布拉酵母菌聯合核黃素磷酸鈉對小兒輪狀病毒性腸炎外周血IL-8、TGF-β1及T淋巴細胞亞群的影響

黃 金，高若飛，于 靜，李小芹

(鄭州大學附屬兒童醫院(河南省兒童醫院, 鄭州兒童醫院)消化內科，鄭州 450000)

輪狀病毒(rotavirus，RV)極易導致輪狀病毒性腸炎(rotavirus enteritis，RVE)，屬于RNA病毒，是全世界兒童感染性腸炎的主要致病原[1]。RVE占小兒腹瀉病的40%～60%，RV是引起嬰幼兒腹瀉病中最常見最重要的一類病毒[2]。RVE以每年的冬末、初春或者深秋季節易發病；其傳播途徑以糞口傳播為主。RVE的發病機制為：① RV病毒侵犯十二指腸及空腸，與上皮細胞結合，使絨毛膜變短變粗，細胞腫脹空泡變性壞死，導致小腸功能喪失，引起腹瀉；② 上皮細胞雙糖酶分泌不足使食物中雙糖消化不完全，導致腸腔滲透壓增高[3]。RVE的臨床癥狀可表現為大便次數增多、量大、水分多、呈水樣或蛋花樣，常常并發脫水、發熱及上呼吸道感染等癥狀。若治療不及時，RV侵犯進入淋巴、血液循環，可引起輪狀病毒血癥，使心、肝、腎等多器官系統受損[4]。目前，在臨床上暫無特效藥治療RVE，以抗病毒、胃黏膜保護及微生態制劑等對癥治療為主[5]。其中，微生態制劑以布拉酵母菌治療為主，其對腸道菌群調節具有顯著作用。有相關研究指出，核黃素磷酸鈉具有促進腸道黏膜修護、恢復消化功能的作用[6]。我院研究發現布拉酵母菌聯合核黃素磷酸鈉治療應用效果良好。本研究通過對小兒輪狀病毒性腸炎患兒分別予以布拉酵母菌治療以及布拉酵母菌聯合核黃素磷酸鈉治療兩種方法來分析對外周血IL-8、TGF-β1及T淋巴細胞亞群的影響。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年9月～2019年11月我院收治的80例小兒輪狀病毒性腸炎患兒。所有患兒均符合臨床上小兒輪狀病毒性腸炎診斷標準。根據對患兒治療方案不同，分為對照組及研究組各40例。納入標準：① 患兒發病時間不超過3天；② 患兒大便呈水樣或蛋花樣，RV檢測抗原陽性；③ 患兒家屬均知情此研究并簽署同意書。排除標準：① 患兒重度脫水及嚴重電解質紊亂；② 治療前曾使用過激素藥物或者本次研究使用的藥物；③ 先天性胃腸道畸形、胃腸道外科手術者；④ 合并嚴重心、肝、腎等功能不全或者存在免疫缺陷等患兒；⑤ 不能配合的患兒；⑥ 存在意識障礙或精神疾病等患兒。患兒外周血IL-8指標檢測試劑盒由法國CIS公司提供，TGF-β1試劑盒由上海心語生物科技有限公司提供，T淋巴細胞亞群指標由流式細胞儀測定，由上海谷研科技有限公司提供。兩組患兒的性別、年齡、病程及脫水情況等基線資料比較無統計學差異(P>0.05)，見表1。

組別n男/女年齡(月)病程(天)脫水情況(例)輕度中度對照組4020/2013.43±3.161.51±0.342317研究組4019/2112.03±3.421.56±0.412515χ2/t值—0.0501.9010.5930.208P值—0.8230.6090.5540.648

1.2 治療方法

兩組患者均予以糾正脫水、調節酸堿平衡等對癥支持治療。對照組予以布拉酵母菌[生產廠家：法國百科達制藥廠，批準文號：注冊證號S20150051，規格：0.25 g(菌粉)/袋]治療：根據患兒年齡，12個月以下患兒予以每天口服0.125 g，bid；12個月～3歲內患兒予以每天口服0.25 g，bid。研究組予以布拉酵母菌聯合核黃素磷酸鈉(生產廠家：山東方明藥業集團股份有限公司，生產批號：國藥準字號H20066158，規格：10 mg/支)治療，予以 5 mg+0.9%NaCl溶液或者5 mg+5%GS溶液靜滴。3天為一個療程。

1.3 檢測方法

治療前后抽取所有受檢者5 ml清晨空腹靜脈血。離心處理5 min后(轉速3500轉/min)，取上層血清，放置于-80 ℃恒溫箱中冷藏待檢。IL-8水平采用放射免疫分析法進行測定，試劑盒由法國CIS公司提供，具體實驗操作嚴格按試劑盒上說明書進行。TGF-β1采用酶聯吸附法(ELISA法)進行檢測，試劑盒由上海心語生物科技有限公司生產，嚴格按試劑盒上的說明書進行。T淋巴細胞亞群(CD8+、CD4+、CD3+)使用流式細胞檢測儀來進行檢測。首先對受試兒童進行空腹采血，采血2 ml，樣本需要在4 h內進行處理。處理流程：刺激細胞-標記管-固定、破膜及細胞打孔-進行膜內免疫熒光標記，然后進行檢測。

