早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中雌激素受體、孕激素受體、細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原Ki-67的表達(dá)情況及臨床意義

陳培勤，肖秀娣，徐雪松，薛娣

鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院乳腺外科，江蘇 鎮(zhèn)江2120000

作為常見的女性惡性腫瘤，乳腺癌在女性群體中的發(fā)病率居全部惡性腫瘤的第2位，其發(fā)病率目前仍以每年2%的速度遞增[1]。近年來(lái)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，乳腺癌的發(fā)病呈年輕化趨勢(shì)，對(duì)廣大女性的生命健康造成了嚴(yán)重威脅[2]。由于檢測(cè)技術(shù)及治療手段的不斷進(jìn)步，乳腺癌患者的疾病控制率及總生存期獲得了明顯改善，但其復(fù)發(fā)率及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率仍較高[3]。研究顯示，雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）、細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原Ki-67在乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中具有重要意義[4]。乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌是乳腺癌中最常見的一種，本研究通過(guò)分析早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中ER、PR及Ki-67的表達(dá)情況和臨床意義，旨在為其臨床治療提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2013年2月至2015年2月鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院收治的早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理學(xué)檢查確診為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，臨床分期為I～Ⅱ期；②未接受過(guò)放療、化療、靶向治療或內(nèi)分泌治療；③臨床資料完整；④未合并其他惡性腫瘤或嚴(yán)重基礎(chǔ)病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①具有嚴(yán)重傳染性疾病；②病理活檢顯示為乳腺癌復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移病灶。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入102例患者。102例患者均為女性，年齡為28～69歲，平均年齡為（52.67±3.28）歲；組織學(xué)分級(jí)[5]：I級(jí)65例，Ⅱ級(jí)37例；臨床分期：I期58例，Ⅱ期44例。

1.2 主要試劑

ER、PR及Ki-67抗體均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，熒光免疫二抗、磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）、二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）均購(gòu)自北京艾然生物科技有限公司。

1.3 免疫組織化學(xué)染色方法

收集患者的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織，4%甲醛溶液固定，石蠟包埋。然后將石蠟標(biāo)本切成厚約4 μm的切片，置于經(jīng)多聚賴氨酸處理過(guò)的載玻片上，采用3%過(guò)氧化氫溶液處理0.5 h，然后利用高壓鍋對(duì)切片組織進(jìn)行抗原熱修復(fù)，時(shí)間為10 min，室溫下冷卻后加入ER、PR及Ki-67抗體，放入濕盒中并置于4℃無(wú)菌冰箱孵育過(guò)夜；取出后采用PBS反復(fù)沖洗，加入生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育30 min，PBS再次充分沖洗，然后加入DAB進(jìn)行顯色；蒸餾水洗滌，蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片，顯微鏡下觀察。以已知的陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，PBS作為陰性對(duì)照。

1.4 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定

ER、PR及Ki-67陽(yáng)性表達(dá)均位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野（×400），依據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例及染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分。依據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分：≤10%為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，＞50%為3分。依據(jù)染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分與染色強(qiáng)度評(píng)分相加，≥2分為陽(yáng)性，＜2分為陰性[6]。

1.5 隨訪

采用門診、電話及上門隨訪的方式對(duì)所有患者進(jìn)行隨訪，隨訪截止時(shí)間為2019年12月，統(tǒng)計(jì)所有患者的生存情況。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Spearman相關(guān)分析法進(jìn)行相關(guān)性分析；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，組間比較采用Log-rank檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中ER、PR及Ki-67的表達(dá)情況

102例患者中，ER、PR和Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率分別為59.80%（61/102）、56.86%（58/102）和68.63%（70/102）。

2.2 不同臨床特征早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中ER、PR及Ki-67表達(dá)情況的比較

不同年齡、腫瘤直徑、臨床分期的早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中ER、PR的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。不同年齡的早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；腫瘤直徑≥2 cm、TNM分期為Ⅱ期的早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率分別高于腫瘤直徑＜2 cm、TNM分期為I期的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.195、4.284，P＜0.05）。（表1）

表1 不同臨床特征早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中ER、PR及Ki-67的表達(dá)情況（n=102）

2.3 ER、PR及Ki-67表達(dá)情況的相關(guān)性

102例早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中，ER與PR表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.425，P＜0.05），ER與Ki-67表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.217，P＜0.05），PR與Ki-67表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.264，P＜0.05）。（表2～表4）

表2 早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中ER和PR的表達(dá)情況

表3 早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中ER和Ki-67的表達(dá)情況

表4 早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中PR和Ki-67的表達(dá)情況

2.4 生存情況的比較

ER陽(yáng)性和ER陰性患者的5年生存情況比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。PR陽(yáng)性和PR陰性患者的5年生存情況比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。Ki-67陰性患者的5年生存情況優(yōu)于Ki-67陽(yáng)性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.265，P＜0.05）。（圖1～圖3）

圖1 ER陽(yáng)性（n=61）和ER陰性（n=41）早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者的生存曲線

圖2 PR陽(yáng)性（n=58）和PR陰性（n=44）早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者的生存曲線

