UPLC法測定卡托普利原料藥的有關物質

邱榮榮，朱 娟，王亞芬

（常州制藥廠有限公司，江蘇常州 213000）

卡托普利（captopril）是首個人工合成口服有效的血管緊張素轉換酶抑制劑，已廣泛應用臨床，主要用于高血壓、充血性心力衰竭、心肌梗死、腎功能障礙等。盡管在各國藥典[1-3]均有收載，但檢測方法均存在一些不足，在前期研究過程[1-7]中發現，現有三種藥典檢測方法都不能很好分離本文確定的8個已知雜質（雜質A，C，G，H，I，J，M，N），都存在分析時間較長、分離度較差、峰型較差等問題。查閱文獻，參考歐洲藥典并結合目前藥品快速檢驗技術不斷更新和檢驗效率要求[1-7]，開發了超高效液相色譜法（UPLC）測定方法。本論文建立的UPLC方法操作簡便、結果準確，分離度好、重復性好，分析效率高。

1 儀器與試藥

Waters Aquity UPLC H-class超高壓液相色譜儀，Empower3 軟件；METTLER TOLEDO XP205DR電子天平；卡托普利原料藥（常州制藥廠有限公司，批號C170704）；卡托普利對照品（中檢所，批號100318-201103）及雜質A，C，I，G，H，J，M，N對照品（常州制藥廠有限公司）；乙腈為色譜純；磷酸為分析純；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH（2.1mm×100mm 1.7 μm）；流動相：以1 000mL水中加入0.3mL磷酸混勻為流動相A，以500mL水加入500mL乙腈加入0.3mL磷酸混勻為流動相B；以900mL水加入100mL乙腈加入0.3mL磷酸混勻為稀釋液；進行梯度洗脫（見表1）；流速0.43mL/min；檢測波長210nm；柱溫50℃；樣品室溫度5℃；進樣量1.8μL。

表1 流動相洗脫梯度

2.2 溶液的制備

稱取卡托普利雜質A對照品10mg，置于20mL容量瓶中加稀釋液溶解定容稀釋至刻度搖勻；稱取卡托普利雜質C，I，G，H，J，M，N各10mg，置于同一200mL量瓶中加稀釋液溶解稀釋至刻度搖勻；稱取30mg卡托普利對照品置于10mL量瓶中加上述雜質溶液各1mL再加稀釋液稀釋至刻度，搖勻作為系統適應性溶液；稱取卡托普利樣品約125mg于25mL容量瓶中，加稀釋液溶解并稀釋至刻度，搖勻作為供試品溶液；量取1mL供試品溶液置于100mL量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，搖勻。再量取1mL于10mL量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，搖勻作為對照溶液。

2.3 專屬性試驗

取系統適應性溶液照“2.1”項色譜條件進樣分析，系統適應性圖譜見圖1。結果表明，卡托普利主峰與各雜質峰均能達到良好的分離，各色譜峰間的分離度可達到4.5以上。

圖1 系統適應性圖譜

2.4 降解實驗

稱取本品125mg共9份，分別置25mL量瓶中，分別進行酸破壞（加4mL的0.5mol/LHCl溶液，放置2h，加0.5mol/LNaOH溶液4mL調pH至中性）、堿破壞（加4mL的0.5mol/LNaOH溶液，放置2h，加0.5mol/LHCl溶液4mL調pH至中性）、氧化破壞（加2mL 3%雙氧水放置2h）、光照破壞（置于4500LUX±500LUX下光照12d）、高溫破壞（置于100℃中放置4h）、高濕破壞（置濕度RH92.5%中放置14d）和未破壞均加稀釋液溶解并稀釋至刻度，搖勻作為降解供試品溶液。照“2.1”項下色譜條件測定上述溶液。降解實驗結果：卡托普利與各雜質峰（降解雜質峰）均能達到良好的分離，峰純度均符合要求（峰純度閾值大于峰純度角值），且質量保持平衡，能夠有效檢測樣品中的降解產物，氧化破壞雜質A，G和特定未知雜質增長較大，酸、堿、高溫破壞雜質A和特定未知雜質略有增長，其他破壞影響較小。