1.4 觀察指標及判定標準

① 對比兩組患兒炎性因子IL-8和TGF-β1指標水平；② 比較T淋巴細胞亞群指標；③ 對比兩組患兒的臨床療效。臨床療效根據患兒的癥狀及檢查情況來判定[7]，顯效：經治療后患兒癥狀消失，大便常規未見明顯異常；有效：經治療后患兒癥狀較前好轉，每天腹瀉情況降低到3次以下，大便常規未見明顯異常；無效：經治療后患兒癥狀無變化甚至較前加重。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 炎性因子TGF-β1和IL-8水平比較

治療后，兩組患兒IL-8均較治療前降低，TGF-β1水平較前升高；且研究組TGF-β1水平較對照組升高更為明顯，IL-8水平較對照組明顯降低(P<0.05)，見表2。

表2 炎性因子TGF-β1和IL-8水平

與同組治療前比較，a：P<0.05；下同

2.2 T淋巴細胞亞群水平比較

治療前，兩組患兒T淋巴細胞亞群CD8+、CD4+、CD3+比較無統計學差異(P>0.05)。治療后，兩組患兒CD4+、CD3+較前升高，CD8+較前降低，且研究組CD4+、CD3+升高較對照組明顯，CD8+降低較對照組更顯著(P<0.05)，見表3。

表3 T淋巴細胞亞群水平

2.3 臨床療效比較

治療后，研究組患兒總有效率顯著高于對照組(97.50%vs77.50%，P<0.05)。詳情見表4。

表4 臨床療效 n(%)

3 討論

腹瀉，是一個公共健康問題，全世界每年發病人數高達1.5億人，是導致嬰幼兒死亡的第二大病因[8]。全世界每年因RV感染而導致死亡的兒童約90萬人；每年我國3歲以下的嬰幼兒感染RV的人數達1000萬人，占全國嬰幼兒總數的1/4[9]。RV感染不僅對腸道內有影響，還可引起呼吸系統、中樞神經及循環系統等病變，嚴重威脅患兒的身體健康[10]。因此，對于嬰幼兒感染RV引起小兒RVE后進行及時有效的治療是十分重要的[11]。

腸道是細菌定植的主要場所，腸道定植細菌具有數量大、多樣化、復雜性及動態性的特點[12]。布拉酵母菌作為一種真菌制劑，屬于超高溫酵母菌，其耐酸、耐堿及耐膽汁等作用，在體內37 ℃的環境中生長繁殖，且存活率高、穩定性好，還具有對抗抗生素天然耐藥性的功效[13-14]。核黃素磷酸鈉屬于維生素類藥物，在能量代謝中起到較為關鍵的作用[15]。黃素酶具有維護胃腸黏膜完整、促進腸上皮細胞再生的作用[16]。同時，還可在提高機體抗氧化能力的同時，加快修復受損腸道黏膜，促進恢復腸道黏膜消化、吸收及分泌的作用[17]。本研究結果顯示，布拉酵母菌聯合核黃素磷酸鈉治療小兒RVE較單用布拉酵母菌的總有效率顯著提高(P<0.05)。說明聯合治療臨床效果較單一治療顯著，聯合治療可在調節腸道菌群的同時對腸道菌群具有良好的保護效果[18]。

有報道顯示，布拉酵母菌聯合核黃素磷酸鈉治療RV感染可在抑制炎性因子IL-8的同時提升TGF-β1的水平[19]。由于RV感染會刺激淋巴細胞，使其釋放IL-8及TGF-β1，激活免疫細胞，影響恢復[20]。本研究以IL-8和TGF-β1作為觀察指標，結果顯示，聯合治療后IL-8較對照組明顯降低，TGF-β1較對照組明顯升高。這說明，布拉酵母菌聯合核黃素磷酸鈉治療可針對性調節炎性因子，對RV感染具有良好的治療作用[21]。

對CD8+、CD4+、CD3+進行相關研究發現，布拉酵母菌聯合核黃素磷酸鈉治療小兒RVE，可在外周血循環的作用下，恢復T淋巴細胞亞群免疫細胞的平衡。這可能與聯合治療有關，布拉酵母菌調節腸道菌群的同時促進巨噬細胞吞噬，而核黃素磷酸鈉可抑制RV的傳播，兩者聯合治療具有抗炎、增強機體免疫的作用[22]。

綜上所述，布拉酵母菌聯合核黃素磷酸鈉治療臨床療效佳，可有效調節外周血IL-8、TGF-β1水平，對T淋巴細胞具有促進作用，是患兒RVE的有效治療方案。影響CD8+、CD4+、CD3+的病理機制尚未明確，因此后期需繼續開展臨床研究加以證明。