高效液相色譜法直接測定皮革中的水溶性六價鉻

肖 灣，黃亞運，郝曉紅，史福霞

（上海市質量監督檢驗技術研究院，上海 201114）

人體皮膚接觸六價鉻可能導致過敏；眼部接觸六價鉻可能會出現視網膜出血、視神經萎縮等現象；吸入和食入六價鉻會引發胃、肝、腎功能損壞，嚴重時可致癌或引起遺傳方面的基因缺陷［1］。2015年5月，歐盟reach法規將皮革中六價鉻限值從原來的 1000mg／kg變為 3mg／kg［2］，很多出口歐盟的皮革廠家就因此而被退貨。因此，有必要研究開發快速、準確、簡便的皮革六價鉻檢測方法。

目前，常用的六價鉻檢測方法有分光光度法和高效液相色譜衍生法，分光光度法易受樣品萃取液中雜質的影響，導致檢測結果不準確，而高效液相色譜衍生法則需要將萃取液進行衍生后進行測定。本文建立了一種高效液相色譜法直接測定皮革中的水溶性六價鉻，能夠將分析目標物與雜質分離，實驗過程中不使用衍生試劑，可減少試驗步驟，降低實驗室成本，同時能夠提高方法的準確度。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

1）儀器。高效液相色譜儀（1260，DAD檢測器，安捷倫科技有限公司），電子天平（精確至0.1mg，BSA2242S-CW，德國Sartorius公司），水浴恒溫振蕩器（SHA-B，常州諾基儀器有限公司）。

2）試劑。硝酸，氨水，磷酸，磷酸氫二鉀（分析純，國藥集團）；六價鉻標準溶液（100mg／L，上海市計量院）。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品的前處理

提取方法參照 GB／T 22807-2008，將100mL磷酸鹽緩沖液加入250mL錐型瓶中，導入氮氣5min（流量50mL／min）。加入2g（精確至0.01g）皮革試樣，置于振蕩器萃取3h后測定濾液的pH值，應在7.5到8.0之間。取部分萃取液經0.22μm水相針式濾器過濾后進行測定。

1.2.2 標準曲線繪制

分別移取適量的六價鉻標準溶液配制質量濃度為0.05、0.1、0.2、0.5、1.0mg／L的系列標準工作溶液，將色譜峰面積對六價鉻濃度做圖，得到標準曲線。

1.2.3 液相色譜條件

色譜柱（PRP-X100離子交換柱，250 mm×4.1mm×10μm），檢測波長：370nm，流速：1mL／min，柱溫：30℃，進樣量 100μL，運行時間：10min，流動相：濃度為0.08 mol／L NH4NO3（吸取5.25mL濃硝酸于1L的容量瓶中，加入超純水，并用氨水調節pH值至8.0）。

2 結果與討論

2.1 檢測波長的選擇

在堿性條件下，六價鉻在紫外區有一較強的吸收峰［3］。因此，采用DAD檢測器在200～600nm范圍內掃描六價格標液色譜峰，得到的紫外可見光譜如圖1所示。六價鉻標樣在370nm處有較強的吸收峰，因此選擇370 nm為高效液相色譜法的檢測波長。

圖1 六價鉻標液光譜圖

2.2 分離色譜圖

以1.2.3節確定的色譜參數條件進行測定，六價鉻標液在色譜圖中保留時間 tR＝5.80 min處出峰，分離色譜圖見圖2。由圖2可知，該峰對稱性好，經光譜圖純度分析，該峰純度較高。因此，可以通過色譜峰的保留時間和光譜圖進行六價鉻定性，通過色譜峰的面積進行六價鉻定量。

圖2 六價鉻標液色譜圖

2.3 方法的線性和檢出限

方法的線性和檢出限見表1。

表1 線性方程、相關系數、檢出限

以目標化合物峰面積與六價鉻標液的濃度繪制標準曲線，得到六價鉻標液的工作曲線。取最低濃度的標準工作液對空白樣品進行加標試驗，10次平行測定，以10倍標準偏差為檢出限，結果如表1所示。該方法線性良好，檢出限低于GB／T 22807-2008中規定的 3mg／kg。

2.4 方法回收率和精密度

準確稱取2.0 g皮革陰性樣品于錐形瓶中，在高、中、低3個濃度水平進行加標回收率試驗，平行測定7次，結果取平均值，如表2所示。回收率范圍為80%～100%，相對標準偏差范圍為1%～2%，可見本方法具有良好的精密度和準確度，滿足分析測試需求。

表2 精密度與回收實驗結果

2.5 不同方法的比較

取陽性皮革樣品，分別用建立的方法與GB／T 22807-2008進行7次測定，試驗樣品測試結果與精密度見表3。由表可知，兩種檢測方法的測定結果相差不大，精密度均較好。其中，本文建立的方法的測試結果稍小于GB／T 22807-2008測試結果，可能是因為離子色譜柱測定能夠將分析目標物與雜質分離，減少了試驗誤差。

表3 不同方法測試結果與精密度比較

3 結論

建立了一種高效液相色譜法直接測定皮革中的水溶性六價鉻的檢測方法，與其他方法相比，該方法不僅檢測限較低，回收率較高，精密度較好，試驗步驟較少，檢測時間較短，并且能夠很好的將分析目標物與雜質分離，提高試驗的準確度。