液相色譜法測定水產(chǎn)品中磺胺類代謝物含量的不確定度評定

李鴻超，彭家杰，羅健民，姚婉儀

(1 東莞市水產(chǎn)學會，廣東 東莞 523002；2 東莞市動物疫病預防控制中心，廣東 東莞 523002)

獸用磺胺類(Sulfonamides)藥物常添加到動物飼料中用來治療疾病和促進生長,但不合理的用藥會導致磺胺類藥物在動物組織中殘留[1],而這些藥物殘留往往能夠直接或者間接地通過環(huán)境、 食物鏈等進入人體，并對人體產(chǎn)生毒副作用[2-3],當濃度累積超過一定量時將對人體健康產(chǎn)生危害。

為了確保檢測結果的準確性，需進行測量不確定度的評定。測量不確定度用來表征被測量值在一定范圍內的估計，是一種表征測量值分散性的評定方法，是測量結果可比性和可靠性的判定指標[4-5]。為保證磺胺類代謝物殘留量檢測結果的科學性，開展檢測工作的實驗室需根據(jù)相關認可技術規(guī)范要求進行不確定度評定。本實驗依據(jù)JJF 1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》[5]和CNAS-GL06 《化學分析中不確定度的評估指南》[6]等相關規(guī)定的基本方法和程序，對HPLC法測定水產(chǎn)品中磺胺類殘留量的不確定度進行分析評定，找出主要來源，從而提高檢測準確性。

1 實 驗

1.1 測量儀器設備

Waters UPLC H-CLASS型超高效液相色譜儀,美國Waters公司；平行蒸發(fā)儀,瑞士BuChi；BS214 D分析天平,SARTORIUS、BT125D型電子天平,SARTORIUS；渦旋振蕩器,德國IKA、T25勻漿機,德國IKA；Milli-Q型超純水儀,美國Millipore；超聲波清洗機,昆山市超聲儀器有限公司;LXJ-IIB型離心機,上海安亭。

1.2 樣品前處理方法

參考農業(yè)部958號公告-12-2007《水產(chǎn)品中磺胺類藥物殘留量的測定 液相色譜法》進行。

2 結果與討論

2.1 建立數(shù)學模型

根據(jù)測量方法建立樣品中硝基呋喃類代謝物殘留量的數(shù)學模型如下：

(1)

以上各種因素都會對測量結果的不確定度產(chǎn)生影響，其最終合成不確定度的計算公式為：

(2)

2.2 分析確定不確定度來源

試樣中磺胺類藥物殘留量測量不確定度來源主要有以下幾個方面：測量重復性引入的不確定度；曲線校準引入不確定度；待測液體積定容引入的不確定度；樣品稱量引入的不確定度；外標標準溶液的配制引入的不確定度；提取回收率引入的不確定度；液相色譜儀校準引入的不確定度。

2.3 各分量不確定度計算

2.3.1 測量重復性引入的標準不確定度u1rel

測量樣品重復性引起的不確定度分量，屬A類標準不確定度，以算術平均值的標準偏差表示。對未知濃度樣品進行6次重復測量，平均值的標準偏差Sa(μg/kg)及u1rel見表1。

表1 測定結果及其相對標準不確定度(n=6)

2.3.2 曲線校準引入的標準不確定度u2rel

表2 最小二乘法擬合標準溶液質量濃度-峰面積

表3 磺胺類標準溶液回歸方程及相關系數(shù)

制備6個梯度混合標準溶液C，每個濃度測1次，以標準溶液濃度Cis為橫坐標，以標準溶液峰面積比Ais為縱坐標，用最小二乘法擬合，獲得直線方程A=a+b×c以及線性相關系數(shù)r，列于表2、表3。

本例對樣品測定液測量1次(p=1)，將峰面積比A帶入直線方程得樣品濃度Ci，線性回歸導致的的Ci標準不確定度

表4 曲線校準引入的標準不確定度

2.3.3 定容體積引入的標準不確定度u3rel

2.3.4 樣品稱量引入的標準不確定度u4rel

2.3.5 外標標準溶液配制引入的標準不確定度u5rel

2.3.5.1 標準物質純度的標準不確定度u5rel

標準物質純度的相對標準不確定度見表5。

表5 標準物質純度的相對標準不確定度

續(xù)表5

SCP99.6320.0151SMZ97.8320.0153SMM94.2320.0159SDM99.0320.0152SIZ99.9320.0150SDM99.4320.0151SQX95.7320.0157

2.3.5.2 標準物質定容引入的不確定度u52rel

2.3.5.3 標準物質稀釋引入的標準不確定度u53rel

用1000 μL可調移液器和10 mL容量瓶將標準儲備液逐級稀釋，使用2次1000 μL可調移液器及2次10 mL容量瓶，稀釋過程中引入的不確定度如下：

由此可得，外標標準溶液的配制引入的標準不確定度如下：

2.3.6 提取回收率引入的標準不確定度u6rel

表6 樣品加標回收的不確定度

2.3.7 液相色譜儀校準引入的標準不確定度u7rel

2.4 評定測量量之間的相互關系

測量量之間相互獨立，沒有任何相關性。

2.5 合成不確定度及檢測結果表述

由上述所得數(shù)據(jù)代入公式(2)，合成不確定度結果如表7所示。

表7 合成標準不確定度

2.6 計算擴展不確定度

取包含因子k=2(95%置信概率)，其擴展不確定度表示，結果見表8。

表8 不確定度評定結果

3 結 論

通過以上不確定度評定分析得知，利用液相色譜法測定水產(chǎn)品中磺胺類代謝物含量的實驗中，影響測量結果的不確定度主要來源于液相色譜儀的校準、標準曲線擬合校準和提取回收率，其他因素影響不大。實驗過程中可通過優(yōu)化標準系列工作溶液配置、控制提取回收率來保證檢測結果的準確度。