經(jīng)皮肺穿刺肺癌兔應(yīng)用化療藥物對腫瘤細(xì)胞沿針道轉(zhuǎn)移率影響的研究

周雪濤，張鴻，楊楊，李慧敏，張東升#

石家莊市第三醫(yī)院1心胸外科，3病理科，石家莊050000 2正定縣人民醫(yī)院急診科，石家莊050000

世界衛(wèi)生組織發(fā)布，肺癌是引發(fā)世界人群死亡的主要癌癥之一，在男女發(fā)病、死亡的所有惡性腫瘤中均居前三位，所以及時(shí)預(yù)防診治肺癌是當(dāng)前醫(yī)藥研究人員肩負(fù)的重要使命之一[1]。目前細(xì)針吸取細(xì)胞學(xué)（fine needle aspiration cytology，F(xiàn)NAC）檢查法是臨床進(jìn)行肺癌診斷的重要方法[2‐3]。然而，在病灶部位實(shí)施FNAC后會(huì)存在腫瘤細(xì)胞沿針道轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，因此尋求有效預(yù)防并抑制該現(xiàn)象的治療方案是目前亟待解決的問題[4]。本研究經(jīng)皮肺穿刺肺癌兔并給予化療藥物，觀察對腫瘤細(xì)胞沿針道轉(zhuǎn)移率的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

62只家兔（河北醫(yī)科大學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室提供），每只月齡4個(gè)月，雌雄各半，體重2.0～2.5 kg，平均2.28 kg；VX2瘤株由河北醫(yī)科大學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室提供；雙套管切割活檢針（18G‐Gallini切割活檢針）購自巴德醫(yī)療科技（上海）有限公司。

1.2 研究方法

1.2.1 VX 2瘤株的制備[5]在無菌超凈臺(tái)取出VX2并剔除壞死組織、結(jié)締組織、肌腱、肌肉及血管，且去除腫瘤組織邊緣生長旺盛的魚肉樣組織，用生理鹽水沖洗3次，取腫瘤組織（小于1 mm3），浸泡于4℃的生理鹽水中備用。

1.2.2 建立兔VX 2肺癌模型[6]給予家兔耳緣靜脈注射利多卡因（2%），麻醉后將其仰臥固定，右前胸壁備皮，常規(guī)消毒，取穿刺針，于家兔肩胛骨前緣及右胸4～5肋間交點(diǎn)處刺入肺組織，固定針鞘，推入平頭針芯內(nèi)瘤塊后拔出針，用無菌紗布按壓穿刺位置30 s，術(shù)后常規(guī)注射青霉素（每天20萬單位），連續(xù)給藥3天，預(yù)防感染。肺癌兔模型建立成功率為70.97%。

1.2.3 模型成功標(biāo)準(zhǔn)使用計(jì)算機(jī)斷層掃描（CT）技術(shù)觀察肺部腫瘤生長狀況，若腫瘤長至直徑1 cm，且無轉(zhuǎn)移現(xiàn)象即為成功。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)方法將家兔按體重分層分為治療組與對照組，每組均雌雄各半，治療組共32只，對照組30只，所有患兔在CT引導(dǎo)下成功進(jìn)行FNAC 5次，對照組穿刺后保留套管拔出針芯，給予安慰劑并撤出套管。治療組在進(jìn)行穿刺后保留套管拔出針芯，邊給予化療藥物順鉑（2 mg）和絲裂霉素（0.2 mg）邊撤出套管。治療組與對照組患兔術(shù)后均進(jìn)行常規(guī)注射青霉素（每天20萬單位），連續(xù)給藥3天，預(yù)防感染。所有患兔飼養(yǎng)2周，解剖臟層胸膜、壁層胸膜及胸壁組織進(jìn)行病理細(xì)胞學(xué)檢查，通過光學(xué)顯微鏡觀察腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移情況，若腫瘤細(xì)胞沿著針道方向轉(zhuǎn)移，即為陽性轉(zhuǎn)移。實(shí)驗(yàn)過程中排除動(dòng)物穿刺死亡及患有惡性胸腔積液患兔，最終治療組剩余24只，對照組剩余20只，符合實(shí)驗(yàn)要求，可用于結(jié)果統(tǒng)計(jì)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺癌兔模型 5次穿刺后不同部位腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移陽性率的比較

