高效液相色譜法檢測含乳飲料中的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉3種添加劑含量

吳昌林

(南京衛(wèi)崗乳業(yè)有限公司，南京 211106)

我國食品添加劑種類繁多，共分為23個大類，如防腐劑、甜味劑、水分保持劑、增稠劑、消泡劑等，目前我國使用的添加劑品種超過2500種，其中防腐劑和甜味劑是老百姓常見到的食品添加劑[1，2]；防腐劑顧名思義，加入到食品中具有防腐保質(zhì)的作用，甜味劑能夠增加食品的甜度，增強(qiáng)食品的口感[3，4]；防腐劑中苯甲酸、山梨酸是常用的食品添加劑，甜味劑中糖精鈉為常用的食品添加劑[5，6]，本實(shí)驗(yàn)開發(fā)了一種采用高效液相色譜法檢測含乳飲料中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的分析方法，實(shí)驗(yàn)表明，方法具有簡便、重復(fù)性好、速度快等特點(diǎn)，適用于含乳飲料中防腐劑和甜味劑的測定。

1 材料與方法

1.1 材料

安捷倫1260型，配置PDA檢測器、在線脫氣機(jī)、自動柱溫箱等(美國Agilent)； AB135-S型萬分之一微量電子天平(瑞士梅特勒)；色譜柱：shimadzu ODS-C18(規(guī)格：250×4.6mm,5 μm)；超純水器：Milli-Q A10型超純水處理系統(tǒng)(美國密理博)；KQ-2400B型數(shù)控超聲波清洗機(jī)(昆山超聲儀器)；T10型混合機(jī)(廣州艾卡)。

苯甲酸(編號：GBW(E)100508)、山梨酸(編號：GBW(E)100544)、糖精鈉(編號：GBW(E)100008)：規(guī)格1.0 mg/mL，國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心；乙酸鋅、乙酸銨、亞鐵氰化鉀：分析純(國藥集團(tuán))；甲醇、乙腈：色譜純(美國MERCK公司)；超純水：自制；其他試劑均為分析純，購自國藥集團(tuán)。

實(shí)驗(yàn)檢品：市售含乳類飲料。

1.2 方法

色譜柱：shimadzu ODS-C18(規(guī)格：250×4.6mm,5 μm)；柱溫：室溫；流速：1.0 mL/min；測定波長：223 nm；進(jìn)樣體積：25 μL；流動相A：0.02 mol/L乙酸銨，流動相B：甲醇。洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

1.3 溶液配制

1.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液

取苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別精密移取1.0 mL，置10mL容量瓶中，加純化水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

1.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液

取1.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，分別精密移取適量，配制濃度依次為0.3、0.6、1.0、3.0、6.0、12.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，加純化水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

1.3.3樣品溶液

取含乳類飲料，搖勻，精密移取5.0 mL，置50mL容量瓶中；準(zhǔn)確移取5.0 mL亞鐵氰化鉀溶液、5.0 mL乙酸鋅溶液，加入到上述樣品溶液中，加純化水稀釋至標(biāo)線，搖勻；取濾紙過濾，棄去初濾液，續(xù)濾液過0.45μm濾膜，即得樣品溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 流動相的確定

實(shí)驗(yàn)比較甲醇與0.02 mol/L乙酸銨溶液、乙腈和0.02 mol/L乙酸銨溶液、甲醇和水體系，保持其他色譜條件不變的情況下，選擇上述3種流動相體系洗脫。結(jié)果表明，甲醇和水體系不適用，山梨酸色譜峰分叉；甲醇與0.02 mol/L乙酸銨溶液體系相比較乙腈和0.02 mol/L乙酸銨溶液，更適用3種添加劑的分離，故選擇甲醇與0.02 mol/L乙酸銨溶液體系作為流動相體系。

