南寧市無償獻血人群HTLV檢測結果分析*

羅必泰，顏秀娟，姜 瑩，邱昌文，周月蘭

廣西壯族自治區南寧中心血站，廣西南寧 530007

人類嗜T細胞病毒(HTLV)分為Ⅰ型和Ⅱ型，能引起惡性淋巴瘤、成人型T細胞性白血病(ATL)等，其感染分布廣泛，并呈高度的地方性流行。HTLV-Ⅰ感染主要流行于日本南部、加勒比海地區的某些國家、非洲中部和西部、美洲中部和南部、巴布亞新幾內亞和澳大利亞，我國HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體陽性率較低，HTLV感染高發區主要集中在福建、廣東沿海一帶[1]。為避免經輸血傳播HTLV，部分國家在獻血者篩查項目中已強制規定了對HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體進行的檢測，我國尚未明確將HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體的篩查列為獻血者常規檢測項目。為進一步提高我國血液安全水平，2015年12月開始，國家衛生健康委員會辦公廳在部分地區的血站開展HTLV監測工作，以期掌握我國獻血人群中HTLV流行情況，為制訂血液管理相關政策提供依據。南寧中心血站作為監測點之一，承擔了6萬余份標本的檢測任務。本實驗室采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)雙抗原夾心法對南寧市無償獻血者進行HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體檢測，并將初篩陽性標本送檢確證，以評估南寧市輸血傳播HTLV的危險性，并為全國HTLV感染狀況的評估提供依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2016年5月4日至2018年2月4日本血站61 804份無償獻血者標本，年齡18～55歲。獻血者按照《獻血者健康檢查要求》進行健康咨詢、體檢，并對獻血者乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)進行快速檢測。

1.2試劑和儀器 HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體ELISA試劑盒(北京萬泰生產，批號為T20160101、T20160502、T20160503、T20160804、T20171105)；瑞士Hamilton公司的全自動加樣儀(STAR)和全自動酶聯免疫分析儀(FAME)。

1.3方法

1.3.1HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體檢測 采用ELISA試劑進行HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體檢測，檢測操作和結果判斷嚴格按照試劑說明書進行。試驗結果呈反應性(S/CO值≥1.0)的標本進行雙孔復檢，復檢結果任意1個孔呈反應性則判斷為初篩陽性。

1.3.2初篩陽性血液及標本處理 將HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體初篩陽性的血液標本離心(3 000 r/min，10 min)，其血漿及白膜層轉移至螺口凍存管中，放入-20 ℃以下冰箱保存。將凍存管和對應的血袋血漿寄送至國家衛生健康委員會臨床檢驗中心進行免疫印跡試驗和實時熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)確證試驗。

1.4統計學處理 采用Microsoft Excel2010對數據進行整理分析。

2 結 果

2.1HTLV檢測結果 61 804份無償獻血者的血液標本經雙孔復檢后HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體陽性24份，初篩陽性率為3.88；24份初篩陽性標本經免疫印跡試驗和實時熒光定量PCR確證，4份為HTLV-Ⅰ陽性，3份為不確定，HTLV陽性率為0.65，見表1、2。

表1 4份HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體確證陽性和3份不確定標本檢測結果

2.2其他指標檢測情況 24份HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體初篩陽性無償獻血者標本采用ELISA檢測HBsAg、丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV)、人類免疫缺陷病毒抗體(抗-HIV)、梅毒特異性抗體，同時采用速率法檢測ALT，實時熒光定量PCR方法檢測 HBV、HCV、HIV病毒核酸，結果均合格。

