老年冠心病外周血清中miR-192-5p及TNF-α的表達水平及臨床意義

袁奇

隨著社會老齡化趨勢，冠心病發病率明顯上升。冠狀動脈造影技術是冠心病常見的診斷方式，但難以評估冠脈血管病變程度，具有一定局限性。因此，找出能準確診斷冠心病的標記物，對老年冠心病的病情診斷與防治有重要意義［1］。研究證實，老年冠心病的病因主要為冠狀動脈發生粥樣硬化（AS），斑塊脫落引起血管腔狹窄或血管阻塞，從而造成心肌壞死、缺血等［2-3］。有研究表明，AS是一種炎性疾病，炎癥反應的激活可能是導致AS斑塊破裂脫落的主要因素［4-5］。TNF-α是重要的炎性細胞因子，其表達水平可反映炎癥反應的激活狀況［6］。另外，血小板在動脈AS過程中有著重要作用，血小板含有豐富的miRNA。其中微小分子miR-192基因有兩條成熟的鏈，即miR-192-5p和miR-192-3p，而miR-192-5p是一種多功能的調節因子，被認為在諸多疾病的病理過程中發揮重要作用［7］。miR-192-5p相對表達量是否與老年冠心病的發生和演變有關，目前尚無相關報道。因此，本研究擬觀察老年冠心病病人miR-192-5p、TNF-α 的水平，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取2016年9月至2018年3月在我院心內科住院治療的80例老年冠心病病人作為冠心病組，其中男38例，女42例；年齡63～86歲，平均（71.89±5.67）歲；80例病人均經冠狀動脈造影檢查確診為冠心病。選擇同期體檢健康者80例作為對照組，其中男36例，女44例；年齡62～87歲，平均（72.78±5.73）歲。本研究已獲得我院倫理委員會批準。

1.2 選取標準 納入標準：（1）臨床資料完整；（2）年齡≥60歲；（3）有miR-192-5p及TNF-α檢測結果者；（4）病人對本研究內容知情，且自愿簽署知情同意書。排除標準：（1）先天性心臟病者；（2）合并有慢性阻塞性肺疾病；（3）急性感染者；（4）合并惡性腫瘤者；（5）嚴重肝、腎功能不全者；（6）中途退出本研究或失訪者。

1.3 方法

1.3.1 臨床資料收集：收集入組對象的病歷資料，包括年齡、性別、BMI等一般資料；并收集白蛋白（Alb）、Hb、HDL-C、LDL-C、TG、TC 等生化指標。

1.3.2 血清中 miR-192-5p、TNF-α 的測定：（1）樣本收集：于早晨7：00～9：00，抽取對象的空腹靜脈血5 mL，并在20 min內，以3000 r/min離心15～20 min，提取血清到EP管內，置于-80℃低溫冰箱內保存待測。（2）miR-192-5p相對表達量的檢測：①總RNA提取：將在超低溫冰箱中的血清標本取出，采用trizol試劑提取血清中的總RNA，取1 μL，采用紫外分光光度計檢測RNA的濃度、純度。在提取過程中用到的器械及耗材均經高溫及水浸泡消除RNA酶。②miRNA逆轉錄反應：miR-192-5p逆轉錄反應試劑均購自天根生物科技（中國）有限公司的miRNAcute miRNA試劑盒。miR-192-5p 上游引物：5'-GTGGACCTGACCTGCCGTCT-3'；下游引物：5'-GGAGGAGTGGGTGTCGCTGT-3'；采用熒光定量PCR法檢測，以U6為內參，上游引物：5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'；下游引物：5'-CGCTTCACGAATTTGCG-3'；采用 96 孔板 20 μL 體系（2x SYB Green 緩沖液 10 μL），40 個循環（95℃15 s、60℃30 s、0℃5 min）72℃延伸5 min。根據公式2-△△CT分別計算出miR-192-5p相對表達量。（3）TNF-α表達的檢測：采用放射免疫法測定血清中的TNF-α表達水平，試劑盒購自解放軍總醫院科技開發中心放免研究所，檢測人員嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.4 統計學分析 應用SPSS 24.0軟件進行統計分析。其中計量資料采用均數±標準差（±s）表示，組間比較采用成組t檢驗；采用Pearson直線相關分析miR-192-5p、TNF-α水平與一般臨床資料的相關性。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組的一般臨床資料比較 2組的年齡、性別、BMI、Alb、Hb、LDL-C、TC、TG 比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；冠心病組的TNF-α水平高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；冠心病組的HDL-C和miR-192-5p相對表達量明顯低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表 1 2 組一般臨床資料比較（±s，n=80）