2.2 測定波長的確定

取苯甲酸、山梨酸和糖精鈉單標(biāo)溶液，分別在紫外光區(qū)進(jìn)行光譜掃描，記錄3種添加劑的紫外光譜圖，根據(jù)苯甲酸、山梨酸和糖精鈉紫外光譜吸收情況：苯甲酸在225 nm處，山梨酸在252 nm處，糖精鈉在270 nm處；為使3種添加劑達(dá)到最優(yōu)化響應(yīng)，故選擇245 nm作為測定波長。典型譜圖見圖1～圖4。

圖1 苯甲酸吸收光譜圖

圖2 山梨酸吸收光譜圖

圖3 糖精鈉吸收光譜圖

圖4 典型標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢出限、定量限

取1.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液(3種添加劑濃度依次為：0.3、0.6、1.0、3.0、6.0、12.0 μg/mL)，按1.2方法設(shè)置儀器，穩(wěn)定20min后，各濃度點(diǎn)分別進(jìn)樣25 μL，記錄峰面積，以苯甲酸、山梨酸和糖精鈉質(zhì)量濃度作為橫坐標(biāo)(X)，峰面積作為縱坐標(biāo)(Y)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，根據(jù)3倍信號噪音比值計(jì)算檢測限，10倍信噪比計(jì)算定量限。結(jié)果見表2。

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢測限

2.4 加標(biāo)回收率

取含乳類飲料，搖勻，精密移取5.0 mL，置50mL容量瓶中，共量取2份樣品溶液；分別加入適量1.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，再準(zhǔn)確移取5.0 mL亞鐵氰化鉀溶液、5.0 mL乙酸鋅溶液，加入到上述樣品溶液中，加純化水稀釋至標(biāo)線，搖勻；取濾紙過濾，棄去初濾液，續(xù)濾液過0.45μm濾膜，即得樣品加標(biāo)溶液；按1.2方法設(shè)置儀器，穩(wěn)定20min后，分別進(jìn)樣25 μL，記錄峰面積，根據(jù)峰面積計(jì)算加標(biāo)回收結(jié)果。結(jié)果見表3。

表3 加標(biāo)回收結(jié)果

2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取含乳類飲料，搖勻，精密移取5.0mL，置50mL容量瓶中，共量取6份樣品溶液；分別加入一定量1.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，再準(zhǔn)確移取5.0mL亞鐵氰化鉀溶液、5.0mL乙酸鋅溶液，加入到上述樣品溶液中，加純化水稀釋至標(biāo)線，搖勻；按1.2方法設(shè)置儀器，穩(wěn)定20min后，分別進(jìn)樣25 μL，記錄峰面積，根據(jù)峰面積計(jì)算檢測結(jié)果的重復(fù)性相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。結(jié)果顯示，苯甲酸、山梨酸和糖精鈉重復(fù)性RSD分別為2.1%、3.2%和3.8%，表明方法具有良好重復(fù)性(表4)。

表4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.6 市售樣品測定

取市售含乳類飲料，搖勻，精密移取5.0 mL，置50mL容量瓶中；準(zhǔn)確移取5.0 mL亞鐵氰化鉀溶液、5.0 mL乙酸鋅溶液，加入到上述樣品溶液中，加純化水稀釋至標(biāo)線，搖勻；取濾紙過濾，棄去初濾液，續(xù)濾液過0.45μm濾膜，即得樣品溶液，結(jié)果見表5。

表5 市售樣品測定結(jié)果 mg/kg

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)建立了高效液相色譜法測定含乳飲料中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉含量的分析方法，分別對方法的精密度、重復(fù)性、加標(biāo)回收、線性等進(jìn)行了系統(tǒng)的考察，并對方法的測定波長和流動相進(jìn)行了優(yōu)化；實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，方法具有簡便、重復(fù)性好、速度快等特點(diǎn)，適用于含乳飲料中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉含量的測定，為標(biāo)準(zhǔn)起草提供技術(shù)參考。