基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑對口腔鱗癌細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響

牛榮榮

[摘要]目的：探討分析采取MMP-9抑制劑作用于口腔鱗癌細(xì)胞后對其增殖與侵襲能力的研究。方法：提取口腔鱗癌細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)，不同濃度的MMP-9抑制劑作用對細(xì)胞進(jìn)行RT-PCR檢測、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測增殖與侵襲能力的研究。結(jié)果：在OumolL濃度時增殖數(shù)據(jù)為1.0，在5umol/L時鱗的增殖數(shù)據(jù)為0.5，說明MMP-9抑制劑能夠明顯抑制細(xì)胞增殖。隨著MMP-9抑制劑不斷增加與細(xì)胞處理的時間不斷延長，細(xì)胞遷移距離逐漸縮小，并呈現(xiàn)相關(guān)性。結(jié)論：對口腔鱗狀細(xì)胞而評取MMP-9抑制劑進(jìn)行干預(yù)后可明顯降低細(xì)胞增殖以及侵襲能力，為臨床研究提供重要理論依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]：MMP-9抑制劑;口腔鱗癌細(xì)胞;增殖;侵襲

[中圖分類號]R73 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]2107-2306（2020）04-115-01

口腔癌為頭頸外科中最常見的惡性腫瘤之一，在我國的發(fā)病率逐年攀升。其發(fā)病原因多種多樣，大部分由口腔黏膜表層鱗狀細(xì)胞發(fā)生惡變而來。目前臨床上對于口腔癌患者通常采取手術(shù)干預(yù)以及放化療干預(yù)方式進(jìn)行治療[1]，對于患者口腔原有結(jié)構(gòu)的破壞較大，而在其他瘤種領(lǐng)域較為有效的靶向治療目前在口腔癌方面大多還停留在基礎(chǔ)和臨床試驗(yàn)中。口腔癌中腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)灶向遠(yuǎn)處侵襲轉(zhuǎn)移與其不良預(yù)后有密切關(guān)系，而其中基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrixmetalloproteinase，MMPs）作為降解細(xì)胞外基質(zhì)的主要酶類，MMP-9的過度表達(dá)與口腔癌的浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，在口腔癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[2]。因此本研究探討MMP-9抑制劑對于口腔癌細(xì)胞的增殖與侵襲能力是否能夠有效抑制，為臨床治療提供參考。

資料和方法

1.1鱗狀細(xì)胞的采集以及培養(yǎng)：選取我院口腔癌患者口腔上皮細(xì)胞中的鱗狀細(xì)胞株，在37C標(biāo)準(zhǔn)溫度下，放置于10%胎牛血清中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，并在培養(yǎng)皿中加人100U/ml單位劑量的青霉素進(jìn)行保護(hù)，將配置好的培養(yǎng)皿放置在CO2孵化箱內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞增殖，并保持孵化箱內(nèi)CO2濃度水平保持在5%，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需對處于生長期內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行相應(yīng)實(shí)驗(yàn)操作。

