SPOCK 1在宮頸癌中的表達(dá)及意義

魏敏，唐秦，趙林，汪強(qiáng)

四川綿陽四〇四醫(yī)院婦產(chǎn)科，四川 綿陽621000

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病機(jī)制尚不明確，但癌基因的激活、抑癌基因的失活是公認(rèn)的宮頸癌發(fā)生的重要因素之一[1-3]。睪丸蛋白聚糖1（SPARC/osteonectin，cwcv and kazal like domains proteoglycan 1；SPOCK1）是1992年從睪丸精漿中分離出來的一種鈣離子結(jié)合蛋白，對細(xì)胞形態(tài)改變、增殖、遷移、黏附及轉(zhuǎn)移過程起著調(diào)控作用[4]。SPOCK1最早被發(fā)現(xiàn)參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)控，近年來研究證實SPOCK1在肺癌、肝癌、前列腺癌、結(jié)腸癌等惡性腫瘤中高表達(dá)，被認(rèn)為是一種癌基因，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移，得到眾多學(xué)者的關(guān)注[5-6]。SPOCK1在宮頸癌中的作用尚未見報道，本研究將采用免疫組化法探討SPOCK1在宮頸癌中的表達(dá)及與臨床特征的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年11月至2018年11月于四川綿陽四〇四醫(yī)院行手術(shù)切除的宮頸癌患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理檢查確診為宮頸癌；有完整的臨床資料及隨訪資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前均接受化療、放療及生物治療。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)共納入宮頸癌患者84例，收集患者的宮頸癌組織石蠟標(biāo)本。84例宮頸癌患者中，＜50歲44例，≥50歲40例，年齡43～71歲，中位年齡55.6歲；腫瘤大小：≥4.0 cm 52例，＜4.0 cm 32例；2009年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期[7]：ⅠA期46例，ⅠB～ⅡA期38例；分化程度：高分化28例，中分化18例，低分化38例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例。另選取84例因子宮肌瘤而行子宮切除術(shù)患者的正常宮頸組織作為對照。

1.2 主要試劑及儀器

兔抗人SPOCK1多克隆抗體購自美國Abcam公司；二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色試劑盒、SP法免疫組化試劑盒均購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。RMI128切片機(jī)購自德國萊卡公司；BH-2顯微鏡購自日本OLYMPUS公司。

1.3 免疫組化法檢測SPOCK 1表達(dá)

石蠟標(biāo)本包埋并連續(xù)切成4 μm厚度的切片，二甲苯Ⅰ、Ⅱ溶液中各浸泡10 min進(jìn)行脫蠟，100%、95%、90%、80%、70%乙醇中浸泡5 min，3%雙氧水于室溫下滅活10 min，于枸櫞酸鈉緩沖液中經(jīng)微波爐加熱進(jìn)行抗原修復(fù)，根據(jù)免疫組化試劑盒采用SP法對石蠟標(biāo)本進(jìn)行一抗（兔抗人SPOCK1多克隆抗體，稀釋度為1∶100）、二抗孵育，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化，最后脫水透明，并于中性樹脂中封片，在光鏡下觀察SPOCK1的染色情況。選取磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）代替一抗作為陰性對照。

1.4 結(jié)果判斷

SPOCK1蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒，說明為陽性表達(dá)。每張切片選取5個高倍視野進(jìn)行觀察，采用半定量法進(jìn)行陽性結(jié)果的判定。根據(jù)細(xì)胞的著色程度進(jìn)行評分：未著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。根據(jù)陽性細(xì)胞占視野細(xì)胞總數(shù)的百分比進(jìn)行評分：未著色為0分，＜25%為1分，≥25%且＜50%為2分，≥50%且＜75%為3分，≥75%為4分。著色程度評分與陽性細(xì)胞占視野細(xì)胞總數(shù)的百分比評分的乘積：0～2分為陰性（-），3～4分為弱陽性（+），5～8分為中等陽性（++），9～12分為強(qiáng)陽性（+++）；≥3分為細(xì)胞呈陽性表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SPOCK 1在宮頸癌及正常宮頸組織中表達(dá)情況的比較

SPOCK1在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率為64.29%（54/84），明顯高于正常宮頸組織中的4.76%（4/84），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=65.831，P＜0.01）。

