銀杏葉質量標準的對比分析

周云鴻 王軍

摘 要 對比分析了《中國藥典》2015年版、《美國藥典》第41版、《歐洲藥典》第9.0版中銀杏葉質量標準的異同，其中上海上藥杏靈科技藥業股份有限公司所執行的企業標準總黃酮醇苷≥0.80%，萜類內酯≥0.40%，限度標準最為嚴格；而USP41在定性鑒別項下檢查項目最為詳細，采用了高效薄層色譜法（HPTLC）。上藥杏靈針對銀杏葉所制定執行的質量標準大部分項目處于較高水平，為行業良性發展和臨床安全用藥提供了保障。

關鍵詞 銀杏葉 質量標準 總黃酮醇苷 萜類內酯

中圖分類號：R286； R921 文獻標志碼：C 文章編號：1006-1533（2020）15-0109-06

Contrastive analysis of quality standards of ginkgo leaves

ZHOU Yunhong1*， WANG Jun2**（1. Shanghai TCM Co.， Ltd.， Shanghai 200082， China； 2. SPH Xingling Sci. & Tech. Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shanghai 201703， China）

ABSTRACT The similarities and differences between Xinglings corporate standard and the Chinese Pharmacopoeia， the United States Pharmacopoeia and the European Pharmacopoeia were analyzed. The results showed that the corporate standard for the total flavonol glycosides （≥0.80% ） and terpenoids （≥0.40%） implemented by Xingling was the strictest in limit criteria and USP41 had the most detailed inspection items under qualitative identification， using high-performance thin-layer chromatography（HPTLC）. Most of the effective ingredient content quality standards formulated and implemented by Xingling for Ginkgo biloba were at a high level， which can provide a guarantee for the benign development of the industry and the clinical safety of drug use.

KEY WORDS Ginkgo biloba； quality standards； total flavonol glycosides； terpenoids

銀杏科植物銀杏（Ginkgo biloba L.）原產于中國，其藥用成分主要存在于葉、種仁和外種皮[1]。銀杏葉具有抗氧化、清除體內自由基、選擇性抵抗血小板活化因子、降血脂、改善血液循環、保護肝臟、提高免疫力、抗炎、抗病毒、抗腫瘤、抗抑郁及抗衰老等作用[1-3]，臨床上廣泛應用于神經退行性疾病、動脈粥樣硬化、哮喘、非酒精性脂肪肝、鎮痛、糖尿病并發癥[4-6]等疾病的治療和對老年癡呆等疾病的預防[7]。

目前針對銀杏的研究主要集中在銀杏葉及其制劑的開發和應用方面，《中華人民共和國藥典》2015年版（以下簡稱ChP2015）[8]、《美國藥典》第41版（以下簡稱USP41）[9]及《歐洲藥典》第9.0版（以下簡稱EP9.0）[10]均收錄有銀杏葉及其制劑的相關質量標準。已有文獻報道，將各國藥典中銀杏葉提取物的質量標準、提取物中銀杏酸限度等方面進行對比[11-13]，卻鮮有對銀杏葉質量標準的對比。本文將各國藥典中銀杏葉質量標準進行對比分析，同時結合上海上藥杏靈科技股份有限公司（以下簡稱“上藥杏靈”）企業標準，探討各標準之間存在的異同，為質量標準的規范化、國際化提供依據和參考，避免“銀杏葉事件”的重演。

1 鑒別項的異同

各標準在鑒別項下均對銀杏葉性狀進行了描述。其中USP41最為詳細， ChP2015較為簡練，上藥杏靈企業標準與ChP2015保持一致。總體而言，各標準在性狀描述上傳達的信息沒有較大差異。

1）顯微鑒別 ChP2015未對銀杏葉作規定，但USP41與EP9.0有相應要求，且USP41對粉末鑒定和葉的組織切片鑒別進行了詳細介紹，要求更加嚴格。由于絕大部分銀杏葉在中國市場上是以葉子的形式進行流通，并且銀杏葉又是其科屬種目下唯一品種，不存在難以區分的偽品，故顯微鑒別的必要性不大；而在歐美市場上，大量的銀杏葉藥材是以粉末的形式進行交易[14]，故設置顯微鑒別項具有一定必要性。