1.2實(shí)驗(yàn)方法干預(yù)：對口腔鱗狀細(xì)胞進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)檢測，采取5umol/L的MMP-9抑制劑對培養(yǎng)皿中的對數(shù)期鱗狀細(xì)胞進(jìn)行持續(xù)處理48h，將TRNzol加入培養(yǎng)皿中，按照相應(yīng)提取細(xì)胞RNA的標(biāo)準(zhǔn)步驟進(jìn)行相應(yīng)細(xì)胞RNA的提取操作，并最后將所提取的RNA進(jìn)行紫外分光光度計(jì)進(jìn)行RNA濃度與純度進(jìn)行相應(yīng)測定工作，并采取SYBR熒光染色劑將對數(shù)期鱗狀細(xì)胞的mRNA進(jìn)行相應(yīng)分析表達(dá)處理。在采取遷移實(shí)驗(yàn)中，首先操作人員選取馬克筆在檢測6孔板的背面均勾畫出相等長度的橫線，每條橫線間隔在lcm左右，并保證每條橫線橫穿過檢測板上的孔隙，將處于對數(shù)期的鱗狀細(xì)胞注入孔隙內(nèi)并保持12h培養(yǎng)時間，每組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞設(shè)定3個復(fù)孔，在培養(yǎng)12h后采用規(guī)格為200ul的移液槍，將槍頭垂直在6孔板的板底并進(jìn)行劃痕處理，并按照濃度不同分別加人到各個MMP-9抑制劑中，并選取陰性標(biāo)準(zhǔn)作為對照組。操作完畢后將其放人37C標(biāo)準(zhǔn)溫度下CO2濃度水平保持在5%下繼續(xù)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，每個孔隙選取5個不同的區(qū)域并按照時間0時、24時、48時對其進(jìn)行拍照處理，采取專業(yè)分析移動軌跡的軟件對劃痕圖像進(jìn)行綜合數(shù)據(jù)分析，根據(jù)測量圖像中劃痕的寬度數(shù)據(jù)來計(jì)算鱗狀細(xì)胞的遷移率。

1.3研究方法：數(shù)據(jù)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采取正太分布的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)算，實(shí)驗(yàn)計(jì)量資料數(shù)據(jù)均采取均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行標(biāo)識。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1鱗狀細(xì)胞RT-PCR檢測結(jié)果數(shù)據(jù)：在MMP-9抑制劑0umol/L濃度時鱗狀細(xì)胞的增殖數(shù)據(jù)為1.0，在MMP-9抑制劑濃度為5umol/L時鱗狀細(xì)胞的增殖數(shù)據(jù)為0.5，說明MMP-9抑制劑能夠明顯抑制鱗狀細(xì)胞的增殖功能，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異明顯（P<0.05）。

2.2鱗狀細(xì)胞的劃痕實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：在增殖24hMMP-9抑制劑5umol/L濃度時鱗狀細(xì)胞的遷移率為16.48%、10umol/L濃度時遷移率為12.45%，對照組遷移率為32.81%。在48hMMP-9抑制劑濃度為10umol/L時鱗狀細(xì)胞的遷移率為19.88%、10umol/L濃度時遷移率為13.68%，對照組遷移率為42.22%。統(tǒng)計(jì)學(xué)差異明顯（P<0.05）。

3討論

口腔鱗癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后的重要因素[3]。腫瘤的轉(zhuǎn)移是一個包含多個階段的復(fù)雜進(jìn)程，其中腫瘤細(xì)胞對基底膜的破壞從而允許其在組織之間移動是一個重要的因素，而基質(zhì)金屬蛋白酶對細(xì)胞外基質(zhì)的調(diào)節(jié)和重塑起著關(guān)鍵的作用[4]。既往研究中，通過對MMP-9的抑制可以有效降低乳腺癌、食道癌、喉頭癌等腫瘤細(xì)胞的增殖[5-8]。本實(shí)驗(yàn)中在設(shè)定MMP9抑制劑Oumol/L濃度時鱗狀細(xì)胞的增殖數(shù)據(jù)為1.0，在MMP-9抑制劑濃度為5umol/L時鱗狀細(xì)胞的增殖數(shù)據(jù)為0.5，說明MMP-9抑制劑能夠明顯抑制鱗狀細(xì)胞的增殖功能。，且隨著MMP-9抑制劑不斷增加與細(xì)胞處理的時間不斷延長，細(xì)胞遷移距離逐漸縮小并呈現(xiàn)相關(guān)性。

說明MMP-9抑制劑可以明顯抑制增殖的腫瘤細(xì)胞擺脫基底膜的束縛、干預(yù)腫瘤細(xì)胞的增殖與侵襲能力，從而達(dá)到控制患者口腔腫瘤細(xì)胞增殖與侵襲的能力。

綜上所述，口腔鱗狀細(xì)胞經(jīng)MMP-9抑制劑進(jìn)行干預(yù)后可明顯降低細(xì)胞增殖能力和侵襲能力，為臨床研究提供重要理論依據(jù)。

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