血清THBS2在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義

范沖沖,葉圣昌,陳賢真,李雪影,喬建甌

(上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院呼吸內科,上海200011)

據《2018年全球癌癥統計數據》獲知，在185個國家36種癌癥中肺癌作為臨床最常見的惡性腫瘤之一,其發病率和病死率均居于首位,占癌癥死亡總人數的18.4%[1]。作為占據肺癌病理類型80%的非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)[2]，其起病隱匿，無特異性臨床表現,且容易發生遠處轉移及區域淋巴結轉移，故多數患者被確診時已處于臨床晚期，治療效果及生存率均不樂觀。因此，探索非小細胞肺癌的發病機制，尋找可以作為早期診斷的標志物，對于提高臨床診斷率和患者的生存率至關重要。血小板反應蛋白-2(THBS2)是由基質成纖維細胞和內皮細胞等細胞釋放的一種150 kDa鈣結合蛋白，參與細胞骨架組織的組成，細胞運動，血管生成和細胞凋亡等多種細胞活動[3-5]。目前研究發現，THBS2在多種腫瘤組織和血清中高表達，并且與腫瘤進展和總體存活率密切相關。由此，本研究通過檢測血清THBS2水平，來探討其與非小細胞肺癌患者臨床病理特征之間的關系，為臨床診斷、治療非小細胞肺癌及判斷預后提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 資料

選取我院 2019年3月-2019年9月收治的69例非小細胞肺癌患者及50例健康體檢者為研究對象，所有研究對象排除有肺部感染、慢性阻塞性肺疾病、哮喘等肺部良性疾病，排除合并其它臟器疾病，合并自身免疫性疾病，有其它惡性腫瘤病史，手術前均未進行放、化療及免疫治療。臨床分期按照國際抗癌聯盟新推出的第八版肺癌 TNM 分期標準，分為Ⅰ期19例，Ⅱ期20例，Ⅲ期9例，Ⅳ期21例。本研究獲得醫院倫理委員會的批準，所用的標本均得到患者的知情同意。

1.2 標本采集與檢測方法

非小細胞肺癌患者于入院第二天清晨空腹采集肘正中靜脈血3-5 ml于肝素抗凝試管內，健康對照組于體檢當日采集，采集的血漿標本進行離心處理，3 000 r/min 離心10 min，取上層血清放于-80℃下儲存備用。THBS2的檢測嚴格按照THBS2酶聯免疫吸附試驗(ELISA) 檢測試劑盒(生產廠家:美國 R&D System) 說明書進行操作，然后檢測 OD 值，帶入標準曲線方程中計算出樣品中THBS2濃度。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 兩組研究對象血清THBS2水平的比較

ELISA 檢測結果顯示，非小細胞肺癌患者血清THBS2水平顯著高于健康對照組[(28.37±8.24) ng/mL vs (18.99±5.30) ng/mL]，且兩組比較差異有統計學意義(t=7.543，P=0.000) ，見圖1。

2.2 非小細胞肺癌患者血清THBS2水平與臨床病理特征的關系

血清 THBS2水平與非小細胞肺癌患者的年齡、性別、吸煙、病理類型及分化程度無關(P>0.05)；而與非小細胞肺癌腫瘤直徑、臨床分期及淋巴結轉移密切相關(P<0.05),見表1。

圖1 兩組研對象血清THBS2的水平比較

表1 非小細胞肺癌患者血清THBS2水平與臨床病理特征的關系

2.3 血清THBS2的臨床診斷價值

通過繪制所得的ROC曲線分析，可知在THBS2 的血清水平為(25 ng/mL) 時，為最佳截點，曲線下面積(AUC)為0.813(P<0.001，95% CI:0.738-0.888)，敏感度為66.7%和特異度為90.0%，見圖 2。

圖2 血清THBS2在非小細胞肺癌中的診斷價值

3 討論

血小板反應蛋白2(THBS2)屬于由基質成纖維細胞，內皮細胞和免疫細胞分泌的基質細胞鈣結合糖蛋白家族的一員。其與各種細胞表面受體、生長因子、細胞因子和蛋白酶相互作用，以參與細胞基質粘附、運動、趨化性、傷口愈合、血管抑制等[6]。目前，有關THBS2在多種腫瘤中的表達及作用的研究結果尚存在爭議。一方面，THBS2在胃癌中具有抗血管生成，抗腫瘤轉移的作用[7]，另一方面，THBS2在胰腺癌[8]、結直腸癌[9]、膀胱癌[10]、乳腺癌[11]等腫瘤中有促進腫瘤細胞生長作用，與腫瘤進展和總體存活率密切相關。研究發現，THBS2可通過增強AXL依賴的生態位成纖維細胞活化來增強成纖維細胞的作用，進而參與乳腺癌的上皮-間質轉化[11]。在肺癌方面，Weng TY等[12]發現，肺腺癌和鱗癌組織中THBS2 mRNA的表達量顯著增加，且與臨床結局顯著相關，免疫組織化學顯示THBS2的表達水平與腫瘤大小和分期具有顯著相關性，進一步研究提示，與THBS2共表達的COL5A2，MXRA5和VCAN基因可能在肺癌的發生發展中具有重要意義。Liu等[13]發現THBS2能夠通過誘導肺癌細胞中基質金屬蛋白酶-13的產生來促進腫瘤轉移。

本研究結果顯示，THBS2在非小細胞肺癌患者血清中較健康對照組高表達，且有統計學意義。預示著血清THBS2的水平可能成為非小細胞肺癌潛在的診斷指標。通過分析THBS2與非小細胞肺癌患者臨床病理特征的關系發現，腫瘤組織直徑越大、臨床分期越高、淋巴結發生轉移，對應受檢患者血清中THBS2水平越高，說明THBS2的高表達與非小細胞肺癌的發生發展密切相關。這與Weng TY等[12]在微陣列基因表達和深入的蛋白質組學分析方面的研究的結果具有相同的趨勢和意義。近年來，THBS2作為新的腫瘤標志物在腫瘤的輔助診斷中發揮重要作用。Wang X等[14]發現，胰腺癌患者血漿中THBS2水平顯著升高，且與臨床病理特征具有顯著相關性，可作為預測結直腸癌患者臨床結果的潛在生物標志物。Zhang J等人[15]研究表明，肝細胞癌患者血清中THBS2的水平顯著升高，且高水平的血清THBS2與肝細胞癌患者的微血管侵犯和TNM分期顯著相關,THBS2水平高的肝細胞癌患者的DFS和總生存期明顯短于THBS2水平低的患者,認為THBS2可用作肝細胞癌患者預后的候選血清生物標志物。THBS2在多種腫瘤中的表達水平與腫瘤大小、臨床分期、淋巴結轉移及不良預后密切相關，這與我們目前的研究結果相一致。通過分析ROC曲線可知，血清THBS2診斷非小細胞肺癌的敏感性為66.7%，特異性為90.00%，ROC曲線下面積為0.81。這意味著血清THBS2診斷非小細胞肺癌的特異性較高，有望成為非小細胞肺癌篩查和診斷的潛在腫瘤標志物，具有較高的臨床應用價值。

綜上所述，THBS2與非小細胞肺癌的發生與發展密切相關，在非小細胞肺癌患者血清中高表達，且與臨床病理特征顯著相關，可作為非小細胞肺癌潛在的生物標志物，有較高的診斷和臨床評估價值。但本研究樣本量較小，尚需擴大臨床病例數來進一步評價THBS2對非小細胞肺癌的診斷價值。還可進一步設計前瞻性研究，探討血清THBS2的表達水平與非小細胞肺癌患者生存期及預后的關系。