2.2 不同臨床特征宮頸癌患者的宮頸癌組織中SPOCK 1陽性表達(dá)情況的比較

低分化、ⅠB～ⅡA期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌患者的宮頸癌組織中SPOCK1陽性表達(dá)率分別明顯高于高中分化、ⅠA期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。不同年齡、腫瘤大小宮頸癌患者的宮頸癌組織中SPOCK1陽性表達(dá)率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。（表1）

表1 SPOCK 1表達(dá)與宮頸癌臨床特征的關(guān)系（n=84）

3 討論

SPOCK1是1992年從人體睪丸精漿中分離鑒定得到的一種蛋白聚糖，曾經(jīng)被稱為Testican-1，后隨著人們對其認(rèn)識的加深，將其改稱為SPOCK1。SPOCK1作為一種黏附蛋白，對細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間的相互作用起著重要調(diào)控作用，對細(xì)胞的增殖、遷移、黏附、轉(zhuǎn)移等生理、病理過程起著調(diào)節(jié)作用[4]。SPOCK1在不同機(jī)體組織器官中的表達(dá)情況不一致，在肝、肺組織中表達(dá)量較低，而在睪丸、前列腺、腎組織中表達(dá)量較高。SPOCK1在腦組織，特別是下丘腦中的表達(dá)極為豐富，能夠通過調(diào)控黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元的生成及活性，影響中腦組織中酪氨酸羥化酶的活性，參與腦組織的重構(gòu)及軸突的再生等生理過程[5-6]。

近年來研究證實SPOCK1在肺癌、肝癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、膽囊癌等惡性腫瘤中高表達(dá)，被認(rèn)為是一種癌基因，因而得到眾多學(xué)者的關(guān)注[5-8]。Li等[9]研究測定135例肝癌及癌旁組織中SPOCK1蛋白及mRNA的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)相較于癌旁組織，60%肝癌組織中SPOCK1表達(dá)量上調(diào)，而且肝癌組織中SPOCK1表達(dá)與臨床分期密切相關(guān)，SPOCK1mRNA高表達(dá)的患者轉(zhuǎn)移程度也更高。Shu等[10]的研究也證實膽囊癌組織中SPOCK1蛋白及mRNA表達(dá)量均明顯高于癌旁組織，且與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及發(fā)生時間密切相關(guān)。本研究采用免疫組化法檢測84例宮頸癌及84例正常宮頸組織中SPOCK1的表達(dá)，結(jié)果表明宮頸癌組織中SPOCK1陽性表達(dá)率明顯高于正常宮頸組織，同時低分化、ⅠB～ⅡA期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌患者的宮頸癌組織中SPOCK1陽性表達(dá)率分別明顯高于高中分化、ⅠA期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，進(jìn)而說明SPOCK1的表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

研究證實SPOCK1能夠顯著抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，并促進(jìn)侵襲、轉(zhuǎn)移，因此成為多種癌癥治療的靶點(diǎn)。下調(diào)SPOCK1表達(dá)能顯著地降低膀胱癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞的遷移、侵襲能力[11-12]。shRNA敲除SPOCK1后能顯著抑制裸鼠腫瘤的生成速度，同時還能夠顯著降低OVCAR3、SKOV3卵巢癌細(xì)胞的遷移、侵襲能力[13]。Chen等[14]研究也顯示敲除SPOCK1后能顯著抑制胃癌細(xì)胞上皮、間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的形成。Wang等[15]研究證實SPOCK1在骨肉瘤組織中高表達(dá)，并與腫瘤的大小、轉(zhuǎn)移情況、Enneking分期及病理類型密切相關(guān)，SPOCK1表達(dá)量下調(diào)后能顯著降低骨肉瘤細(xì)胞活力及裸鼠體內(nèi)腫瘤生成率。Wang等[16]檢測SPOCK1在非小細(xì)胞肺癌組織及細(xì)胞系（A549、HCC-827、95D）中的表達(dá)情況，結(jié)果表明SPOCK1在腫瘤組織及細(xì)胞中均表達(dá)上調(diào)，siRNASPOCK1能夠顯著抑制A549、HCC-827細(xì)胞增殖、遷移與侵襲，此過程與抑制WNT/β-catenin信號通路有關(guān)。進(jìn)一步提示SPOCK1可能作為宮頸癌基因治療的靶點(diǎn)，通過干擾SPOCK1表達(dá)，探討SPOCK1在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用，將成為本研究下一步研究方向。

綜上所述，SPOCK1在宮頸癌組織中陽性表達(dá)率明顯高于正常宮頸組織，且與腫瘤的分化程度、FIGO分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。