miR-34、MDM2、EPAS1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及與臨床特征的相關(guān)性分析

陳麗華，朱婕曼，劉玉鳳，劉 浩，馬春星，張 凡，劉云春

子宮內(nèi)膜癌是一種臨床常見的發(fā)生于子宮內(nèi)膜上皮組織的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，具有高發(fā)病率、高病死率等特點[1-3]。據(jù)不完全統(tǒng)計，我國每年新增子宮內(nèi)膜癌病例約30萬，子宮內(nèi)膜癌患者病死率在所有婦科惡性腫瘤中位居前三位，僅次于宮頸癌、卵巢癌。近年來，我國子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率逐漸上升，已經(jīng)躍居所有女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤第二位，僅次于宮頸癌[4-5]。子宮內(nèi)膜癌發(fā)病早期無明顯臨床癥狀，早期診斷率相對較低[6]，導(dǎo)致大多數(shù)子宮內(nèi)膜癌患者確診時病情已發(fā)展至晚期，對患者的身體健康甚至生命安全造成嚴(yán)重威脅，因此對子宮內(nèi)膜癌進(jìn)行及時的診斷，提升早期診斷率對子宮內(nèi)膜癌的臨床治療以及改善患者預(yù)后有重要意義[7-8]。本研究收集子宮內(nèi)膜癌切除標(biāo)本，對微小RNA-34(miR-34)、鼠雙微基因2(MDM2)、內(nèi)皮PAS1蛋白(EPAS1)的表達(dá)進(jìn)行檢測，旨在探究miR-34、MDM2、EPAS1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及與臨床特征的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取2018年3月—2019年3月于我院接受手術(shù)治療的子宮內(nèi)膜癌患者50例，年齡45～65(56.1±8.2)歲；病理分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期13例，Ⅲ期11例，Ⅳ期14例。排除標(biāo)準(zhǔn)：病歷資料不全者；接受過放、化療治療者；并發(fā)其他惡性腫瘤者；心、腎、肝等器官功能不全者。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本制作:所有患者均接受手術(shù)對子宮內(nèi)膜癌組織進(jìn)行切除。自所有患者手術(shù)切除標(biāo)本中取癌組織標(biāo)本以及距離癌組織5 cm以上的癌旁組織，使用4%中性福爾馬林對所采集的標(biāo)本進(jìn)行固定，并進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，厚度為3 μm，連續(xù)切片作免疫組化標(biāo)記。

1.2.2指標(biāo)檢測:取待測標(biāo)本，使用Western blot法檢測miR-34、MDM2、EPAS1相對表達(dá)量。

1.2.3免疫組化染色:對待測標(biāo)本進(jìn)行脫蠟、水化等處理之后，將其在0.01 mol/L、95℃的枸櫞酸緩沖液中浸泡，并進(jìn)行熱修復(fù)，并在3%的H2O2的環(huán)境下進(jìn)行培育，10 min后滴入山羊血清進(jìn)行封閉，在25～27℃的環(huán)境下孵育0.5 h，之后將封閉液抽離，加入一抗，將其置于5℃的環(huán)境中過夜培養(yǎng)，次日加入二抗，并在恒溫箱中培養(yǎng)0.5 h(恒溫箱溫度37℃)，使用PBS淋液沖洗后進(jìn)行DAB顯色、脫水、封片處理。

2 結(jié)果

2.1miR-34、MDM2、EPAS1在癌組織、癌旁組織中的表達(dá)情況 子宮內(nèi)膜癌癌組織中miR-34表達(dá)水平顯著低于癌旁組織，MDM2和EPAS1表達(dá)水平高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表1、圖1。

表1 miR-34、MDM2、EPAS1在子宮內(nèi)膜癌癌組織、癌旁組織中的表達(dá)水平比較

圖1 miR-34、MDM2、EPAS1在子宮內(nèi)膜癌及癌旁組織中的表達(dá)情況(DAB×200)

2.2miR-34、MDM2、EPAS1表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌患者腫瘤體積的關(guān)系 腫瘤體積≥5 cm3患者miR-34表達(dá)水平顯著低于腫瘤體積<5 cm3者，MDM2和EPAS1表達(dá)水平高于腫瘤體積<5 cm3者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表2。

表2 miR-34、MDM2、EPAS1表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌患者腫瘤體積的關(guān)系

2.3miR-34、MDM2、EPAS1表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌患者病理分期的關(guān)系 病理分期為Ⅲ～Ⅳ期的患者miR-34表達(dá)水平低于病理分期為Ⅰ～Ⅱ期的患者，MDM2和EPAS1表達(dá)水平高于病理分期為Ⅰ～Ⅱ期患者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表3。

表3 miR-34、MDM2、EPAS1表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌患者病理分期的關(guān)系

2.4miR-34、MDM2、EPAS1表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的關(guān)系 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者miR-34表達(dá)水平低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，MDM2和EPAS1表達(dá)水平高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表4。

表4 miR-34、MDM2、EPAS1表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的關(guān)系

2.5miR-34、MDM2、EPAS1表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌患者浸潤程度的關(guān)系 浸潤程度>1/2肌層的患者miR-34表達(dá)水平低于浸潤程度≤1/2肌層的患者，MDM2和EPAS1表達(dá)水平高于浸潤程度≤1/2肌層的患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表5。

