絲氨酸/精氨酸富有剪接因子1、核因子κB 在前列腺癌中的表達及與患者臨床特征的關系

郝昌軍，胡婷婷

鞍鋼集團公司總醫院1泌尿外科，2腫瘤科，遼寧 鞍山 114003

前列腺癌嚴重影響患者的生命質量，長期吸煙的患者，前列腺癌的發病率明顯升高[1-2]。在前列腺癌的發生發展過程中存在腫瘤調控相關蛋白的改變，在前列腺癌的診療過程中發揮作用。人絲氨酸/精氨酸富有剪接因子1（serine and arginine rich splicing factor 1，SRSF1）可刺激腫瘤細胞內信號通路，能夠促進腫瘤細胞的異常轉錄和腫瘤細胞核DNA的分裂[3]。核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）是腫瘤基因增殖調控因子，可促進腫瘤細胞紡錘體的分裂，能夠加劇腫瘤細胞的分化調控異常[4]。研究顯示，前列腺癌患者前列腺癌組織中NF-κB蛋白的陽性表達率可明顯升高[5]，但對SRSF1的研究較少。本研究旨在探討SRSF1、NF-κB蛋白在前列腺癌中的表達及與患者臨床特征的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年9月至2018年9月鞍鋼集團公司總醫院收治的前列腺癌患者。納入標準：①均符合《NCCN前列腺癌臨床實踐指南亞洲共識（V2.2013版）》[6]中的關于前列腺癌及前列腺良性增生的診斷標準；②均經病理學檢查證實；③手術前均未接受放化療、激素相關治療；④臨床資料完整。排除標準：①其他部位腫瘤轉移導致的前列腺癌；②合并泌尿系統其他部位、直腸、腹腔等其他部位或器官的惡性腫瘤；③伴有自身免疫系統疾病、類風濕性疾病。依據納入和排除標準，本研究共納入70例前列腺癌患者和70例前列腺良性增生患者。前列腺癌患者年齡51～82歲，平均年齡為（65.6±6.1）歲，TNM分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期27例，Ⅲ期24例，Ⅳ期3例；前列腺特異性抗原（prostate specific antigen，PSA）水平：≥10.0 ng/ml 44例，＜10.0 ng/ml 26例；淋巴結轉移34例，無淋巴細胞專業36例；Gleason評分：≤7分35例，＞7分35例。前列腺良性增生患者年齡47～80歲，平均年齡（64.8±5.8）歲。兩組患者年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。取前列腺癌患者的前列腺癌組織，前列腺良性增生患者的前列腺良性增生組織。

1.2 免疫組化法檢測SRSF1、NF-κB蛋白的陽性表達情況

取前列腺癌組織和前列腺良性增生組織石蠟切片，3%過氧化氫孵育20 min，蛋白封閉后，加入一抗（稀釋濃度為1∶500）5 ml，37 ℃孵育2 h，加入生物素熒光標記的二抗（稀釋濃度為1∶2000）3 ml，37℃孵育20～30 min，磷酸鹽緩沖液清洗3次，每次5 min。加入辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標記的鏈霉卵白素，二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，自來水沖洗，復染，封片。

1.3 結果判定

SRSF1蛋白定位于細胞膜，NF-κB蛋白定位于細胞質，細胞膜和細胞質出現黃色、棕黃色、褐色顆粒為陽性表達。根據細胞的著色程度進行評分：未著色為0分，淡黃色染色為1分，棕黃色染色為2分，褐色或黑色染色為3分。根據陽性細胞所占比例進行評分：陽性細胞所占比例≤10%為1分，陽性細胞所占比例11%～50%為2分，陽性細胞所占比例為51%～75%為3分，陽性細胞所占比例＞75%為4分。著色程度評分與陽性細胞所占比例評分相乘，＜3分為陰性，≥3分為陽性。

1.3 統計學方法

采用SPSS 21.0軟件對所有數據進行統計分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，比較采用χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 前列腺癌組織和前列腺良性增生組織中SRSF1、NF-κB 蛋白陽性表達率的比較

前列腺癌組織中SRSF1、NF-κB蛋白的陽性表達率均高于前列腺良性增生組織，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表1）

表1 列腺癌組織和前列腺良性增生組織中SRSF1、NF-κB蛋白陽性表達率的比較[n（%）]