2）薄層色譜鑒別 USP41采用高效薄層色譜法（HPTLC）對銀杏葉中黃酮類成分和萜類內酯進行鑒別。普通薄層色譜法（TLC）存在展開時間長、效率低、分離度差等問題；高效液相色譜法（HPLC）則存在物質成本、時間成本高等問題；而HPTLC因其制備薄層板所采用的微粒粒度分布較窄，可以大幅提高靈敏度和分辨率[15]，同時操作又較為便捷快速，在美國藥典中是定性鑒別的常用方法。ChP2015采用銀杏葉對照藥材進行鑒別，同時通過萜類內酯對照品對其進行鑒別；USP41通過黃酮和萜類內酯對照品分別對銀杏葉進行鑒別；EP9.0則只對黃酮進行鑒別。各標準相比，歐美藥典因其收載的天然藥物較少，對照藥材獲取渠道更少，故大多采用對照品單體進行鑒別，而且USP41通過HPTLC法對黃酮和萜類內酯兩類物質同時進行規定，更為嚴格。根據我國國情，采用對照藥材來進行鑒別相比采用對照品而言，成本更低、更加省時，且同樣能達到定性鑒別的效果。

2 含量測定項的異同

2.1 總黃酮醇苷的對比分析

1）色譜條件 上藥杏靈與各國藥典均采用HPLC法，以甲醇-水-磷酸系統作為流動相，等度或梯度洗脫，檢測波長為360 nm或370 nm。條件上沒有明顯的差異，對檢測結果的影響較小。

2）對照品溶液 上藥杏靈與ChP2015以甲醇配制槲皮素、山奈素、異鼠李素的混合對照品溶液；USP41要求分別配制3種對照品溶液，時間、物質成本相對較高；EP9.0采用槲皮素作為單一對照品進行定量。

3）供試品溶液 各國標準均先利用鹽酸水解黃酮醇苷，再對苷元進行測定。區別在于：上藥杏靈與ChP2015均采用索氏提取，三氯甲烷除雜后再用甲醇進行提取，制備步驟繁瑣，時間較長，且三氯甲烷毒性較強；USP41僅采用乙醇-鹽酸-水溶液水浴回流提取，較為簡便；EP9.0要求先用丙酮提取，提取液濃縮除去丙酮后再加甲醇、鹽酸后離心，取上清液水浴，較為復雜。

4）計算方法 上藥杏靈及ChP2015均為一次進樣，利用校正因子分別計算3種成分含量后相加，簡便易行； USP41則對3種成分逐一測定，外標法計算相加，得到總黃酮醇苷含量，相對復雜；EP9.0以槲皮素為單一對照，以 3種成分的峰面積總和來計算，相對準確性較差。

5）限度要求 上藥杏靈對銀杏葉中總黃酮醇苷的含量規定為不得少于0.8%；各國藥典對總黃酮醇苷含量均規定了下限，其中以ChP2015最低。對比發現，企業標準高于各國藥典標準。

總體而言，總黃酮醇苷項下，各標準在對照品溶液配制、樣品處理方法、計算方式等方面均稍有差異，但以上藥杏靈所執行的測定計算標準方法最為簡便，限度要求最為嚴格。

2.2 萜類內酯的對比分析

1）色譜條件 各標準均采用蒸發光散射檢測器進行檢測，但流動相稍有差異：上藥杏靈與ChP2015采用甲醇-四氫呋喃-水系統等度洗脫，USP41則采用甲醇-水梯度洗脫。

2）對照品溶液 USP41以甲醇-水（1∶1）為稀釋液，同時配制4種內酯成分的不同濃度對照品溶液各5份，即一次檢測需要配制至少20份對照品溶液，較為繁瑣復雜，且物質成本高；其余二者只需配制4種成分的混合對照品溶液，大為省時省力。

