火神山醫院146例新型冠狀病毒肺炎康復者特異性IgM、IgG抗體定量檢測與分析

張兵華，許朝暉，王 娟，李雙雙，郭 瑋，雷 燕，郭永博，陳亞強，李照輝，王曉坤，謝曉燕

新型冠狀病毒被世界衛生組織命名為2019新型冠狀病毒(2019 noval coronavirus， 2019-nCoV)[1-2]，冠狀病毒是一個大型病毒家族，已知可引起嚴重急性呼吸綜合征(SARS)和中東呼吸綜合征(MERS)等較嚴重的呼吸系統疾病。截止2020年3月15日，全國已累計確診新型冠狀病毒肺炎患者81 099例，累計死亡3218例，危害巨大。已有研究顯示患者感染2019-nCoV后，約在7 d產生針對病毒的IgM抗體，約在14 d產生IgG抗體[3]，然而新型冠狀病毒肺炎康復者體內IgM、IgG抗體水平及變化規律尚不清楚。近期我們對武漢火神山醫院出院的146例新型冠狀病毒肺炎患者的2019-nCoV特異性IgM、IgG抗體進行檢測，分析了患者康復后短期內抗體水平產生規律，為新型冠狀病毒肺炎的預防、干預和康復提供線索。

1 資料與方法

1.1血液標本來源 2020年2月10日—3月10日于武漢火神山醫院感染三科住院的146 例新型冠狀病毒肺炎患者，均符合國家衛生健康委辦公廳、國家中醫藥管理局辦公室2020年2月18日頒布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第六版)》[4]。出院前1天收集患者血液標本，將患者依據發病時間到標本采集時間分為A組20例、B組58例、C組46例、D組22例，發病時間分別為≤30 d、31～39 d、40～49 d、≥50 d。4組年齡、性別及臨床分型比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 146例新型冠狀病毒肺炎康復患者一般情況比較

1.2IgM、IgG抗體檢測 采用化學發光法檢測血清2019-nCoV特異性IgM、IgG抗體，樣本IgM和IgG濃度<10.0 AU/ml時，為無反應性(陰性)，樣本IgM和IgG濃度≥10.0 AU/ml時，為有反應性(陽性)。IgM、IgG抗體檢測試劑盒及iFlash3000全自動化學發光免疫分析儀均購自深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司。

2 結果

2.1IgM、IgG抗體與發病時間的變化趨勢 新型冠狀病毒肺炎康復者血清IgM抗體濃度隨發病時間延長呈下降趨勢(圖1)，而IgG抗體隨發病時間延長呈上升趨勢(圖2)。

圖1 146例新型冠狀病毒肺炎康復者血清IgM濃度與發病時間散點圖

圖2 146例新型冠狀病毒肺炎康復者血清IgG濃度與發病時間散點圖

2.2IgM、IgG抗體濃度結果比較 B、C、D組IgG抗體濃度高于A組，且C、D組高于B組(P<0.05,P<0.01)，而4組IgM抗體濃度比較差異無統計學意義(P>0.05)。C、D組IgG抗體濃度比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 4組新型冠狀病毒肺炎康復者血清IgM、IgG抗體濃度比較

3 討論

《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》提出，新型冠狀病毒肺炎疑似病例具備病原學或血清學證據之一者即為確診病例[5]，首次將2019-nCoV特異性IgM、IgG抗體作為確診的依據之一。機體遭受病原體感染后，最早出現的抗體即為IgM，通常發病后1周內即可在血清中檢測到特異性IgM抗體，其升高能夠為呼吸道感染患者病原學診斷提供重要參考[6]，特異性IgM抗體產生最早，但濃度低、維持時間短、親和力較低，而IgG抗體產生晚，但濃度高、維持時間長、親和力高，血清IgG抗體陽性往往提示中后期感染或既往感染。有研究發現2019-nCoV IgG、IgM檢測具有較好臨床特異度和較高的檢出敏感度，可以作為臨床新型冠狀病毒肺炎篩查和診斷的必要補充[7]。

檢測IgM、IgG抗體不僅用于診斷，還可以動態監測2019-nCoV感染后人體IgM和IgG的濃度變化，明確其變化規律，對于明確治療效果、評估患者狀態及判斷病情轉歸具有重要意義。本研究采用化學發光法對符合新型冠狀病毒肺炎出院標準患者的IgM、IgG抗體進行檢測，初步觀察到新型冠狀病毒肺炎康復患者IgM、IgG抗體的產生有以下幾個特點：①IgM抗體濃度增高。本研究結果顯示,與正常參考值相比，4組IgM抗體的水平顯著升高，但組間比較差異無統計學意義；②IgM抗體濃度呈現隨發病時間延長而逐漸下降趨勢，但發病30 d后IgM抗體下降緩慢，1例患者在發病70 d時多次核酸檢測陰性，已符合出院標準，但IgM抗體仍高達42.66 AU/ml，這與SARS患者明顯不同，SARS患者在康復60 d時所有IgM抗體均轉為陰性[8]；③IgG抗體濃度明顯增高。本研究結果顯示，B、C、D組血清IgG抗體濃度高于A組，且C、D組高于B組。提示發病30 d后IgG抗體濃度明顯高于發病30 d內的抗體濃度，但有少量患者在發病30 d后IgG抗體濃度仍無明顯增高；④IgG抗體濃度呈現隨發病時間延長而逐漸增高的趨勢。本研究結果顯示，C、D組IgG抗體濃度比較差異無統計學意義。提示IgG抗體可能在發病40 d后達到峰值。

2019-nCoV屬于β屬的冠狀病毒，經過病毒序列比對分析，推測2019-nCoV的自然宿主可能是蝙蝠等野生動物[9]，N蛋白包裹病毒基因組，可作為診斷抗原[10]，目前對其理化特性的認識多來自SARS冠狀病毒(SARS-CoV)和MERS冠狀病毒(MERS-CoV)。納入本研究患者在行2019-nCoV特異性IgM、IgG抗體檢測前，已經至少2次檢測核酸陰性，但是患者IgM、IgG抗體濃度增高程度不一，應結合患者癥狀、血常規、炎癥指標及IgM、IgG抗體濃度做綜合判斷：①當IgM抗體濃度明顯增高，而IgG抗體陰性，需對核酸檢測結果存疑，應復查核酸檢測[11]；②當IgM抗體陰性、IgG抗體陽性，提示患者既往感染，體內病毒已經被清除[12]；③當IgM、IgG抗體濃度均增高，患者可能處于恢復期，也可能為核酸檢測假陰性[11]，此時可計算IgG抗體濃度與IgM抗體濃度比值，若比值>5，考慮患者近期感染2019-nCoV，但病毒已被清除，目前處于恢復期，若比值<5，可能處于恢復期，也可能為核酸檢測假陰性，應復查核酸檢測，結合患者臨床表現綜合判斷，這種方法是否符合患者實際情況尚需進一步研究證實。

本研究不足之處在于觀察時間較短，未能明確2019-nCoV特異性IgM、IgG抗體轉為陰性的時間，需延長時間做進一步觀察。另外，我們收治的患者均為普通型及重型患者，缺乏輕型及危重型患者，可能對結果的判斷產生選擇性偏倚。最后，當2019-nCoV核酸陰性，IgM、IgG抗體濃度均增高時，IgG抗體濃度與IgM抗體濃度比值與病毒清除之間的關系尚需進一步研究。