2.2 不同臨床特征前列腺癌患者前列腺癌組織SRSF1、NF-κB蛋白陽性表達率的比較

不同PSA水平前列腺癌患者前列腺癌組織中SRSF1蛋白的陽性表達率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；不同TNM分期、淋巴結轉移情況、Gleason評分前列腺癌患者前列腺癌組織中SRSF1蛋白的陽性表達率比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。不同PSA水平、Gleason評分前列腺癌患者前列腺癌組織中NF-κB蛋白的陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；不同TNM分期、淋巴結轉移情況前列腺癌患者前列腺癌組織中NF-κB蛋白的陽性表達率比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征前列腺癌患者前列腺癌組織SRSF1、NF-κB蛋白的陽性表達情況

3 討論

前列腺移行上皮細胞的異常病變，可導致泌尿系統惡性腫瘤發生風險上升，在長期吸煙或高齡男性人群中，前列腺癌的發病率逐年上升[7]。前列腺癌能夠明顯降低患者的生活質量，并降低前列腺癌患者3年及5年生存率[8-9]。通過評估前列腺癌患者的臨床特征，能夠在前列腺癌的診療及預后隨訪方面發揮作用。雖然PSA等指標能夠在前列腺癌的病情評估中發揮作用，但臨床價值不甚滿意，其對前列腺癌病情評估的靈敏度不足45%[10-11]。轉錄調控因子或核相關因子，能夠在前列腺移行上皮細胞的病變過程中發揮作用。本研究通過對前列腺癌患者前列腺癌組織中SRSF1、NF-κB蛋白的陽性表達情況，闡述前列腺癌的疾病進展機制，同時還能夠為臨床上前列腺癌的臨床病理特征的評估提供依據。

SRSF1是蛋白修飾調控因子，其蛋白4級空間結構上含有多個絲氨酸及精氨酸結構，能夠在蛋白構象的修飾的過程中發揮作用。SRSF1蛋白具有對腫瘤細胞膜內側第二信使的激活作用，能夠明顯促進腫瘤細胞核DNA的分裂，增加腫瘤細胞非對稱分裂的風險[12]；NF-κB蛋白是核轉錄調控因子，具有為此腫瘤細胞干性的作用，可阻礙腫瘤細胞核的分化成熟。NF-κB蛋白還能夠影響腫瘤細胞的黏附和浸潤能力，促進腫瘤細胞的惡性轉化[13]。部分研究者探討了NF-κB蛋白在前列腺癌患者中的表達情況[14]，但對NF-κB蛋白與前列腺癌臨床特征的關系研究不足。

本研究結果顯示，前列腺癌組織中SRSF1、NF-κB蛋白的陽性表達率均高于前列腺良性增生組織，差異均有統計學意義（P＜0.05）。表明SRSF1、NF-κB蛋白在前列腺癌患者中的表達水平較高，這主要是因為SRSF1、NF-κB蛋白表達陽性率升高，能夠加劇腫瘤細胞核周圍轉錄啟動子和轉錄增強子的激活程度，最終促進腫瘤細胞膜的調控失常。研究發現，在前列腺癌患者前列腺癌組織中，SRSF1蛋白的陽性表達率可超過50%，在合并明顯腹腔轉移的患者中，SRSF1蛋白的陽性表達率可翻倍上升[15]。在探討SRSF1、NF-κB蛋白的表達與前列腺癌患者臨床特征的關系過程中，結果發現，臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移和Gleason評分＞7分的前列腺癌患者中，SRSF1蛋白的陽性表達率較高，表明SRSF1蛋白的表達能夠明顯影響前列腺癌臨床病理特征的進展，這主要由于SRSF1蛋白能夠提高前列腺移行上皮細胞對局部淋巴結內皮組織的黏附能力，促進腫瘤細胞異型性的惡化，最終促進組織學分級及Gleason評分的惡化。本研究結果顯示，不同TNM分期、淋巴結轉移情況前列腺癌患者前列腺癌組織中NF-κB蛋白的陽性表達率比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。這主要是由于NF-κB蛋白能夠促進腫瘤細胞上皮-間充質轉化，提高了腫瘤細胞的浸潤能力，最終促進了前列腺癌臨床病理特征的進展。但并未發現NF-κB蛋白在不同Gleason評分中的表達差異，提示NF-κB蛋白并不會影響到腫瘤細胞的分化成熟過程。

綜上所述，前列腺癌組織中的SRSF1、NF-κB蛋白表達水平和陽性表達率均較高，SRSF1蛋白的表達可能與TNM分期、淋巴結轉移情況和Gleason評分，NF-κB蛋白的表達可能與TNM分期和淋巴結轉移情況有關。