維A 酸對糖尿病腎病大鼠血中MCP-1及尿中足細胞的影響*

劉建林 李惠 牛聰 王文政 胡春艷 陳明亮

（1河南大學第一附屬醫院腎內科 開封475001；2河南大學基礎醫學院 開封475004）

糖尿病是一種以高血糖為臨床特征的代謝性疾病，多尿、多飲、多食、消瘦是其主要的臨床特征[1]。糖尿病合并多種并發癥，其中以糖尿病腎病的危害性、嚴重性最大，糖尿病腎病由于機體長時間處于高血糖狀態引起腎血流動力學改變，引發微血管病變，進而導致腎小球硬化，腎臟結構改變，是造成胰島素依賴性糖尿病（IDDM）患者死亡的主要原因[2]。在血管病變中，炎癥為主要影響因素，單核細胞趨化蛋白-1（Monocyte Chemotactic Protein-1, MCP-1）作為細胞趨化因子，是炎癥反應的重要介導細胞因子。 在腎小球的過濾中，由于腎小球基底膜與足細胞相連，使足細胞在其過濾中起到重要的作用[3]。 本研究采用維A 酸對糖尿病腎病大鼠進行治療，旨在探討維A 酸對糖尿病腎病大鼠血中MCP-1及尿中足細胞的影響。 現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院提供的健康大鼠20只，隨機將其分為對照組和觀察組，各10只，另設正常組10只。 年齡2～7周，平均（3.45±2.13）周，體質量150～200g。對照組和正常組采用適量食用油進行灌服， 觀察組使用維A 酸（國藥準字H10950191）40～80mg/d， 灌服8周， 所有動物都正常進食食用水。 本研究經過我院醫學倫理委員會批準。

1.2 研究方法

1.2.1 血中MCP-1檢測方法 對所有大鼠在實驗每周進行血糖測定，在第8周進行股動脈抽血進行MCP-1含量的測定。用酶聯免疫吸附法進行MCP-1含量檢測。 用鼠尾血進行血糖測定。

1.2.2 尿中足細胞檢測方法 在試驗結束前1天對所有大鼠的24h 尿液進行收集，根據相關研究方法進行足細胞的測定。使用間接免疫熒光法，進行腎小球足細胞特異性標記蛋白（PCX）的測定[4]。 PCX陽性的細胞為足細胞。

1.3 觀察指標 對比各組大鼠血清中MCP-1的變化情況；各組24h 尿蛋白含量；兩組大鼠尿液中足細胞及腎小球中位硬化指數；進行相關性分析。

1.4 統計學方法 數據采用SPSS25.0統計學軟件分析。 計量資料以（±s）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用SNK-q 檢驗；計數資料以率表示，采用χ2檢驗，相關性分析采用Pearson 相關性分析，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠血清中MCP-1的變化情況比較 第8周，對照組和觀察組大鼠血清中MCP-1表達水平高于正常組，差異有統計學意義（P＜0.05）；觀察組血清中MCP-1水平明顯低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；對照組和觀察組2周、4周、8周的血糖值比較，差異無統計學意義（P＞0.05），但均高于正常組（P＜0.05）。 見表1。

表1 各組大鼠血清中MCP-1的變化情況比較（±s）

表1 各組大鼠血清中MCP-1的變化情況比較（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與正常組比較，▲P＜0.05；與觀察組比較#P＜0.05；與正常組比較，△P＜0.05。

組別 n 周數 血中MCP-1（pg/ml） 血糖（mmol/L）正常組--3.125±0.044對照組--觀察組1010101010101010102482482484.756±0.066#△--3.411±0.111▲5.711±0.5816.112±0.4235.877±0.55130.675±2.341*28.991±3.211*31.542±2.046*30.441±2.415*29.114±3.521*29.667±3.564*

2.2 兩組大鼠尿液中足細胞數及腎小球中位硬化指數比較 在同一時間段內，觀察組大鼠尿液中足細胞數明顯低于對照組， 差異有統計學意義（P＜0.05）；隨著時間的進展，尿液中足細胞含量逐漸增多，組間比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。 見表2。