表2 4份HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體確證陽性和3份不確定標本其獻血者基本情況

3 討 論

輸血相關傳染病的預防和控制已成為全社會關注的焦點，是輸血安全的研究重點。HTLV可通過血液傳播，是一種反轉錄病毒，目前尚未有相關疫苗及安全有效的治療藥物，行之有效的預防控制措施是盡早發現HTLV感染者，并進行隔離，阻斷傳播途徑。絕大部分HTLV感染者血清中都含有病毒外膜蛋白gp21、gp46、gp68及核心蛋白p15、p19、p24的抗體，因此，以上感染標志物在臨床檢測中具有重要意義[2]。檢測HTLV尚無“金標準”，目前主要有兩種方法，一種是采用ELISA中的雙抗原夾心法或間接法進行HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體初篩，然后用免疫印跡試驗確認，此方法操作簡單，適合大規模的篩查和流行病學調查。另一種為實時熒光定量PCR，是靈敏度最高的方法，但其操作復雜，通常作為初篩陽性后的確證。ALLAIN等[3]提出HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體檢測可能比PCR核酸檢測更為有效[3]。

本研究對61 804份無償獻血者的血液標本進行HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體篩查，共篩查出24例抗體陽性，初篩陽性率為3.88；其中4例確證陽性，3例結果不確定，HTLV陽性率為0.65，與國內非流行、低流行區域調查情況基本一致[1]。除了地域差異外，人群中HTLV陽性率的高低還與篩查方法和確證方法的選擇有關。以往部分研究由于未對HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體陽性者做免疫印跡試驗進行確證，因此報道的陽性率偏高[4]。本研究確證陽性率為16.67%(4/24)，有研究資料顯示，部分國家的確證陽性率僅有2%[5]，漳州報道的確證陽性率為3.03%[6]，江西為7.5%[7]，遵義為10%[8]，南京為0%[9]，可能由于初篩檢測方法和確證試驗不同，確證陽性率差異較大。另外，ELISA試劑中抗原和抗體的純度、待檢因子的靈敏度以及ELISA檢測的操作技術等都會影響檢測結果的靈敏度、特異度和重復性[10]。若研究條件允許，可以用另一廠家試劑對初篩陽性標本再次檢測，并對獻血者追蹤調查，確保檢測結果的準確性。

本研究結果顯示，免疫印跡試驗陽性和陰性結果與實時熒光定量PCR結果大多一致，但免疫印跡試驗不確定的結果，而實時熒光定量PCR顯示結果為陰性。免疫印跡試驗以病毒分解物作為抗原，具有較高的靈敏度，但是也存在著結果不確定的問題[5]，因此對免疫印跡試驗結果不確定的標本有必要運用實時熒光定量PCR進行確證[11]。由于實時熒光定量PCR檢測技術條件和要求復雜，目前應當以免疫印跡試驗作為主要確證手段，當免疫印跡試驗結果為不確定時，再做實時熒光定量PCR進一步確證。采用免疫印跡試驗及實時熒光定量PCR進行聯合檢測，HTLV陽性率的調查結果相對較為可靠。

本研究結果顯示，4例HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體確證陽性和3例不確定的獻血者中，有4例為再次獻血者，最多者已進行9次無償獻血，HTLV陽性者反復獻血將會嚴重影響血液質量安全。本研究結果顯示，南寧市無償獻血者HTLV陽性率為0.65；另有報道顯示，我國福建寧德地區HTLV陽性率為0.34%[12]，莆田地區陽性率為0.101%[13]。相比之下，南寧市無償獻血者HTLV陽性率處于較低水平，但南寧市流動人口較多，且隨著各地之間的交流日益頻繁，HTLV感染很可能由高流行區向低流行區甚至非流行區擴散[14]，因此，仍需要繼續監測。由于本地區HTLV陽性率較低，建議采用3種模式對獻血者進行HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體篩查：第1種為只對未檢測過HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體的獻血者進行篩查，抗體篩查陰性的獻血者再次獻血時不再檢測該項目；第2種為只對高危獻血者進行篩查；第3種為采用混合檢測模式[15]。因HTLV只感染淋巴細胞，在尚未將HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體的篩查列為獻血者常規檢測項目前，輸注去白細胞的血液制品或輻照血液制品，可最大限度降低HTLV經血傳播風險。