HS-SPME-GC-MS分析川芎茶調制劑不同劑型的揮發性成分

王文通 江漢美 甘劍鋒

摘要：采用頂空固相微萃取（HS-SPME）與氣質聯用法（GC-MS）對川芎茶調制劑不同劑型的揮發性成分進行比較。結果表明，在川芎茶調顆粒中共分離出24個峰，鑒定出16種成分，占其總揮發性成分的89.13%;在川芎茶調片中分離出63個峰，鑒定出46種成分，占其總揮發性成分的80.91%;在川芎茶調丸（濃縮丸）中分離出94個峰，鑒定出69種成分，占其總揮發性成分的90.10%;在川芎茶調丸（水丸）中分離出101個峰，鑒定出68種成分，占其總揮發性成分的78.50%。川芎茶調制劑的不同劑型的揮發性成分和相對百分含量存在一定的差異。

關鍵詞：川芎茶調制劑;劑型;HS-SPME-GC-MS;揮發性成分

Abstract： HS-SPME-GC-MS was used for analysis the volatile components of Chuanxiong Chatiao preparations in different dosage forms. The results showed that 16 components were identified in the 24 peaks separated by Chuanxiong Chatiao granule， which accounted for 89.13% of the total volatile components. 46 components were identified in the 63 peaks separated by Chuanxiong Chatiao tablet， which accounted for 80.91% of the total volatile components. 69 components were identified in the 94 peaks separated by Chuanxiong Chatiao pill （concentrated pills）， which accounted for 90.10% of the total volatile components. 68 components were identified in the 101 peaks separated by Chuanxiong Chatiao pill （water-bindered pills）， which accounted for 78.50% of the total volatile components. The volatile components in different dosage forms of Chuanxiong Chatiao Preparations were different in chemical compositions and content.

Key words： Chuanxiong Chatiao preparations; dosage form; HS-SPME-GC-MS; volatile components

川芎茶調散是中醫臨床經典的方劑，此方始載于《和劑局方·卷之二治傷寒》，組方為川芎、荊芥、白芷、羌活、細辛、防風、薄荷、炙甘草; 2015年版《中國藥典》[1]收載有川芎茶調散、川芎茶調丸、川芎茶調丸（濃縮丸）、川芎茶調袋泡茶（川芎茶調袋泡劑）、川芎茶調片和川芎茶調顆粒等不同劑型;其功能與主治均為疏風止痛，用以外感風邪所致的頭痛，或有惡寒、發熱、鼻塞。在近期的藥理學研究[2-5]中發現川芎茶調散具有解熱、鎮痛、抗炎、耐缺氧、對帕金森多巴胺神經損傷保護等作用。目前對川芎茶調制劑的研究主要集中在臨床和藥理研究，尚未發現對川芎茶調制劑不同劑型的揮發性成分的分析。本試驗首次應用HS-SPME-GC-MS技術對市面上川芎茶調制劑不同劑型的揮發性成分進行提取和比較，希望對川芎茶調制劑質量控制標準及功能主治方面有所幫助。

1 材料與方法

1.1 藥品

川芎茶調顆粒，國藥集團德眾（佛山）藥業公司，批號為18002;川芎茶調丸（濃縮丸），太極集團重慶中藥二廠有限公司，批號為1804004;川芎茶調丸（水丸），山西華康藥業股份有限公司，批號為20160604;川芎茶調片，成都地奧集團天府藥業股份有限公司，批號為18050553。以上制劑都經粉碎過16目篩備用。

1.2 儀器

6890/5973型氣相-質譜-計算機聯用儀，美國Hewlett-Packard公司;手動固相微萃取裝置，德國IKA公司;65 μm PDMS/DVB萃取纖維頭，美國Supelco公司;頂空瓶（15 mL）。

1.3 方法

1.3.1 頂空固相微萃取（HS-SPME）條件 綜合考察確定制劑的頂空固相微萃取的最佳條件：取以上4種制劑樣品各0.6 g，分別置于15 mL頂空瓶中，插入裝有65 μm PDMS/DVB萃取纖維頭的手動進樣器，在100 ℃下預平衡10 min，再萃取15 min，取出后立即插入色譜儀進樣口解吸3 min。

1.3.2 氣相色譜-質譜（GC-MS）條件

1）GC條件。色譜條件：HP-5MS石英毛細管柱（30 mm×0.25 mm，0.25 μm）;程序升溫從50 ℃開始，以5 ℃/min升溫至230 ℃，不分流進樣;載氣為高純度He（99.999%），柱流速0.8 mL/min，進樣口溫度230 ℃。

2）MS條件。EI源;離子源溫度230 ℃，電離能70 eV;四級桿溫度150 ℃;工作模式為全掃描，掃描質量范圍為35～550 m/z。

2 結果與分析

經化學工作站數據處理及色譜面積歸一法從各總離子流中計算各組分相對百分含量，按各峰的質譜圖經NIST08質譜數據庫檢索，并結合相對保留時間確定各個組分，結果從川芎茶調顆粒中分離出24個峰，鑒定出16種成分，占總揮發性成分的89.13%;從川芎茶調片中分離出63個峰，鑒定出46種成分，占總揮發性成分的80.91%;從川芎茶調丸（濃縮丸）中分離出94個峰，鑒定出69種成分，占總揮發性成分的90.10%;從川芎茶調丸（水丸）中分離出101個峰，鑒定出68種成分，占總揮發性成分的78.5%。具體結果見圖1、圖2、圖3、圖4及表1。