表2 兩組大鼠尿液中足細胞數及腎小球中位硬化指數比較（±s）

表2 兩組大鼠尿液中足細胞數及腎小球中位硬化指數比較（±s）

注：與觀察組比較， *P＜0.05，△P＜0.05；與第6周比較，#P＜0.05，▲P＜0.05。

組別 n 尿液足細胞數（個/ml）腎小球中位硬化指數6周 12周對照組觀察組6周 12周10101.27±0.75△0.33±0.273.11±1.41*#1.55±0.82#0.130.110.54*#0.26▲

2.3 各組24h 尿蛋白含量比較 觀察組24h 尿蛋白量為（15.36±2.03）mg/24h，對照組為（33.12±2.77）mg/24h，正常組為（8.01±0.41）mg/24h，對照組24h 尿蛋白測定值明顯高于正常組和觀察組，差異有統計學意義（P＜0.05）， 觀察組明顯高于正常組，差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.4 相關性分析 腎小球硬化指數與尿足細胞數呈正相關（r=0.66，P＜0.01））；尿足細胞數與24h 尿蛋白含量為正相關（r=0.52，P＜0.01）。

3 討論

MCP-1是存在與于核因子-κB（NF-κB）和轉錄活化蛋白-1（AP-1）的結合位點，與NF-κB 的DNA序列進行結合，進行基因激活的轉錄[5]。 巨噬細胞、單核細胞、血管平滑肌細胞等都存在MCP-1。 在糖尿病患者存在高血糖時，蛋白非酶糖化產物、氧化應激、IL-1等都會對MCP-1的表達產生影響， 導致表達上升。 MCP-1在炎癥反應中也起著重要的介導作用，由于具有趨化作用，導致單核細胞和中性粒細胞等在循環中使動脈壁啟動炎癥反應，單核細胞和巨噬細胞相互轉換，且會誘導血管平滑肌細胞向內膜下間隙遷移，出現異常增殖導致粥樣斑塊形成[6]。

足細胞也就是腎小球上皮細胞，是腎小球濾過膜的重要部分。 在出現損傷脫落后，其腎小球內的數量和密度就會出現減少，使腎小球基底膜暴露，出現濾過膜機械障礙，以及電荷屏障功能異常，而慢性腎功能衰竭中糖尿病腎病是引起其發病的常見原因[7～9]。 表明足細胞與糖尿病腎病的發展有著重大關系。 而足細胞的丟失會導致患者出現蛋白尿，而蛋白尿的出現提示病變的出現， 可為糖尿病腎病的病情發展提供可靠的參考指標[10]。本研究結果顯示，在第8周，對照組和觀察組大鼠血清中MCP-1表達水平明顯高于正常組（P＜0.05）；觀察組明顯低于對照組，（P＜0.05）。 對照組和觀察組的血糖值在2周、4周、8周比較差異無統計學意義（P＞0.05），但兩組都明顯高于正常組（P＜0.05）；在同一時間段內，觀察組大鼠尿液中足細胞明顯低于對照組（P＜0.05）；隨著時間的進展，尿液中足細胞含量逐漸增多（P＜0.05）；對照組24h 尿蛋白含量明顯高于正常組和觀察組（P＜0.05），觀察組高于正常組（P＜0.05）；腎小球硬化指數與尿足細胞數呈正相關（rs=0.66，P＜0.01）， 尿足細胞數與24h 尿蛋白定量為正相關（r=0.52，P＜0.01）。 表明維A 酸可能作為蛋白尿藥物存在，對炎癥因子的形成也有一定的抑制作用。綜上所述， 維A 酸對糖尿病腎病大鼠血中MCP-1表達水平有一定抑制作用，并能改善蛋白尿的產生，提示維A 酸對糖尿病腎病大鼠血中MCP-1及尿中足細胞有較好的影響。