線粒體解偶聯蛋白2在肝癌組織中的表達及其與紫杉醇化療耐藥的關系

趙乂

作者單位：儀隴縣人民醫院腫瘤內科，四川 南充637600

肝癌是臨床常見的腫瘤疾病之一，有研究報道顯示，肝癌是全球第三大癌癥相關性死因疾病，中國的肝癌病人約占世界的55%［1］，且其發病率呈現逐年上升趨勢。目前對肝癌的治療主要采取手術治療，但是手術治療僅適用于早期肝癌病人，所以對病人的及早發現以及預后評估具有重要意義。線粒體解偶聯蛋白2（uncoupling protein2，UCP2）是線粒體解偶聯蛋白家族成員之一，通過對腫瘤細胞的三羧酸循環產生熱量［2］，抑制活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）產生，降低自由基產生，提升病人巨噬細胞免疫應激反應。在對病人的化療過程中，紫杉醇被認為是目前最為優秀的抗癌天然物質［3］，其顯著的生物活性對于病人血清腫瘤標志物水平的下降具有積極的作用。但是隨著病人的治療，紫杉醇的化療耐藥性呈現上升趨勢［4］，本研究將通過UCP2在肝癌組織中表達的臨床意義及其與紫杉醇化療耐藥的關系分析，為臨床化療耐藥性預防提供科學依據。

1 資料與方法

1.1一般資料選取2012年2月至2013年2月在儀隴縣人民醫院住院的肝癌病人120例，隨訪時間從手術之日開始算起，對病人開展長達5年的隨訪，以病人的死亡作為終點事件，與疾病無關的死亡作為失訪，平均隨訪時間為（58.72±10.22）月；男性59例，女性61例，年齡（53.48±12.59）歲，體質量指數（BMI）為（24.06±3.76）kg∕m2；低分化肝癌61例，中分化肝癌30例，高分化肝癌29例，TNM分期：Ⅰ期37例，Ⅱ期83例。所有研究對象均對研究內容知情并簽署知情同意書。本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

納入標準：①符合肝癌診斷標準［5］；②預計生存時間＞6個月；③KPS［6］評分均≥70分；④所有病人均為早期肝癌，化療方案均為紫杉醇聯合奧沙利鉑；⑤入組前，所有病人均進行手術治療。排除標準：①心、肝、腎功能嚴重不全者；②存在交流障礙的病人；③血常規異常病人。

1.2研究方法病人入組后比較不同病理資料的UCP2水平，通過對病人展開為期5年的電話隨訪，比較不同預后以及紫杉醇的耐藥情況。

1.3觀察指標

1.3.1 UCP2水平檢測 收集手術過程中的肝癌組織及癌旁正常肝組織，進行石蠟包埋后，4μm連續切片，對切片進行脫蠟水化處理后，使用枸櫞酸進行高溫高壓修復，對內源性過氧化酶進行封閉后，滴加一抗，-4℃24 h后，徹底清洗后滴加鼠二抗，37℃40 min后，使用DAB顯色液進行顯色，滴加蘇木精后進行封片判定。免疫組化結果以高倍鏡下，胞質內出現棕色顆粒為陽性標準，隨機選取5個視野，每個視野觀察100個細胞，觀察陽性細胞的比例，比例在15%以下為陰性，比例在15%及以上為陽性。

1.3.2 不同病理資料的UCP2水平比較 分別針對不同年齡、性別、組織分化程度、肝內轉移情況、TNM分期、淋巴結轉移、生存情況以及紫杉醇耐藥情況的UCP2水平進行比較。紫杉醇耐藥判定［7］：連續使用2個療程紫杉醇聯合奧沙利鉑化療方案，未見腫瘤縮小甚至腫瘤增大。

1.3.3 影響紫杉醇耐藥的多因素分析 使用logistic回歸分析，分別以組織分化、淋巴結轉移、TNM分期、生存情況和UCP2水平作為自變量，是否發生紫杉醇耐藥為因變量，分析紫杉醇耐藥的影響因素。

1.3.4 Spearman相關性分析 分別對以上影響紫杉醇耐藥的多因素進行相關性分析。

1.3.5 UCP2對肝癌病人生存狀態的影響 使用生存函數對不同UCP2表達情況病人的生存狀態進行分析。

1.4統計學方法所有數據均使用統計軟件SPSS 16.0進行統計分析。計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以%表示，采用χ2檢驗，對單因素分析有統計學意義的，進一步行logistic回歸分析，生存狀態分析采用Kaplan-Meier函數，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 UCP2水平檢測肝癌組織的UCP2的陽性表達情況明顯高于癌旁正常肝組織，差異有統計學意義（χ2＝65.931，P＝0.000）。見表1。染色結果顯示UCP2主要表達在細胞質中，并且正常肝組織中幾乎無染色，而在肝癌組織中，細胞UCP2免疫組化呈現黃褐色，見圖1。

表1 肝癌120例正常肝組織與肝癌組織UCP2水平檢測∕例（%）

2.2不同病理資料的UCP2水平比較不同組織分化、淋巴結轉移、TNM分期、生存情況及紫杉醇耐藥情況的UCP2水平比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.3影響紫杉醇耐藥的多因素分析不同組織分化、淋巴結轉移、TNM分期、生存情況以及UCP2水平均為紫杉醇耐藥的獨立危險因素，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3，4。