2.5 線性與校正因子

稱取卡托普利及雜質C，I，G，H，J，M，N對照品各10mg置于同一200mL量瓶中加稀釋液溶解并稀釋至刻度搖勻，分別移取0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0mL置于10mL量瓶稀釋液至刻度搖勻作為混合線性溶液；稱取雜質A對照品25mg置于50mL量瓶中加稀釋液溶解稀釋至刻度搖勻，分別移取0.1、0.5、1.0、3.0、5.0、10.0mL置于100mL量瓶加稀釋液至刻度搖勻作為雜質A線性溶液。照“2.1”項下色譜條件測定上述溶液，由濃度（μg/mL）對峰面積做線性回歸方程及校正因子，卡托普利和各雜質A，C，I，G，H，J，M，N線性方程分別為Y=7 823.532 6X、Y=7 540.8X-156.3、Y=1 404.6X-22.6、Y= 7 002.0X+56.3、Y=1 411.9X+94.6、Y=4 189.27X-56.5、Y= 6 639.8X-264.5、Y=5 050.1X-319.4、Y=1 792.5X-150.2；相關系數均大于0.999 5，在相應濃度范圍內線性良好；校正因子分別為1.0、5.6、1.1、5.5、1.9、1.2、1.6、4.4。

2.6 回收率試驗

稱取雜質A對照品25mg置于50mL量瓶中，加稀釋液溶解并稀釋至刻度，搖勻作為回收率貯備液①；稱取雜質C，I，G，H，J，M，N對照品各10mg于200mL量瓶中，加稀釋液溶解并稀釋至刻度，搖勻作為回收率貯備液②。稱取卡托普利樣品100mg共12份，分別置于20mL量瓶中，分別加入0.1mL貯備溶液①和1.0mL貯備液②平行3份；1.0mL貯備溶液①及2.0mL貯備液②平行3份；2.0mL貯備溶液①及3.0mL貯備液②平行3份；2.4mL貯備溶液①及4.0mL貯備液②平行3份加稀釋液溶解并稀釋至刻度，搖勻作為回收率供試品溶液。照“2.1”項下色譜條件測定上述12份溶液，計算各雜質A，C，I，G，H，J，M，N回收率分別為96.6%、104.2%、90.4%、101.5%、101.1%、101.8%、92.5%、99.9%和RSD分別為3.2%、2.6%、3.9%、4.3%、1.3%、1.8%、6.5%、10.1%，表明本方法雜質回收率好。

2.7 檢測限和定量限

精密稱取卡托普利及雜質A，C，I，G，H，J，M，N對照品各10mg分別置于20mL量瓶中加稀釋液溶解稀釋至刻度搖勻，精密移取相應溶液適量，用稀釋液逐級稀釋，照“2.1”項下色譜條件進樣分析，按信噪比S/N=10計算定量限0.38、0.32、0.53、0.36、0.64、0.95、0.91、0.58、2.33μg/mL均 低于相當于主成分0.05%限度水平，且連續6針峰面積RSD均小于5.0%；按信噪比S/N=3計算檢測限分別為0.13、0.10、0.17、0.12、0.21、0.31、0.30、0.19、0.77μg/mL均低于相當于主成品0.02%限度水平。

2.8 穩定性試驗

取供試品溶液，于儀器樣品室中（5℃）條件下，分別于0、4、8、12、18、24h，照“2.1”項下色譜條件進樣分析，試驗結果供試品溶液8h內較為穩定（雜質A隨置時間有很小幅度增長，由0h的0.06%增長至8h的0.08%，峰面積的RSD%小于10%）。

2.9 耐用性考察

根據“2.1”項下色譜條件，分別改變柱溫（48、52℃）、流速（0.41、0.45mL/min）、波長（208、212nm）、流動相A中磷酸加入量（0.02、0.04%）和流動相B中乙腈與水的比例（48∶52、52∶48）進行系統適應性溶液試驗，結果表明上述色譜條件下，卡托普利與各雜質峰間均能達到較好分離，其參數的微小變化不影響檢測，表明本方法耐用性較好。

3 結語

本文UPLC法測定卡托普利原料藥有關物質，各雜質分離效果好、線性好、重復性好、準確度高、回收率好。與HPLC法比，UPLC法分析時間短、分離效率高、檢出能力強、溶劑用量少，可用于卡托普利原料藥有關物質的質量控制。