3）供試品溶液 USP41采用甲醇水溶液對樣品多次渦旋振蕩、水浴加熱后離心，加入緩沖鹽溶液，上硅藻土柱，乙酸乙酯洗脫，步驟繁雜耗時；其余二者通過石油醚除雜，甲醇提取后上硅藻土柱，甲醇洗脫，較為簡便。

4）計算方法 各標準均采用蒸發光散射檢測器，其中USP41利用對照品峰面積的對數值與成分濃度的對數值存在線性關系的特點，通過最小二乘法建立標準曲線，分別計算4種成分含量后相加；上藥杏靈與ChP2015通過外標兩點對數方程計算4種成分的含量，極大程度上減小了工作量。

5）限度要求 參與對比的各標準以USP41要求最低，僅規定萜類內酯含量不得少于0.1%；ChP2015較前者提升了2.5倍；上藥杏靈執行標準為不得少于0.40%

EP9.0未對銀杏葉中萜類內酯的含量進行規定。

3 其他項的異同

各標準在雜質、水分、總灰分等其他項中的要求基本一致，但其中USP41和EP9.0對雜質規定要求莖的部分不得超過3%和5%；ChP2015規定雜質不得超過2.0%，總灰分不得超過11%，并在此基礎上，增加酸不溶性灰分不得超過2%，以及浸出物不得少于25%的要求。USP41還對農藥殘留和微生物限度做了規定，是各標準中要求最為嚴格的，要求細菌數不得過105 cfu/g，霉菌和酵母菌數不得過103 cfu/g，革蘭陰性菌不得過103 cfu/g，不得檢出沙門氏菌、大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌。USP41規定微生物的原因可能與美國部分產品將銀杏葉粉碎后直接口服有關。此外，只有上藥杏靈企業標準對黃酮苷元的峰面積比進行了規定。針對銀杏葉中的重金屬含量，目前各國藥典均未做詳細規定。ChP2015僅針對某些特殊中藥材品種中的重金屬、農藥殘留等作了含量檢查的限定，但其中并不包含銀杏葉。根據《中華人民共和國藥典》2015年版四部0212藥材和飲片檢定通則、2341農藥殘留量測定法修訂草案的公示，將重金屬、農藥殘留列入藥材和飲片檢定通則：要求藥材及飲片（植物類）鉛、鎘、砷、汞、銅分別不得超過5、1、2、0.2、20 mg/kg；藥材及飲片（植物類）禁用農藥種類升級成33種。雖然目前《中國藥典》2020年版尚未正式發布實施，但基于現有公開資料顯示，上述變更極有可能正式納入修訂內容。從中可以明顯看到，國家更加嚴格地把控中藥材質量的趨勢以及進一步提升質量標準的決心。

一直以來，上藥杏靈除了在有效成分含量的控制上，設定了高于國家乃至國際標準之外，在重金屬、農藥殘留方面，也是嚴格按照國家標準進行質量控制。企業所用銀杏葉各項禁用農藥均未檢出；各重金屬及有害元素均低于《中華人民共和國藥典》2015年版四部0212藥材和飲片檢定通則修訂草案所規定的限度。

4 討論

綜上所述，上藥杏靈企業標準在檢查項目、檢查方法等方面與ChP2015一致，但在限度要求上普遍高于各國藥典：企業標準總黃酮醇苷要求≥0.80%，萜類內酯要求≥0.40%，項目設置的限度水平已經達到歐美藥典的數倍。

總體而言，各參比對象中以USP41所規定的檢查項最為詳細，但是以上藥杏靈所執行的限度標準最為嚴格。從這點上看，上藥杏靈作為以銀杏酮酯系列產品為主打的中成藥企業，對于自身的的定位較為清晰——在全國乃至世界范圍內，爭做銀杏行業的領軍企業。企業從銀杏葉源頭開始把控，設置行業高標準，既保證了自身產品的質量，又促進了行業的良性發展。當然，不可否認國內標準與歐美藥典標準在某些方面（如重金屬、農藥殘留、微生物的檢測）存在差距。對此，企業應當有的放矢，結合實際情況制定或提升質量標準，不可為了國際化而盲目照搬歐美標準。

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