乳腺癌患者組織中PROX1的表達水平及與預后的相關性分析

李 聰 李 翠 楊美嬌

中國醫科大學附屬盛京醫院大連醫院病理科，遼寧大連 116600

乳腺癌是威脅女性健康的主要惡性腫瘤之一，患者經手術治療后，生存率仍不理想。目前認為復發和轉移是影響乳腺癌患者預后的重要因素，但目前關于復發和轉移的相關因素暫不明確，臨床需要更為可靠的指標以評估患者預后[1]。Prospero相關同源異形盒蛋白1（PROX1）是一種調節蛋白，作為同源域轉錄因子家族成員，其在多器官及組織發育過程中發揮著關鍵性調節作用，并參與淋巴管生成[2-3]。有文獻指出，PROX1參與腫瘤細胞的分化、增殖、遷移、凋亡及侵襲，但其與患者預后的關系暫不明確[4-5]。鑒于此，本研究回顧性分析70例乳腺癌患者臨床資料，進一步探討PROX1表達水平及其與預后的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析中國醫科大學附屬盛京醫院大連醫院2016年1月～2018年12月收治的70例乳腺癌患者的臨床資料，年齡35～78歲，平均（57.8±6.4）歲；病程2～5年，平均（3.64±1.19）年；身體質量指數（BMI）18.7～ 25.9kg/m2，平均BMI（23.02±1.07）kg/m2；分化程度：低分化 33 例，中分化21例，高分化16例；TNM分期：Ⅰ期19例，Ⅱ期31例，Ⅲ期20例；分子分型：LuminalA型39例，LuminalB型31例；腫瘤直徑：35例為＜2cm，26例為2～5cm，9例為＞5cm。

1.2 入選標準

（1）納入標準：①均為初次發病；②均實施手術治療，經術后病理學檢查確診為乳腺癌；③臨床資料完整。（2）排除標準：①合并凝血功能異常者；②合并嚴重器官功能衰竭者；③中途退出或轉院者。

1.3 方法

術中采集患者乳腺癌組織，制成石蠟標本，切片，制成組織芯片，采用免疫組化染色法檢測乳腺癌及癌旁組織中的PROX1表達水平，具體操作如下：二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，微波抗原修復，加入3%過氧化氫溶液，反應30min，加入山羊血清，封閉10min，一抗采用上海羽朵生物科技有限公司生產的鼠抗人PROX1單克隆抗體，于4℃下過夜，二抗采用上海碧云天生物技術有限公司生產的辣根過氧化物酶標記山羊抗小鼠IgG，反應30min。二氨基聯苯胺顯色，蘇木精復染，脫水、透明、封片，于顯微鏡下觀察，用已知陽性玻片作為陽性對照組，用磷酸鹽緩沖液作為陰性對照組。鏡下隨機選擇5個高倍視野，計算陽性細胞數，陽性細胞數＞25%判定為陽性。隨機選擇3個高倍視野，采用北航CM2000B多功能真彩色病理圖像分析系統對視野進行灰度測量，計算平均灰度值。用半定量評分法[6]評估染色情況：陽性細胞比例評分：＜5%（0分）、5% ～ 25%（1分）、26% ～ 50%（2分）、51%～75%（3分）、＞75%（4分）；陽性程度評分：無染色（0分）、淺黃色（1分）、棕黃色（2分）、棕褐色（3分）；將兩者評分相乘，若乘積＞4判定為高表達，乘積≤4判定為低表達。

1.4 觀察指標

（1）隨訪1年，比較PROX1低表達和高表達患者的分化程度、TNM分期及預后。（2）比較預后良好組與預后較差組的PROX1陽性率及平均灰度值。（3）評估兩組患者預后，分析PROX1表達水平與預后的相關性。

1.5 統計學方法

采用SPSS24.0處理數據，計數資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗，PROX1表達水平對預后的影響采用線性回歸分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PROX1表達水平

