液質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定水產(chǎn)品中磺胺類代謝物含量的不確定度評(píng)定

彭家杰，李鴻超，羅健民

(1 東莞市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣東 東莞 523002；2 東莞市水產(chǎn)學(xué)會(huì)，廣東 東莞 523002)

磺胺類(Sulfonamides)藥物為人工合成的抗菌藥，用于臨床已近50年，它具有抗菌譜較廣、性質(zhì)穩(wěn)定、使用簡(jiǎn)便、生產(chǎn)時(shí)不耗用糧食等優(yōu)點(diǎn)[1-3]，被廣泛用于水產(chǎn)品等養(yǎng)殖生產(chǎn)中[4]。但是磺胺類藥能引起多種不良反應(yīng)，累及很多臟器系統(tǒng)，如血液和骨髓、皮膚、腎、肝、神經(jīng)系統(tǒng)等。因此快速且準(zhǔn)確地測(cè)定磺胺類藥物在生物體內(nèi)的含量，對(duì)于考察動(dòng)物性食品中殘留引起生態(tài)環(huán)境污染和人類健康危害的潛在威脅以及藥物殘留監(jiān)測(cè)食品安全等方面具有重要意義[5]。

測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性是實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)最基本的標(biāo)準(zhǔn)之一，但是由于測(cè)量誤差的存在，其測(cè)量結(jié)果只能得到一個(gè)在誤差范圍內(nèi)的近似估計(jì)值，所以任何測(cè)量方法都必須引入不確定度，不確定度的評(píng)定是在國(guó)內(nèi)外都是互相認(rèn)可和通用的準(zhǔn)則，在實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理中起到了重要作用。本實(shí)驗(yàn)依據(jù)CNAS-GL06 《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》[6]和JJF 1059.1-2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》[7]規(guī)定的基本方法和程序，對(duì)液質(zhì)法測(cè)定水產(chǎn)品中磺胺類殘留量的不確定度進(jìn)行分析評(píng)定，找出主要分量，從而提高檢測(cè)質(zhì)量。

1 概 述

1.1 目 標(biāo)

通過(guò)對(duì)液質(zhì)內(nèi)標(biāo)法測(cè)定水產(chǎn)品中SAs代謝物殘留量的測(cè)量不確定度進(jìn)行評(píng)定，找出其影響因素，提高測(cè)量的置信度和準(zhǔn)確性。

1.2 測(cè)量?jī)x器設(shè)備

Waters Xevo TQ-S micro液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，配備點(diǎn)噴霧離子源(ESI)，美國(guó)Waters公司；渦旋振蕩器，德國(guó)IKA-MS3公司；平行蒸發(fā)儀，瑞士BuChi公司；Milli-Q型超純水儀，美國(guó)Millipore公司；LXJ-IIB型離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；超聲波清洗機(jī)，昆山市超聲儀器有限公司；TE612-L分析天平，賽多利斯；BT125D型電子天平，賽多利斯。

1.3 樣品前處理方法

參考農(nóng)業(yè)部1077號(hào)公告-1-2008《水產(chǎn)品中17種磺胺類及15種喹諾酮類藥物殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》進(jìn)行。

2 結(jié)果與討論

2.1 數(shù)學(xué)模型

根據(jù)測(cè)量方法建立樣品中磺胺類類代謝物殘留量的數(shù)學(xué)模型如下：

(1)

2.2 測(cè)量不確定度的來(lái)源及合成

試樣中磺胺類藥物殘留量測(cè)量不確定度來(lái)源主要有以下幾個(gè)方面：標(biāo)準(zhǔn)溶液(外標(biāo))的配制引入的不確定度；內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(內(nèi)標(biāo))的配置引入的不確定度；測(cè)量重復(fù)性引入的不確定度；加標(biāo)回收率引入的不確定度曲線校準(zhǔn)引入不確定度；待測(cè)液體積定容引入的不確定度；樣品稱量引入的不確定度；液質(zhì)聯(lián)用儀校準(zhǔn)引入的不確定度。

結(jié)合上面各種影響因素，其合成不確定度的計(jì)算公式為：

(2)

2.3 各項(xiàng)目不確定度分量計(jì)算

2.3.1 測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u1rel

本評(píng)定方法以SD為例，測(cè)量樣品重復(fù)性引起的不確定度分量，屬A類標(biāo)準(zhǔn)不確定度，以算術(shù)平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。對(duì)未知濃度樣品進(jìn)行6次重復(fù)測(cè)量，平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差Sa(μg/kg)及u1rel見(jiàn)表1。

