六味中藥對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)供水渠道真菌的抗菌活性研究

蔣國(guó)政，李繼昌，韓振興，劉 挺，曹 宏，王 媛

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030；2.諾偉司國(guó)際貿(mào)易有限公司，北京 海淀 100015）

在養(yǎng)殖業(yè)中，防止飼料霉變?cè)缇褪艿胶芏嚓P(guān)注，尋求安全有效的防霉劑已成研究的熱點(diǎn)。然而，由于衛(wèi)生條件等原因，許多養(yǎng)殖場(chǎng)的水管等供水渠道經(jīng)常長(zhǎng)霉，進(jìn)而通過(guò)供水線引起畜禽真菌毒素中毒，直接危害其健康，甚至導(dǎo)致死亡。使用防霉劑是防止畜禽飲水霉變的重要措施。研究表明，許多中草藥具有很好的防霉作用，同時(shí)由于中草藥有提高畜禽機(jī)體免疫機(jī)能、毒副作用小等優(yōu)勢(shì)，使得中草藥作為防霉劑日益受到人們的重視［1］。故選用黃連、苦參、蛇床子、黃柏、白鮮皮和土荊皮這六味藥，參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（CLSI）提出的

M38-A液體微量稀釋法對(duì)從哈爾濱市周邊養(yǎng)殖場(chǎng)供水渠道分離鑒定的真菌進(jìn)行了體外抗菌活性研究，期望篩選出能用于實(shí)際生產(chǎn)的防霉中藥。

1 材料與方法

1.1 中藥材 黃連（四川，100707）、苦參（四川，080303）、蛇 床 子 （河 南，100707）、黃 柏 （東 北，090304）、白鮮皮（遼寧，091001）和土荊皮（湖北，090305），均購(gòu)自黑龍江省藥材公司。

1.2 試驗(yàn)菌 按文獻(xiàn)［2］從哈爾濱市周邊15個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)供水渠道30份采樣中分離、鑒定得到的真菌：黑曲霉、菌核曲霉、淡紫青霉、鮮綠青霉、擴(kuò)展青霉和圓弧青霉各1株，共計(jì)6株。

1.3 培養(yǎng)基 RPMI1640培養(yǎng)液（批號(hào)：NUM0221，購(gòu)于北京賽默飛世爾生物化學(xué)制品有限公司）和沙保勞瓊脂（SDA）。

1.4 中藥提取 按文獻(xiàn)［3-8］，用乙醇對(duì)黃連等六味中藥分別提取。提取液經(jīng)減壓干燥得中藥提取物。

1.5 藥液配制 稱取中藥提取物0.2g溶于1mL無(wú)菌蒸餾水中，濃度為200mg／mL，作為儲(chǔ)備藥液。用RPMI1640培養(yǎng)液稀釋，使終濃度為100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.563、0.781、0.391mg／mL 和0.195mg／mL。

1.6 六味中藥的體外抑菌活性試驗(yàn)

1.6.1 菌液的制備 將6株真菌接種至SDA斜面，28℃培養(yǎng)7d，活化2次。在試管斜面加適量RPMI1640培養(yǎng)液，吹打，使孢子游離于培養(yǎng)液中。經(jīng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，調(diào)整菌液濃度為0.4×104～5×104CFU／mL。

1.6.2 MIC和MBC的測(cè)定 參照M38-A液體微量稀釋法［9］測(cè)定六味中藥對(duì)各菌株的 MIC值；用SDA瓊脂平板涂布法測(cè)定MBC值。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 對(duì)所記錄的MIC值、MBC值計(jì)算中位數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 六味中藥對(duì)霉菌的體外抑菌活性 六味中藥對(duì)6株真菌的MIC和MBC值見表1。表明，6種中藥的抑菌效果與殺菌效果呈相關(guān)性。其中黃連和苦參對(duì)6株真菌的抑菌活性最好，其次為蛇床子，而黃柏、白鮮皮和土荊皮抗菌活性較差。

表1 六味中藥對(duì)6株真菌的MIC和MBC值 （mg／mL）

2.2 六味中藥抗真菌活性比較 六味中藥不同濃度累積抑菌株數(shù)百分率及對(duì)6株真菌的MIC幾何均值見表2及圖1。

表2 六味中藥不同濃度累積抑菌率（%）及MIC幾何均值

圖1 六味中藥抗真菌活性比較

從表2可見，在6.25mg生藥／mL的濃度下，黃連和苦參對(duì)所有受試菌株均具抗菌活性，蛇床子和黃柏只對(duì)部分受試菌株具有抑制作用，而白鮮皮和土荊皮無(wú)抑菌作用。在25mg生藥／mL的濃度下，蛇床子對(duì)所有受試菌株有抗菌活性。當(dāng)藥液濃度提高至50mg生藥／mL時(shí)，六味中藥對(duì)6株受試菌株均有抗菌活性。比較各中藥對(duì)6株受試菌株的MIC幾何均值大小，發(fā)現(xiàn)抗菌活性大小順序?yàn)椋狐S連＞苦參＞蛇床子＞黃柏＞白鮮皮＞土荊皮。

3 討論

從20世紀(jì)開始，人們便開始從中藥中尋找高效低毒的抗真菌中藥，至今已發(fā)現(xiàn)300多種中藥有抗真菌活性，其中黃連、苦參、黃柏、蛇床子、白鮮皮和土荊皮是常用抗真菌中藥，故選用這六味藥進(jìn)行了試驗(yàn)。中藥提取溶劑常用的有水和乙醇，據(jù)王玲等［10］的研究，黃連、黃柏、蛇床子、白鮮皮和土荊皮這五味中藥水提生藥率均比醇提高，但乙醇提取物對(duì)皮膚癬菌的抗真菌活性均比水提取物好，所以本試驗(yàn)對(duì)黃連等六味中藥均用乙醇提取。

黃連、黃柏和苦參均有清熱燥濕，瀉火解毒等功效，黃連和黃柏的主要有效成分是以鹽酸小檗堿為代表的生物堿類化合物，苦參中的主要有效成分是苦參堿，研究表明，生物堿具有很好的抗真菌作用；蛇床子素是蛇床子的主要有效成分，具有抗菌、殺蟲等功效；白鮮皮提取物有抗真菌作用，用于治療皮膚疥癬等；土荊皮的化學(xué)成分主要為二萜類化合物，具有治療癬癥等功效［11］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，黃連和苦參的乙醇提取物對(duì)6株真菌均有很好的抑菌活性，其次為蛇床子，而黃柏、白鮮皮和土荊皮的抗菌活性差。宮毓靜等［12］報(bào)道，白鮮皮和土荊皮乙醇提取物對(duì)白色念珠菌等真菌有很好的抗菌活性，而本試驗(yàn)中卻對(duì)6株真菌抗菌活性差，提示同種藥物對(duì)不同的菌作用靶點(diǎn)可能不同。

綜上所述，黃連和苦參可以應(yīng)用于養(yǎng)殖場(chǎng)臨床生產(chǎn)中。

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