芒果果肉中總黃酮及芒果苷含量的測定

劉常凱 楊黎 何林飛

摘要：建立芒果（Mangifera indicaL）果肉中總黃酮及芒果苷含量的測定方法，采用紫外一分光光度計法測定總黃酮;采用高效液相色譜法測定芒果苷。結果表明，總黃酮在17-520 μg/mL濃度范圍內呈現良好線性關系（R2=0.999 9），平均回收率為99.03%，RSD為1.42%（n=6）;芒果苷在4.0-80.0 μg/mL濃度范圍內呈現良好線性關系（R=0.999 9），平均回收率為101.59%，RSD為1.87%（ n=6）。該方法簡便、準確度高、重復性良好，可用于芒果果肉中總黃酮及芒果苷的測定。

關鍵詞：總黃酮;芒果苷;紫外一分光光度計;液相色譜法

中圖分類號：S667.7

文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（ 2020）08-0138-03

D01：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.08.031

芒果（Mangifera indicaL-）是著名的熱帶水果，俗稱“熱帶水果之王”。隨著中國現代農業發展越來越迅猛，芒果的總產量已經躍居世界第二[1]。芒果果肉中總黃酮以及芒果苷等可用于功能性和生物活性化合物的含量豐富[2，3]，總黃酮屬于黃酮類化合物，具有抗炎、抗病毒、抗衰老等作用;而芒果苷是一種天然的清除自由基的抗氧化劑，也是一種天然的輻射保護劑。相關研究表明，芒果苷具有抗菌抗炎和抗菌抗病毒等作用[4，5]以及調節免疫等功效[6]。目前，檢測總黃酮含量采用的是紫外分光光度計法。研究表明，高效液相色譜法（HPLC）具有高壓、高速、高靈敏度、載液流速快、分析速度快和應用范圍廣等特點[7]，檢測芒果苷含量采用的是液相色譜法，但大部分研究是針對芒果的屬性部分。因此，本研究采用紫外一分光光度計和液相色譜法分別對桂七芒果果肉中的總黃酮以及芒果苷含量進行了檢測，為桂七芒果的進一步研究開發及藥用價值提供試驗基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗材料將百色地區生長成熟的桂七芒果分別按表1中不同時間進行采摘去皮、去核，取出芒果果肉，均質混合均勻。

1.1.2 儀器與試劑 紫外可見分光光度計UV-2700，日本島津公司;電子天平ML204，瑞士梅特勒一托利多公司;高效液相色譜儀（液相色譜儀）Wa-ters 2695-2998，美國Waters公司。蘆?。号?01409，中國食品藥品檢定研究院，含量91.9%;芒果苷：批號111607-201704，中國食品藥品檢定研究院，含量98.1%;甲醇（色譜級）、乙腈（色譜級）、乙酸乙酯（色譜級）廠家均為默克股份兩合公司;三氯化鋁（分析純），國藥集團化學試劑有限公司;冰醋酸（分析純），廣東光華科技股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 總黃酮含量的測定

1）標準線性的制備。參考文獻[8，9]，稱取12.60mg蘆丁對照品置于10mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為1.157 9mg/mL的標準儲備液，已按91.9%計算，再精密量取1.50mL至10 mL容量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度，制得到濃度為173.685 μg/mL的標準工作液，吸取0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL蘆丁標準溶液，分別置于10mL的具塞比色管中，加入2.0 mL三氯化鋁溶液（ 2.5 g/100mL）混勻，標準管加水定容，靜置，在30 min內用1 cm比色皿，以零管調零，于波長415 nm處測定吸光度，以試劑空白作為參照。

2）樣品處理。稱取5 g經過均質的芒果樣品，10 000 r/min離心10 min，后取上清液備用。吸取上述溶液1.0 mL于10 mL的具塞比色管中，分別加入2.0 mL三氯化鋁溶液（2.5 g/100mL）混勻，靜置，在30 min內用1 cm比色皿，以零管調零，于波長415nm處測定吸光度。

3）最大吸收波長的確定。精密吸取蘆丁標準工作液1.0 mL置于10 mL容量瓶中，加入甲醇溶液稀釋至刻度，以試劑空白作為參照，利用紫外可見分光光度計在波長350-500 nm進行掃描，蘆丁對照品在415 nm吸收度最大。

1.2.2 芒果苷含量的測定

1）色譜條件。C18柱（ IntertSustain，4.6mm×250mm，5μm），柱溫30℃，流速1.0 mUmin，進樣體積10.0 μL，檢測器紫外檢測器，檢測波長280 nm。流動相：（A）乙腈，（B）質量分數0.3%乙酸溶液，采用的梯度洗脫程序：0-5 min，20%A;5.01-10.00 min，90%（ A）; 10.01-15.00min， 10%A;15.01-25.00min，20% A.