治療組中，3個(gè)不同部位5次穿刺均未發(fā)現(xiàn)陽性轉(zhuǎn)移的發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；對照組中，臟層胸膜5次穿刺均未發(fā)現(xiàn)陽性轉(zhuǎn)移的發(fā)生率分別低于壁層胸膜和胸壁組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.286、6.144，P=0.038、0.013）；治療組臟層胸膜5次穿刺均未發(fā)現(xiàn)陽性轉(zhuǎn)移的發(fā)生率高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.207，P=0.040）。（表1）

表1 兩組肺癌兔模型 5次穿刺后不同部位腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移陽性率的比較[ n（%）]

2.2 穿刺后肺癌兔模型不同部位腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移陽性率的比較

肺癌兔經(jīng)5次穿刺后，治療組臟層胸膜腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移陽性率明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；兩組壁層胸膜及胸壁組織的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移陽性率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）

表2 穿刺后兩組肺癌兔模型不同部位腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移陽性率的比較[ n（%）]

3 討論

FNAC是利用細(xì)針穿刺病灶，通過吸取少許的細(xì)胞成分進(jìn)行涂片檢查的細(xì)胞學(xué)診斷方法。FNAC在國外已經(jīng)發(fā)展了80多年，在中國也有近60年的歷史。近年來，隨著CT、B超等先進(jìn)檢查定位手段的引進(jìn)以及針吸活檢設(shè)備的進(jìn)步，應(yīng)用經(jīng)皮肺FNAC檢查診斷惡性腫瘤已在臨床得到廣泛開展[7‐8]。它具有簡便、安全、準(zhǔn)確、迅速和經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)，已成為各國普遍接受的診斷方法。但是經(jīng)皮肺FNAC檢查存在一個(gè)嚴(yán)重的弊端，即會(huì)引起腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移擴(kuò)散[9‐10]。為了解決這個(gè)問題，本研究設(shè)計(jì)了上述動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，以探究FNAC后使用化療藥物是否可降低腫瘤細(xì)胞沿針道轉(zhuǎn)移陽性率。

肺癌兔模型不同部位腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移陽性率比較結(jié)果顯示，治療組中，3個(gè)不同部位5次穿刺均未發(fā)現(xiàn)陽性轉(zhuǎn)移的發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；對照組中，臟層胸膜5次穿刺均未發(fā)現(xiàn)陽性轉(zhuǎn)移的發(fā)生率分別低于壁層胸膜和胸壁組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療組臟層胸膜5次穿刺均未發(fā)現(xiàn)陽性轉(zhuǎn)移的發(fā)生率高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩組所有肺癌兔模型5次穿刺后不同部位腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移陽性率比較結(jié)果顯示，治療組臟層胸膜腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移陽性率明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；兩組壁層胸膜及胸壁組織的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移陽性率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

由實(shí)驗(yàn)結(jié)論可知，在給肺癌兔進(jìn)行經(jīng)皮肺FNAC檢查后，無論是治療組還是對照組，臟層胸膜腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移陽性率均最高，而壁層胸膜和胸壁組織腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移陽性率較低，這說明隨著穿刺細(xì)針?biāo)?jīng)過的組織距離病灶漸遠(yuǎn)，穿刺針上所攜帶的腫瘤細(xì)胞定植的概率就越低，腫瘤細(xì)胞沿針道轉(zhuǎn)移擴(kuò)散的概率越低；而壁層胸膜和胸壁組織的腫瘤細(xì)胞陽性轉(zhuǎn)移率沒有明顯差異，這可能是由于攜帶腫瘤細(xì)胞的穿刺針在經(jīng)過壁層胸膜后，穿刺針上殘余的腫瘤細(xì)胞被血液循環(huán)或者淋巴組織等免疫系統(tǒng)識(shí)別后殺滅，抑制了腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。另外，治療組臟層胸膜腫瘤細(xì)胞陽性轉(zhuǎn)移率明顯低于對照組，說明皮肺穿刺后使用化療藥物可有效殺死針道的腫瘤細(xì)胞，降低陽性轉(zhuǎn)移率。綜上所述，經(jīng)皮肺穿刺后，局部使用化療藥物能夠有效降低腫瘤細(xì)胞沿針道轉(zhuǎn)移陽性率。因此，建議今后在臨床上在對腫瘤患者進(jìn)行FNAC前，應(yīng)采取有效的預(yù)防措施，術(shù)后應(yīng)積極采取化療方法，以此降低腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移陽性率。