表1 測(cè)定結(jié)果及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度(n=6)Table 1 Determination results and relative standard uncertainty (n=6)

2.3.2 曲線校準(zhǔn)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u2rel

制備6個(gè)濃度梯度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液c，每個(gè)濃度測(cè)量1次，以cis為橫坐標(biāo)，以Ais為縱坐標(biāo)，用cisng/mL最小二乘法擬合，獲得直線方程A=a+bc以及線性相關(guān)系數(shù)r，列于表2。

表2 SD標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果及不確定度計(jì)算Table 2 Fitting standard solution mass concentration-peak area by least square method

2.3.3 定容體積引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u3rel

2.3.4 稱量樣品引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u4rel

稱量樣品用百分之一天平，其計(jì)量檢定證書給出的擴(kuò)展不確定度U=0.05 g，k=2。樣品稱樣量2 g(精確到0.01 g)，稱量樣品所用天平引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.3.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液(外標(biāo))配制引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u5rel

2.3.5.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(外標(biāo))純度的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u51rel

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(外標(biāo))純度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度見(jiàn)表3。

表3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度Table 3 Relative standard uncertainties of purity of reference materials

2.3.5.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定容引入的不確定度u52rel

2.3.5.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稀釋引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u53rel

用1000 μL移液槍和10 mL容量瓶將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋，使用2次1000 μL移液槍及2次10 mL容量瓶，稀釋過(guò)程中引入的不確定度如下：

由此可得，標(biāo)準(zhǔn)溶液(外標(biāo))的配制引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度如下：

2.3.6 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(內(nèi)標(biāo))的加入量引入的不確定度u6rel

2.3.6.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u61rel

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(內(nèi)標(biāo))純度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度見(jiàn)表4。

表4 固體廢物樣品分析Table 4 Sample analysis of solid waste

表4 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(內(nèi)標(biāo))純度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度Table 4 Relative standard uncertainties of purity of internal standard reference materials

2.3.6.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(內(nèi)標(biāo))稱量引入的不確定度u62rel

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(內(nèi)標(biāo))稱量用十萬(wàn)分之一天平，其檢定證書提供的擴(kuò)展不確定度U=0.017 mg，k=2。稱量標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)天平引入的不確定度為：

2.3.6.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(內(nèi)標(biāo))定容引入的不確定度u63rel

2.3.6.4 內(nèi)標(biāo)稀釋過(guò)程引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u64rel

內(nèi)標(biāo)稀釋過(guò)程采用100 μL移液槍、1000 μL移液槍和10 mL容量瓶將內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液稀釋，稀釋過(guò)程使用1次100 μL移液槍、1次1000 μL移液槍和2次10 mL容量瓶，稀釋過(guò)程中引入的不確定度：

2.3.6.5 內(nèi)標(biāo)加入引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u65rel

由此可得，由內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的加入量引入的不確定度如下：

2.3.7 提取回收率引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u7rel

表5 樣品加標(biāo)回收的不確定度Table 5 Uncertainties of sample recovery

2.3.8 液質(zhì)聯(lián)用儀校準(zhǔn)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u8rel

2.4 評(píng)定測(cè)量量之間的相互關(guān)系

測(cè)量量之間相互獨(dú)立，沒(méi)有任何相關(guān)性。

2.5 合成不確定度及檢測(cè)結(jié)果表述

由上述所得數(shù)據(jù)代入公式(2)，合成不確定度結(jié)果如表6所示。

表6 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度Table 6 Composite the standard uncertainties

2.6 計(jì)算擴(kuò)展不確定度

取包含因子k=2(95%置信概率)，其擴(kuò)展不確定度表示，結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 不確定度評(píng)定結(jié)果Table 7 Evaluation results of uncertainties

3 結(jié) 論

通過(guò)以上不確定度評(píng)定分析得知，利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定水產(chǎn)品中磺胺類代謝物含量的實(shí)驗(yàn)中，影響測(cè)量結(jié)果的不確定度主要來(lái)源于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀的校準(zhǔn)、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合校準(zhǔn)和提取回收率，其他因素影響不大。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可通過(guò)優(yōu)化標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液配置、控制提取回收率來(lái)保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度。