佳會影響其臨床療效，故以之為例進行穩定性實驗研究，可為動物類中藥材選擇適宜條件開展穩定性研究提供重要實驗依據。

中國現行的穩定性實驗指導原則為《中國藥典（2015版）》第四部中《9001原料藥物與制劑穩定性實驗指導原則》，但是，現有穩定性研究實驗條件與動物類中藥材實際儲存條件相差較大，同時，由于缺乏關于溫濕度敏感的動物類中藥材穩定性研究的指導原則、法規標準和相關數據，導致一些動物類中藥材全生命周期的質量可控性差，嚴重影響其臨床療效及應用。因此，如何結合動物類中藥材自身特點，選擇適宜動物類中藥材穩定性研究的條件，為該類藥材的生產、包裝、貯存、運輸以及制定有效期提供科學依據，是深入研究動物類中藥材的關鍵。

表5 水蛭加速及長期實驗結果

表6 地龍加速及長期實驗結果

課題組前期進行了穩定性實驗，考察了水蛭、地龍在藥典規定的常規條件所下出現的質量波動和變化情況。影響因素實驗中，在相對濕度90%的高濕條件下，水蛭、地龍霉變率達100%；加速實驗條件，即在溫度 40℃±2℃、相對濕度（75±5）%的條件下放置6個月，水蛭、地龍藥材從1個月開始出現霉變；此外，在溫度 30℃±2℃、相對濕度（65±5）%的條件下放置12個月，水蛭藥材個別批次在3個月到9個月也會出現大量霉變。前期結果表明，高濕條件對水蛭地龍藥材保存影響較大，常規實驗條件不適宜開展水蛭、地龍的穩定性研究，應更改實驗條件以保證藥材質量。

根據前期結果，并參考指導原則中對溫度特別敏感原料藥物的（低溫）實驗條件以及包裝在半透性容器中的藥物制劑的（低濕）實驗條件，對實驗條件進行優化和改變，以期在更為溫和的實驗條件下，考察藥材質量的穩定性。結果表明，在優化的實驗條件下，水蛭、地龍未出現霉變及變質情況，且穩定性良好，質量可控，故可以此為基礎，為動物類中藥材選擇適宜條件開展穩定性研究提供重要實驗依據。

4 結論

本文對水蛭、地龍藥材開展穩定性研究。在實驗條件下，水蛭地龍質量穩定可控。故可以采用在（30±2）℃，相對濕度（65±5）%的加速條件以及低溫條件[（6±2）℃]、低濕條件[（25±2）℃，相對濕度（40±5）%]作為動物類中藥材的穩定性研究條件。也可作為其他動物類中藥材相關質量研究和穩定性研究的重要參考。