牛共刺激分子CD80、CD86 SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR檢測方法的建立

（西昌學院動物科學學院，西昌 615000）

T細胞作為機體重要的免疫細胞，若想發揮其功能，就需要兩種信號的刺激來使其活化。第一種刺激是T細胞抗原受體與抗原肽-MHC復合物的特異性結合，第二種刺激是抗原提呈細胞表達的共刺激分子與T細胞表面的相應受體作用提供的共刺激信號[1]。在這兩種信號中，僅憑第一種信號無法引起細胞因子的分泌，也無法引起T細胞的增殖。而第二種信號，即共刺激信號，雖是非抗原依賴性的，但它決定了接受第一種信號后的T細胞到底是開始活化增殖還是轉為無能[2]，對T細胞的功能表達具有至關重要的作用。B7家族分子是主要的共刺激分子，而CD80、CD86是B7家族分子的重要成員，也是近年來受到關注較多的成員。CD28、CTLA-4都是T細胞表面的受體，但CD80、CD86與它們結合后產生的效果卻截然不同。前一種受體可以刺激T細胞活化，而后一種受體則會抑制T細胞活化[3]。熒光定量PCR作為一種新的定量試驗技術相比于傳統PCR有更多的優點，它不僅可以完成對DNA模板的定量檢測，而且靈敏度更高、特異性更好、更加可靠，且沒有氣溶膠污染的風險[4]。目前已有很多關于使用熒光定量PCR技術來檢測細胞因子的研究[5～9]。本研究旨在建立一種特異性強的SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR方法，通過該方法能快捷檢測牛共刺激分子CD80、CD86，為抗病毒相關研究提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

取健康牛新鮮的脾臟，加適量生理鹽水后攪碎，靜置，取上層液體，小分裝-20℃凍存備用。

1.2 主要試劑與儀器

UNIQ-10柱式Trizol總RNA抽提試劑盒、M-MuLV第一鏈cDNA合成試劑盒和2×SG Fast qPCR Master Mix，均購自上海生工生物工程股份有限公司；……