2.4 Spearman相關性分析通過對以上影響因素的相關性分析，病人的紫杉醇耐藥情況分別與組織分化、淋巴結轉移、TNM分期、生存情況以及UCP2水平呈現正相關（P＜0.05）。見表5。

2.5 UP2、組織分化、頸淋巴結轉移和TNM分期與病人的生存狀態分析通過生存函數分析，UP2陽性病人的生存時間顯著低于UP2陰性病人，差異有統計學意義。見表6、圖2。

3 討論

肝癌時我國常見的腫瘤性疾病之一［8］，具有顯著的地域性，好發40～50歲之間［9］，有研究報道顯示［10］，肝癌患病率呈現逐年上升趨勢，多數病人病情發展較為隱匿，一旦被確診，一般都已經發展為中晚期肝癌，所以在臨床早期發現肝癌，對于病人的治療以及預后具有積極的意義。而在肝癌的治療過程中，由于耐藥情況的時有發生，常常在病人的治療中不能及時發現，甚至貽誤病情，所以，在臨床治療中，通過對常規化療方案病人的耐藥性相關性分析，及時早期對病人的耐藥情況進行綜合評估，對于病人的治療具有積極的意義［11］。

表2 肝癌120例不同病理資料線粒體解偶聯蛋白（UCP2）水平比較∕例

表3 肝癌120例影響紫杉醇耐藥相關因素的變量賦值

表4 肝癌120例影響紫杉醇耐藥的多因素分析

表5 肝癌120例紫杉醇耐藥情況Spearman相關性分析

表6 肝癌120例線粒體解偶聯蛋白（UP2）、組織分化、頸淋巴結轉移和TNM分期與病人的生存狀態分析

圖2 肝癌120例線粒體解偶聯蛋白（UP2）與病人的生存狀態分析

人體細胞的能量提供主要來源于線粒體，而線粒體的氧化磷酸化是其產生能量的主要方式，細胞內的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸和還原性二核苷酸的高能電子通過細胞線粒體的呼吸鏈進行能量釋放，使高能電子與三磷酸腺苷再次進行磷酸化，最終形成人體易于吸收利用的能量［12］。但是，該種能量代謝過程并不能實現高效運轉，必須通過UCP2的偶聯作用才可實現［13］。本研究發現，癌變組織的UCP2陽性表達情況顯著高于癌旁組織（P＜0.05），分析其原因，可能是在腫瘤細胞中，由于腫瘤細胞的惡性增長，能量需求較高，病人的UCPS的偶聯作用異常表達，UCP2陽性表達與病人的腫瘤發展密切相關，氧化磷酸化主要集中線粒體內膜，而UCP2作為陰離子轉運體，通過對質子的旁路回流，形成質子漏，介導腫瘤細胞的適應反應，而腫瘤細胞證實通過其適應性反應，避免了氧化簇對其的凋亡調控，形成腫瘤細胞的惡性增長。此外，本研究對比了兩組病人的不同病理資料UCP2水平，發現和不同組織分化、淋巴結轉移、TNM分期、生存情況以及紫杉醇耐藥情況之間的差異有統計學意義（P＜0.05），這進一步證實了UCP2參與了肝癌的進展。蔣滟蘄等［14］通過對結腸癌腫瘤病人的UCP2的基因多態性分析，病人的不良生存結局與UCP2的表達呈現正相關，與正常人相比，腫瘤病人的UCP2表達水平較高，與本研究結果一致。

紫杉醇是臨床常用的抗腫瘤類藥物，屬于具有抗癌活性的二萜生物堿類化合物，紫杉醇在臨床中腫瘤病人的化療中起到重要作用，但是對于惡性程度較高病人，往往在進行化療治療中，病人的紫杉醇耐藥情況凸顯，在病人的治療過程中，由于耐藥情況的無法預知性，多數病人在進行化療過程中，由于藥物的耐藥情況而貽誤病情，所以在臨床中，通過對病人的耐藥情況早期進行綜合識別，對于病人的治療具有重要意義。本研究通過分析發現，病人的不同組織分化、淋巴結轉移、TNM分期、生存情況以及UCP2水平均為紫杉醇耐藥的獨立危險因素，且與病人的耐藥情況呈現正相關，分析認為，隨著病人的病理檢測惡性程度的升高，病人的耐藥情況呈現上升趨勢，惡性分化程度、淋巴結轉移、生存情況的變差都是在對病人的不斷化療基礎上出現的進行性發展，腫瘤細胞通過自身形態的改變增加其能量代謝水平，提高自身的存活能力，而在此過程中，耐藥細胞成倍增長，甚至發生轉移，病人處于S期細胞顯著減少，病人的耐藥情況顯著增加。在未來的研究中，將病人的組織分化、淋巴結轉移、TNM分期以及UCP2水平的定量化研究，通過數據模型的綜合評估，及時對病人的化療藥物進行調整，對于病人的治療具有重要意義。

綜上所述，UCP2陽性肝癌病人的紫杉醇耐藥性較高，生存情況較差，可作為病人預后評估的依據。

圖1 肝組織中線粒體解偶聯蛋白2表達（免疫組化染色×400）：A為正常肝組織，B～D為肝癌組織