高效液相色譜法測定止喘靈注射液中鹽酸麻黃堿、丁溴東莨菪堿和苦杏仁苷含量

崔雅慧，金志國

（首都醫科大學附屬北京世紀壇醫院藥劑科，北京 100038）

目前，止喘靈注射液在我國臨床應用廣泛，加強對其質量控制對于保障患者的用藥安全，具有重要意義[1]。止喘靈注射液是由麻黃、洋金花、苦杏仁和連翹4 味藥材經煎煮、過濾、濃縮、沉淀、殺菌等工藝加工而成的中藥注射劑[2]，具有宣肺平喘、祛痰止咳的功效，臨床常用于治療痰濁阻肺、肺失宣降所致的哮喘、咳嗽、胸悶、痰多等癥，對支氣管哮喘、喘息性支氣管炎效果明顯[3－4]。方中麻黃有發汗散寒、宣肺平喘、利水消腫等功效[5－8]，洋金花有平喘止咳、解痙定痛等功效[9－13]，苦杏仁有降氣止咳平喘、潤腸通便等功效[14－17]。2015 年版《中國藥典（一部）》中，止喘靈注射液含量測定項不能更好地控制該產品的質量。該藥方中麻黃為君藥，洋金花為臣藥，苦杏仁為佐藥，連翹為使藥，麻黃、洋金花和苦杏仁3 味藥材成分最大，吸收波長接近。因此，本研究中建立了測定止喘靈注射液中鹽酸麻黃堿、東莨菪堿和苦杏仁苷含量的高效液相色譜(HPLC)法?，F報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Shimadzu Prominence LC －20A 型高效液相色譜儀，包括SPD－M20A 型PDA 檢測器、SIL －20A 型自動進樣器、CTO －20A 型自動柱溫箱、LC－Solution 型色譜工作站（日本島津公司）；Quintix65 －1CN 型電子天平（德國賽多利斯公司，精度為十萬分之一）；Waters Sunfire C18色譜柱（美國沃特世公司）；FRQ－1006T 型超聲波儀（杭州法蘭特科技公司，功率為300 W，頻率為42 kHz）；Milli－Q advantage A10 型超純水系統（美國密理博公司）。

1.2 試藥

止喘靈注射液（江蘇蘇中藥業有限公司，批號分別為19030212，19040415，19050311，規格為每支2 mL）；鹽酸麻黃堿對照品（批號為171241 －201809，含量以100.0% 計），丁溴東莨菪堿對照品（批號為100130 －201103，含量以99.7% 計），苦杏仁苷對照品（批號為110820 －201808，含量以88.2%計），均購于中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈均為色譜純（Tedia 試劑公司）；磷酸、三乙胺、十二烷基苯磺酸鈉均為分析純（國藥集團）；試驗用水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters Sunfire C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流速：1.0 mL ／min；流動相：乙腈（A）－0.1%磷酸溶液（B，含0.05%三乙胺和0.02%十二烷基苯磺酸鈉，磷酸調節pH 至6.0），梯度洗脫，洗脫程序為0 ～7 min時3%A，7 ～26 min 時3%A ～58%A，26 ～29 min 時58%A ～3%A，29 ～34 min 時3%A；檢測波長：210 nm；柱溫：28 ℃；進樣量：20 μL。

2.2 溶液制備

取鹽酸麻黃堿對照品25.00 mg、丁溴東莨菪堿對照品25.07 mg、苦杏仁苷對照品28.34 mg，精密稱定，置25 mL 容量瓶中，加流動相溶解并定容至刻度，搖勻，即得對照品混合貯備溶液，精密移取該貯備溶液1.0 mL，置50 mL 容量瓶中，加流動相溶解并定容至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取樣品(批號為19030212)，精密量取1.0 mL，置25 mL 容量瓶中，加流動相溶解并定容至刻度，搖勻，用0.45 μm 濾膜濾過，棄去初濾液，取續濾液，即得供試品溶液。按處方比例和制備工藝制備缺麻黃、洋金花和苦杏仁的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：取試劑空白溶液及2.2 項下3 種溶液，按擬訂色譜條件進樣分析。色譜圖見圖1?？梢?，陰性對照品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相同保留時間處無干擾峰，表明方法專屬性良好。