隨訪結果顯示，70例乳腺癌患者中，有40例未復發，有26例復發，有4例死亡。將40例未復發患者劃分為預后良好，將30例復發和死亡患者劃分為預后較差；PROX1高表達患者中，中分化和高分化患者占比較高，TNM分期Ⅲ期患者占比較高，預后較差患者占比較高，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 PROX1在不同分化程度及TNM分期中的表達水平[n（%）]

2.2 預后良好組與預后較差組的PROX1陽性率及平均灰度值比較

預后良好組的PROX1陽性率及平均灰度值均低于預后較差組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 預后良好組與預后較差組的PROX1陽性率及平均灰度值比較（x ± s）

2.3 PROX1表達水平與預后的相關性

經線性回歸分析發現PROX1表達水平與預后的線性回歸方程：Y=0.783+0.483X，結果顯示，PROX1表達水平可影響預后（P＜0.05）。見表3。

表3 PROX1表達水平與預后的線性回歸檢驗結果

3 討論

近年來，乳腺癌的早期診治水平得到提升，治愈率提高。但乳腺癌發病機制較為復雜，其分子機制尚未得到全面合理的闡述，患者早期即可發生淋巴結轉移，造成治療后預后不佳，因此臨床評估乳腺癌患者預后不能僅依據疾病分期或淋巴結轉移，還需選擇更為可靠的評估指標[7]。PROX1在淋巴管發育中起到一定作用，是高度保守的轉錄調節因子，其在胚胎形成中發揮著重要作用，并參與肝臟、眼、胰腺、神經系統、心臟及淋巴管等組織器官的生長發育[8-9]。在細胞中，PROX1參與神經干細胞及中間前體細胞的平衡調節，并與淋巴管內皮細胞發育、成熟密切相關，可反饋淋巴分化。而近年來的有關研究還發現，PROX1與惡性腫瘤細胞分化、增殖、侵襲有關，參與腫瘤淋巴結轉移過程，其在膽囊癌、膽管癌、子宮內膜癌、結腸癌、胃癌、膠質瘤中均呈現高表達[10-13]。

目前有關PROX1在乳腺癌組織中的表達水平暫無較多文獻報道，其高表達可能與乳腺癌淋巴轉移、分化程度及TNM分期密切相關，提示PROX1參與乳腺癌惡性化過程。但目前對于PROX1的具體作用機制尚未明確，其與患者預后的關系有待進一步探討。本研究結果顯示，PROX1高表達患者中，中分化和高分化患者占比較高，TNM分期Ⅲ期患者占比較高，預后較差患者占比較高，預后良好組的PROX1陽性率及平均灰度值均低于預后較差組，經線性回歸分析發現，PROX1表達水平與預后的線性回歸方程：Y=0.783+0.483X，結果顯示，乳腺癌組織中PROX1水平呈高表達，PROX1陽性率及平均灰度值與乳腺癌患者預后密切相關，可通過檢測上述指標，制定針對性治療方案，評估患者預后。究其原因在于，PROX1在腫瘤進展中具有多種作用機制：（1）可標記腫瘤干細胞，其表達水平升高可反饋腫瘤干細胞數量增加，癌細胞增殖和轉移風險加??；（2）可調控上皮間質轉化，并可調節細胞的極性、黏附，促使癌癥病情進展；（3）調節淋巴管生成，促進腫瘤轉移[14-15]。總而言之，PROX1具有促癌作用，其與癌癥進展密切相關，對患者預后有較大影響，可作為評估乳腺癌患者預后的重要指標。本研究選取例數較少，隨訪時間過短，且未對PROX1與患者年齡、病程、分子分型與腫瘤大小的相關性進行探討，結論具有一定局限性，應擴大研究例數，延長隨訪時間，增加研究指標，以進一步分析乳腺癌患者組織中PROX1的表法水平與患者預后的相關性。

綜上所述，乳腺癌組織中PROX1水平呈高表達，PROX1陽性率及平均灰度值與乳腺癌患者預后密切相關，可通過檢測上述指標，制定針對性治療方案，評估患者預后。