表5 miR-34、MDM2、EPAS1表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌患者浸潤程度的關(guān)系

2.6miR-34、MDM2、EPAS1表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌患者分化程度的關(guān)系 低分化患者miR-34表達(dá)低于中分化、高分化患者，且中分化患者miR-34表達(dá)水平低于高分化患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；低分化患者M(jìn)DM2和EPAS1表達(dá)水平高于中分化、高分化患者，且中分化患者M(jìn)DM2和EPAS1表達(dá)水平高于高分化患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表6。

表6 miR-34、MDM2、EPAS1表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌患者分化程度的關(guān)系

3 討論

目前為止，臨床醫(yī)學(xué)尚未將子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制研究透徹，越來越多的專家學(xué)者開始致力于此研究。近年來，有學(xué)者通過分子生物學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)等途徑對子宮內(nèi)膜癌發(fā)病機(jī)制進(jìn)行研究[9-10]。miRNA在大多數(shù)生物中大量存在，大量實驗研究表明，miRNA與機(jī)體組織細(xì)胞分化、凋亡、神經(jīng)元發(fā)育、脂肪代謝等生理過程密切相關(guān)，尤其是腫瘤組織的發(fā)生發(fā)展與miRNA之間存在密切聯(lián)系[11-12]。miR-34作為miRNA家族的重要成員，是一種重要的抑癌基因，與癌組織的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[13-14]。有學(xué)者在研究中表示，miR-34被激活后，能夠阻滯細(xì)胞周期分布，從而起到誘導(dǎo)癌組織細(xì)胞凋亡、抑制癌組織生長的作用[15]。還有學(xué)者在研究中表示，miR-34在肺癌、膀胱癌、胃癌等惡性腫瘤中均呈現(xiàn)異常表達(dá)，但是關(guān)于miR-34與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)性的研究還相對較少[16]。本研究結(jié)果顯示，與癌旁組織比較，子宮內(nèi)膜癌癌組織中miR-34表達(dá)相對較低，提示miR-34在子宮內(nèi)膜癌癌組織中呈現(xiàn)異常低表達(dá)，并推測miR-34的異常表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展具有一定的關(guān)聯(lián)。本研究結(jié)果還顯示，腫瘤體積較大、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤程度>1/2肌層、低分化的子宮內(nèi)膜癌患者miR-34表達(dá)水平較低，提示miR-34表達(dá)的變化與子宮內(nèi)膜癌患者腫瘤體積、病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、浸潤程度以及分化程度等臨床特征具有一定的相關(guān)性，參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展。

MDM2是一種新的進(jìn)化保守基因，屬于原癌基因，在多種惡性腫瘤中均呈現(xiàn)異常表達(dá)[17-18]。有學(xué)者在研究中表示，MDM2的異常高表達(dá)能夠調(diào)控細(xì)胞周期分布及細(xì)胞凋亡能力，使細(xì)胞出現(xiàn)過度增殖、分化情況，從而參與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展[19]。本研究結(jié)果顯示，相比癌旁組織，子宮內(nèi)膜癌癌組織中MDM2表達(dá)相對較高，提示MDM2在子宮內(nèi)膜癌癌組織中呈現(xiàn)異常高表達(dá)。本研究中還對不同臨床病理特征子宮內(nèi)膜癌中MDM2表達(dá)進(jìn)行對比，結(jié)果顯示，腫瘤體積較大、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤程度>1/2肌層、低分化的子宮內(nèi)膜癌患者M(jìn)DM2表達(dá)較高，提示MDM2的異常高表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征密切相關(guān)，在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。

目前關(guān)于EPAS1表達(dá)變化與惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展之間相關(guān)的研究還相對較少[20-21]。有學(xué)者在研究中表示，機(jī)體正常組織中EPAS1的表達(dá)較低甚至無表達(dá)，但是在惡性腫瘤組織中其呈現(xiàn)異常高表達(dá)，參與癌細(xì)胞的一系列生物學(xué)行為[22]。本研究結(jié)果顯示，相比癌旁組織，子宮內(nèi)膜癌癌組織中EPAS1表達(dá)相對較高，提示EPAS1在子宮內(nèi)膜癌癌組織中呈現(xiàn)異常高表達(dá)。本研究還對不同臨床病理特征子宮內(nèi)膜癌中EPAS1表達(dá)進(jìn)行對比，結(jié)果顯示，腫瘤體積較大、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤程度>1/2肌層、低分化的子宮內(nèi)膜癌患者EPAS1呈現(xiàn)異常高表達(dá)，提示EPAS1表達(dá)的變化與子宮內(nèi)膜癌患者腫瘤體積、病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、浸潤程度以及分化程度等臨床特征具有一定的相關(guān)性，參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，miR-34、MDM2、EPAS1在子宮內(nèi)膜癌中呈現(xiàn)異常表達(dá)，且與腫瘤體積、病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、浸潤程度、分化程度等臨床病理參數(shù)具有一定相關(guān)性，與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、演進(jìn)過程密切相關(guān)。