圖3 Ki-67陽(yáng)性（n=70）和Ki-67陰性（n=32）早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者的生存曲線

3 討論

乳腺癌最早可見于5000多年前的古埃及文獻(xiàn)中，里面記載了8例乳房潰瘍及隆起腫瘤病例[7]。近年來(lái)，乳腺癌的發(fā)病率逐年增加，且呈年輕化趨勢(shì)，本研究中，乳腺癌患者的最小年齡僅為28歲，證實(shí)了這一說(shuō)法。有報(bào)道稱，30歲以下乳腺癌患者占全部乳腺癌患者的1.5%～2.0%[8]。因此，年輕女性若出現(xiàn)乳房觸及腫塊等癥狀應(yīng)及時(shí)檢查，避免漏診。乳腺癌的發(fā)病高峰年齡為40～59歲，本研究中，50歲及以上患者占53.92%，因此對(duì)中老年女性應(yīng)給予高度重視。

隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，關(guān)于乳腺癌分子水平的探索逐漸深入，乳腺癌分子水平的發(fā)病機(jī)制越來(lái)越受到研究人員的關(guān)注[9]。Ki-67是一種與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的非組蛋白的核蛋白，在正常組織中的表達(dá)水平極低，而在腫瘤組織中的表達(dá)水平較高，并隨著疾病的發(fā)展和惡化呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，能夠較好地反映腫瘤細(xì)胞的增殖活性[10]。Ki-67于一次鼠源單克隆抗體檢測(cè)中被發(fā)現(xiàn)，“Ki”源于當(dāng)時(shí)研究者所在的德國(guó)Kiel大學(xué)，67是當(dāng)時(shí)96孔板中發(fā)現(xiàn)該抗原的單克隆抗體的編號(hào)。Ki-67主要存在于細(xì)胞核中，在G0期不表達(dá)，G1后期開始出現(xiàn)，S期和G2期表達(dá)升高，M期升至峰值，細(xì)胞有絲分裂完畢后迅速降解[11]。研究表明，Ki-67高表達(dá)患者具有較高的化療敏感性，更易發(fā)生耐藥突變，對(duì)預(yù)后不利[12]。本研究結(jié)果顯示，102例早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者的Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率為68.63%，與閆山英等[13]報(bào)道的69.2%十分接近。本研究發(fā)現(xiàn)，早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者的Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率可能與腫瘤直徑及TNM分期有關(guān)，腫瘤直徑≥2 cm、TNM分期為Ⅱ期的早期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率分別高于腫瘤直徑＜2 cm、TNM分期為I期的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。ER的主要配體是17-β-雌二醇，是調(diào)節(jié)乳腺癌細(xì)胞存活、增殖、侵襲及腫瘤新生血管生成的下游基因，也是免疫組化法最常用的檢測(cè)指標(biāo)[14]。本研究中，ER的陽(yáng)性表達(dá)率為59.80%，與汪海新等[15]報(bào)道的60.7%相似。國(guó)外研究表明，從乳腺導(dǎo)管原位癌到浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，ER的陽(yáng)性表達(dá)率呈明顯下降趨勢(shì)，ER表達(dá)水平的下降表明腫瘤的進(jìn)展不再依靠雌激素，通常轉(zhuǎn)為侵襲性更強(qiáng)的表型并對(duì)內(nèi)分泌治療產(chǎn)生抗性[16]。PR是雌激素和雄激素受體結(jié)合誘導(dǎo)的產(chǎn)物，其數(shù)量與ER復(fù)合物在細(xì)胞核內(nèi)的數(shù)量呈平衡關(guān)系，并顯示ER功能機(jī)制的良性狀態(tài)。PR與ER在生物學(xué)上的作用密切相關(guān)，PR是ER的重要靶基因，在乳腺癌早期階段往往共同表達(dá)，ER、PR的陽(yáng)性表達(dá)率越高，則細(xì)胞分化程度越高，惡性程度越低。本研究中，PR的陽(yáng)性表達(dá)率為56.86%，且ER與PR的表達(dá)呈正相關(guān)。王冰濤等[17]研究顯示，乳腺癌患者中ER與PR的陽(yáng)性表達(dá)率分別為63.16%和75.79%，均高于本研究的結(jié)果，可能是因?yàn)楸狙芯窟x取的病例均為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，惡性程度較高。本研究還發(fā)現(xiàn)，Ki-67與ER、PR表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)，即激素受體陰性的乳腺癌患者細(xì)胞增殖能力更好，與黃華俊等[18]報(bào)道的結(jié)果一致。本研究還分析了ER、PR及Ki-67表達(dá)情況與乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Ki-67陰性患者的5年生存情況優(yōu)于Ki-67陽(yáng)性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），推測(cè)Ki-67能夠作為預(yù)測(cè)乳腺癌患者預(yù)后的潛在指標(biāo)。

綜上所述，ER、PR及Ki-67在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中具有重要意義，能夠作為預(yù)測(cè)乳腺癌生物學(xué)行為和預(yù)后的重要指標(biāo)，對(duì)臨床用藥、延長(zhǎng)患者生存期、減少惡性轉(zhuǎn)化及復(fù)發(fā)具有重要意義。