表 1 2 組一般臨床資料比較（±s，n=80）

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

項目 對照組 冠心病組年齡（歲） 72.78±5.73性別（n，男/女） 36/44 71.89±5.67 38/42 BMI Alb（g/L）22.43±4.72 38.89±4.48 Hb（g/L）HDL-C（mmol/L）22.52±4.61 39.32±4.39 122.89±13.57 1.36±0.32 124.61±14.93 0.91±0.36*LDL-C（mmol/L）TG（mmol/L）TC（mmol/L）2.72±0.45 1.86±0.37 5.31±0.89 3.21±0.58 2.12±0.65 5.15±0.87 miR-192-5p相對表達量 1.323±0.211 TNF-α 1.24±0.23 0.383±0.102**4.04±0.31*

2.2 Pearson相關性分析 Pearson相關性分析結果顯示，miR-192-5p與老年冠心病病人的年齡、性別、BMI、Alb、Hb、LDL-C、TG、TC 水平無關（P ＞0.05），與 HDL-C呈正相關（P ＜ 0.05）；TNF-α 與年齡、性別、BMI、Alb、Hb、HDL-C、LDL-C、TG、TC 水平均無關（P ＞ 0.05）。

3 討論

《中國心血管病報告2018》指出，中國心血管疾病的患病率和死亡率仍處于上升趨勢［8］。據推算，我國心血管疾病的患病人數約為2.9億人，冠心病是心血管疾病的常見病，其患病人數高達1100萬，推測往后10年，中國冠心病人數仍處于快速增長趨勢，造成這種趨勢主要與人口老齡化和心血管病的危險因素上升有關。因此，尋找能夠正確評估老年冠心病病人的特異指標篩選高危病人，對其進行早期干預，對改善老年冠心病預后具有重要臨床意義。

miR-192-5p是一種多功能的調節因子，被認為在諸多疾病病理過程中發揮重要作用。有報道顯示，急性心肌梗死后心衰病人血清miR-192表達水平顯著降低［9］。本研究發現，冠心病組的miR-192-5p相對表達量明顯低于對照組，且Pearson相關性分析發現，miR-192-5p相對表達量與HDL-C呈正相關（P＜0.05）。提示外周血清中的miR-192-5p有可能通過HDL-C發揮作用，參與冠心病的發生和發展。其原因可能如下：miRNA可與HDL-C在內的多種脂蛋白形成復合物，使脂蛋白成為miR-192-5p信號運轉系統的組成部分，從而避免被血清中的核糖核酸酶降解。有國外學者發現，肝臟缺血/再灌注損傷的內源性調節因子IL-33可激活 p38（MAPK）/NF-Kb/cyclin D1 信號通路，限制肝細胞損傷并降低炎癥反應［10］。miR-192-5p有可能參與p38（MAPK）/NF-Kb/cyclin D1 信號通路，對 TNF-α 誘導的內皮損傷產生應答反應。因此，我們推測，miR-192-5p相對表達量下調可增強炎癥相關通路信號，與內皮細胞炎性微環境密切相關，加速血管內AS進程，參與冠心病發生和發展。眾所周知，AS是造成冠心病的病理基礎，而炎性反應是AS及其并發癥的病理基礎。AS的發展主要與炎性因子浸潤密切相關，其中TNF-α是炎性反應的主要啟動因子，是損傷反應時由單核細胞、巨噬細胞、平滑肌細胞、內皮細胞、中性粒細胞等釋放的多肽類物質［11-12］。因此，TNF-α在冠心病的血管損傷和心肌缺血中起著重要作用。本研究發現，冠心病組的TNF-α水平明顯高于對照組（P＜0.05），提示TNF-α水平升高可能參與了老年冠心病的形成和發展的各個階段。TNF-α主要由活化的單核細胞和巨噬細胞產生，通過黏附和趨化作用可促進單核細胞向內皮細胞的黏附，促進血管平滑肌細胞遷移。同時通過調控血管壁細胞的增殖、壞死和凋亡，促進細胞外基質與血管活性物質的合成、分泌，進而導致脂代謝異常。

綜上所述，老年冠心病病人外周血miR-192-5p相對表達量降低，TNF-α表達水平增高，其水平與老年冠心病的病變相關。在臨床管理中，檢測老年冠心病病人的miR-192-5p及TNF-α表達水平，對臨床診斷、預后防治可能具有重要臨床意義。