3 討論

由圖1、圖2、圖3、圖4及表1可看出，川芎茶調制劑的不同劑型揮發性成分和含量存在一定的差異。其共有成分5種，壬醛、薄荷醇、5-甲基-2-（1-甲基亞乙基）環己酮、（1R，3S，6S）-3，7，7-三甲基二環[4.1.0]庚烷、對乙烯基愈瘡木酚。從川芎茶調顆粒檢測出的成分中鑒定出16種，占總揮發性成分的89.13%，其中含量最高的是薄荷醇（62.3%），其次分別為（2R，5R）-5-甲基-2-（2-丙烯基）環己烷（6.29%）、異薄荷酮（4.77%）、異蒲勒醇（2.45%）、（1R，3S，6S）-3，7，7-三甲基二環[4.1.0]庚烷（2.38%）、5-甲基-2-（1-甲基亞乙基）環己酮（1.68%）等。

從川芎茶調片檢測出的成分中鑒定出46種，占總揮發成分的80.91%，其中含量最高的為薄荷醇（17.89%），其次分別為對乙烯基愈瘡木酚（9.39%）、甲基丁香酚（4.33%）、噠嗪（4.16%）、5-甲基-2-（1-甲基亞乙基）環己酮（3.43%）、胡椒酮（3.31%）、異薄荷酮（2.36%）、2-乙酰基吡咯（2.20%）、苯戊酮（2.00%）、糠醇（1.99%）、麥芽醇（1.89%）、黃樟素（1.75%）、5-羥甲基麥芽酚（1.71%）等。

從川芎茶調丸（濃縮丸）檢測出的成分中鑒定出69種，占總揮發成分的90.10%，其中含量最高的是薄荷醇（26.73%），其次分別為3，4，5-三甲氧基甲苯（11.14%）、5-甲基-2-（1-甲基亞乙基）環己酮（6.61%）、噠嗪（6.44%）、薄荷烯（4.92%）、薄荷酮（3.13%）、肉豆蔻醚（3.09%）、胡椒酮（3.04%）、3，5-二甲氧基甲苯（2.94%）、黃樟素（2.92%）、2-乙酰基吡咯（1.80%）等。

從川芎茶調丸（水丸）檢測出的成分中鑒定出68種，占總揮發性成分的78.50%，其中含量最高的是薄荷醇（14.43%），其次分別是甲基丁香酚（7.09%）、5-甲基-2-（1-甲基亞乙基）環己酮（5.28%）、3，5-二甲氧基甲苯（4.13%）、噠嗪（3.62%）、黃樟素（3.51%）、肉豆蔻醚（2.79%）、薄荷酮（2.65%）、3，4，5-三甲氧基甲苯（1.98%）、苯戊酮（1.96%）、d-蓽澄茄烯（1.91%）、甘菊藍（1.76%）、4，7-二甲基-1-（1-異丙基）-1，2，4a，5，6，8a-六氫化萘（1.76%）等。

通過對4種制劑進行對比發現，4種制劑檢測出的揮發性成分中含量最高的均為薄荷醇，且占總揮發性成分的百分比較高。據相關研究發現[6-11]，薄荷醇具有保護神經細胞、抗氣道炎癥、改變氣道平滑肌張力、抗驚厥、消炎止痛、抑制年輕女性四肢冷誘導血管舒張程度等藥理作用，這與川芎茶調方在《和劑局方》中主治風邪頭痛、惡寒發熱的功效具有很大程度的相關性。其他成分同樣具有一定的藥理作用，如噠嗪具有抗病毒作用，肉豆蔻醚具有抗炎抗菌作用，甲基丁香酚具有鎮靜催眠和抗菌作用[12，13]，這都與川芎茶調方中疏風止痛的功效有關。

值得注意的是，川芎茶調制劑與其君藥川芎的揮發性成分無論從組成還是相對百分含量都具有顯著差異。根據王書妍等[14]對川芎揮發性成分的研究，川芎的主要揮發性成分為Z-藁本內酯、1-甲氧基-4-（丙烯基）苯、正丁烯基苯酞、4-N-庚基苯酚、左旋β-芹子烯、匙葉桉油烯醇等。本試驗在川芎茶調制劑中未發現這些成分或百分含量較低。這可能與制劑工藝或萃取條件有關。

本試驗為首次采用HS-SPME-GC-MS技術對川芎茶調制劑的揮發性成分進行分析，且這些揮發性成分的藥理作用大多與其功能主治相關。而2015版《中國藥典》對川芎茶調制劑的含量測定僅以阿魏酸、甘草酸或是兩者為指標，對于成分多樣且復雜的中成藥制劑來說，這種含量測定的指標是否充足;揮發性成分同樣也是制劑中的較不穩定成分，川芎茶調制劑的組方藥味中，絕大部分都富含揮發性成分，川芎茶調制劑的含量測定指標是否也可以增加一些揮發性成分;不同劑型的川芎茶揮發性成分的組成存在一定差異，藥典上這些制劑的功能主治是相同的，但實際上其藥效和藥理作用是否存在差異，以上這些問題需要進一步試驗研究與論證。

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