2）芒果苷標準儲備液的制備。稱取芒果苷標準品10.00 mg，置于25 mL容量瓶中，用30%乙腈溶液定容、搖勻，制成400.00 μg/mL芒果苷標準品儲備液。

3）樣品前處理。稱取均質過芒果樣品2.50 9，加入1mL 6 mol/L的HCI溶液，搗碎，加入20 mL蒸餾水，加20mL的乙酸乙酯，萃取2次，渦旋5 min后離心，分離出酯相和水相，將酯相合并，40℃旋蒸至于，再用5mL 30%乙腈溶液定容。

4）測定。在最佳測定條件進行HPLC分析，進樣量為20 μL，根據測得各組分保留時間與標準溶液對比，對芒果苷進行定性分析，依據峰面積，利用標準品回歸方程計算樣品濃度。

2 結果與分析

2.1 總黃酮含量的測定結果

2.1.1 線性關系結果以吸光度為縱坐標，蘆丁對照品的質量濃度（μg/mL）為橫坐標繪制標準曲線，得到回歸方程為y=0.002 847x+0.013 50，r=0.999 9（n=6），表明蘆丁在質量濃度17-520 μg/mL，呈良好的線性關系。

2.1.2 精密度精密量取蘆丁標準工作液1.0 mL置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度，顯色后連續測定6次，測定濃度平均值為17.16 μg/mL，RSD為0.51%，表明精密度良好。

2.1.3 重復性稱取6份同一批次樣品5 9，經處理后吸取上述樣品1.0 mL于50 mL的具塞比色管中，顯色后分別測定RSD為1.14%，表明重復性良好。

2.1.4 回收率試驗稱取已知總黃酮含量（57.18mg/kg）的6份芒果果肉樣品5 9，分別按高低添加濃度加入蘆丁標準溶液制備供試品試液，吸取上述1.0mL于10mL的具塞比色管中，顯色后進行測定，平均回收率為99.03%，RSD為1.42%，表明該方法回收率較高（表2）。

2.1.5 實際樣品測定吸取供試品溶液1.0mL于50mL的具塞比色管中，顯色后進行測定，所得吸光度代入標準曲線中計算樣品中總黃酮含量，其結果見表3。

2.2 芒果苷分量的測定結果

2.2.1 線性關系的考察精密量取標準儲備溶液0.1、0.25、0.5、1.0、2.0mL，分別置于10mL容量瓶中，加30%乙腈溶液定容，即得4、10、20、40、80 μg/mL標準溶液，以峰面積為縱坐標，質量濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程為y=9.428 x10³x-5.055 1x10³，R2=0.999 9（n=5），表明芒果苷在質量濃度4.0-80.0 μg/mL與峰面積呈良好的線性關系。

2.2.2 精密度試驗精密吸取濃度為20 μg/mL中間濃度的芒果苷溶液，按上述最佳色譜條件，連續進樣6次（n=6），RSD為0.66%，表明精密度良好。

2.2.3 重復性試驗取同一批次樣品共6份，制備2份供試品溶液，按上述最佳色譜條件進樣測定，RSD為1.22%，表明重復性良好。

2.2.4 穩定性試驗取同一供試品溶液，分別在0、2、6、8、12、24 h進樣測定，RSD為0.54%，表明芒果供試品溶液在24 h內是穩定的。

2.2.5 回收率試驗 稱取6份已知芒果苷含量（ 2.395 mg/kg）的芒果果肉樣品5 g，分別添加高濃度（40 μg/mL）和低濃度（10 μg/mL）芒果苷標準溶液制備供試品試液（表4）。結果表明，平均回收率為101.59%，RSD為1.87%，該方法回收率較好。

2.2.6 實際樣品測定分別稱取5 9樣品，制備2份供試品溶液，進行高效液相色譜檢測，結果見表5。

3 結論

本試驗建立了紫外一分光光度計比色法檢測總黃酮含量及高效液相色譜法測定芒果苷含量，經過方法學驗證，檢測方法結果可靠，準確性高，精密度和重復性良好，對廣西百色地區桂七芒果中總黃酮和芒果苷檢測具有一定參考意義“叫。

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作者簡介：劉常凱（1986-），女，廣西博白人，主管藥師，主要從事食品藥品質量與安全研究工作，（電話）15296388369（電子信箱）373719196@qq.com;通信作者，何林飛，主管藥師，主要從事食品藥品質量與安全研究工作，（電子信箱）2960215496@qq.com。