線性關系考察：精密移取2.2 項下對照品混合貯備溶液，加流動相制成含鹽酸麻黃堿、苦杏仁苷和丁溴東莨菪堿質量濃度依次為0.3，0.6，1.0，3.0，6.0，10.0 μg ／mL的標準曲線溶液，按擬訂色譜條件依次進樣分析，記錄色譜圖。以質量濃度（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，繪制標準曲線。結果3 種成分質量濃度均在0.3 ～10.0 μg ／mL 范圍內與峰面積線性關系良好。詳見表1。

表1 各成分線性關系考察結果( n ＝6)

穩定性試驗：取樣品（批號為19030212），依法制備供試品溶液，室溫下放置0，3，6，9，12，18，24 h 時分別取樣，按擬訂色譜條件分別進樣分析，記錄色譜圖，根據峰面積計算RSD。結果鹽酸麻黃堿、丁溴東莨菪堿和苦杏仁苷峰面積的RSD 分別為2.34%，1.91%，1.47%( n ＝7)，表明供試品溶液在24 h 內穩定。

重復性試驗：取樣品（批號為19030212），依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣分析。結果鹽酸麻黃堿、丁溴東莨菪堿和苦杏仁苷含量的 RSD 分別為2.92%，3.56%，4.09% ( n ＝6)，表明方法重復性良好。

精密度試驗：取2.2 項下對照品溶液適量，按擬訂色譜條件連續進樣6 次，記錄色譜圖。結果鹽酸麻黃堿、丁溴東莨菪堿和苦杏仁苷峰面積的 RSD 分別為1.58%，2.02%，1.43% ( n ＝6)，表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為19030212），精密量取1.0 mL，置25 mL 容量瓶中，共6 份，分別加入2.2 項下對照品混合貯備溶液適量，依法制備供試品溶液。按擬訂色譜條件分別進樣分析，計算加樣回收率。結果見表2。

2.4 樣品含量測定

取3 批樣品( 批號分別為19030212，19040415，19050311)，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣分析，記錄色譜圖，根據峰面積計算含量。結果見表3。

圖1 高效液相色譜圖

表2 加樣回收試驗結果（n ＝6）

表3 3 批樣品含量測定結果（mg ／L）

3 討論

3.1 檢測波長選擇

分別取鹽酸麻黃堿、苦杏仁苷和丁溴東莨菪堿對照品，加流動相制備溶液，在紫外可見區進行全波段掃描，結果鹽酸麻黃堿、苦杏仁苷和丁溴東莨菪堿分別在210，208，214 nm 波長處有最大吸收，3 種待測成分最大吸收波長相近。結合紫外響應值大小，最終確定210 nm作為檢測波長。結果表明，選擇210 nm 作為檢測波長時，3 種成分響應較好，峰形尖銳，且陰性無干擾。

3.2 流動相選擇

由于鹽酸麻黃堿、苦杏仁苷和丁溴東莨菪堿3 種成分檢測波長均在210 nm 附近，考慮到甲醇截止波長在210 nm，為降低溶劑基質干擾，故選擇乙腈體系。本研究中考察了乙腈－水、乙腈－0.1%磷酸水溶液、乙腈－0.1%磷酸溶液（含0.05%三乙胺和0.02%十二烷基苯磺酸鈉，磷酸調節pH 至6.0）作為流動相體系時，對3 種成分分離、定量效果的影響，結果選擇乙腈－水、乙腈－0.1% 磷酸水溶液作為流動相體系時，鹽酸麻黃堿和丁溴東莨菪堿保留時間短，過早地出峰導致定量不準確；選擇乙腈－0.1% 磷酸溶液（含0.05% 三乙胺和0.02% 十二烷基苯磺酸鈉，磷酸調節pH 至6.0）體系時，3 種成分峰形尖銳，分離度均大于1.5，且定量結果準確，故最終選擇第3 種乙腈體系作為流動相體系。

3.3 方法評價

本研究中所建立的方法操作簡單、準確可靠、重復性好，可用于止喘靈注射液中鹽酸麻黃堿、東莨菪堿和苦杏仁苷成分的含量測定。