差分脈沖伏安法測(cè)定黑枸杞中多酚的方法研究

董宏博，崔桂花，李文亮

(吉林醫(yī)藥學(xué)院化學(xué)教研室，吉林 吉林 132013)

黑果枸杞藏藥名“旁瑪”，其成熟漿果中富含多酚類(lèi)物質(zhì)。枸杞子多酚系植物多酚的一種，其改善認(rèn)知功能、抗菌消炎、抗腫瘤與抗氧化等多種藥理功效已有了科學(xué)理論支持[1-2]。目前檢測(cè)枸杞多酚的方法有很多，但電化學(xué)方法較少。本研究利用差分脈沖伏安法測(cè)定綠原酸，建立了測(cè)定黑枸杞中多酚含量的簡(jiǎn)單、快速的方法。

1 材料與儀器

LK2005電化學(xué)工作站(南京蘭力科儀器有限公司)；超聲波清洗機(jī)KQ-250DE型(昆山市超聲儀器有限公司)。

綠原酸(上海麥克林生化科技有限公司)；黑枸杞干果(購(gòu)于藥房)；其他試劑均為分析純。

配制綠原酸儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱(chēng)取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品10.6 mg，用去離子水溶解，定容至100 mL冷藏保存,濃度3.0×10-4mol/L。

2 方法與結(jié)果

2.1 差分脈沖伏安法建立

2.1.1玻碳電極的極化

將玻碳電極在金相砂紙上打磨，再用Al2O3拋光粉(3000目)拋光，然后用去離子水淋洗、擦拭干凈。采用循環(huán)伏安法，在0.5 mol/L的硫酸溶液中，利用工作站的三電極體系(工作電極是玻碳電極，對(duì)電極是鉑電極，參比電極是Ag/AgCl電極)，在-1.2～1.1 V范圍內(nèi)，靈敏度為100 μA、0.2 V/s的掃速下循環(huán)20圈至穩(wěn)定，每次測(cè)定前都要活化。

2.1.2循環(huán)伏安法測(cè)定

準(zhǔn)確移取3 mL綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入10 mL pH=4.2醋酸-醋酸鈉緩沖溶液和1 mL氯化鈉溶液，用去離子水定容至50 mL。采用循環(huán)伏安法[3]，利用工作站的三電極體系，在0.1～0.8 V范圍內(nèi)，靈敏度為10 μA、0.05 V/s的掃速下循環(huán)1圈，進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如圖1所示。由圖1可見(jiàn)，在0.276 4 V和0.395 5 V附近處出現(xiàn)一對(duì)明顯的氧化還原峰，表明綠原酸在硫酸活化電極表面發(fā)生了氧化還原反應(yīng)。峰電流分別是2.696 0 μA和3.713 1 μA，峰電位之差是119.1 mv，峰電流之比近似為1，說(shuō)明這是一個(gè)可逆的電極反應(yīng)。

2.1.3差分脈沖伏安法測(cè)定

準(zhǔn)確移取3 mL綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液至50 mL容量瓶，加入10 mL pH=4.2的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液和1 mL氯化鈉溶液，用去離子水定容至50 mL。利用差分脈沖伏安法[4]，采用工作站的三電極體系，在0.1～0.6 V范圍內(nèi),靈敏度為10 μA、電位增量為0.02 V、脈沖幅度為0.05 V、脈沖寬度為0.05 s、脈沖間隔為2 s、等待時(shí)間為2 s進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如圖2。

準(zhǔn)確移取1 mL枸杞提取液的稀釋液，置入到50 mL容量瓶，加入10 mL pH=4.2的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液和1 mL氯化鈉溶液，去離子水定容至50 mL。利用差分脈沖伏安法，進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)圖3。

由圖2可知，綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液在0.40 V處出現(xiàn)氧化峰，峰電流為5.221 0 μA。由圖3可知，枸杞提取液在0.38 V處出現(xiàn)氧化峰，峰電流為1.500 1 μA。二者峰電位基本一致，說(shuō)明此方法可行。

圖 1 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液循環(huán)伏安圖 圖 2 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液差分脈沖伏安圖 圖 3 枸杞提取液差分脈沖伏安圖

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別準(zhǔn)確移取0.6、1.0、2.0、3.0、6.0 mL綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于50 mL容量瓶，加入10 mL pH=4.2的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液和1 mL氯化鈉溶液，用去離子水定容至刻度,進(jìn)行差分脈沖伏安法測(cè)定。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)綠原酸峰電流隨其濃度的增大而逐漸增大，但峰電位基本不變，且氧化峰電流與綠原酸溶液濃度在1.27～8.48 mg/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，得線性回歸方程為y=0.699 4x+0.746 8，R2=0.998 3。

2.2.2精密度試驗(yàn)

分析天平精密稱(chēng)取5.500 7 g黑枸杞，加入100 mL去離子水，置入100 mL錐形瓶中，于20 ℃下超聲提取20 min，減壓抽濾，濾液用去離子水定容至100 mL，得枸杞樣品溶液。準(zhǔn)確移取5 mL提取液，加去離子水定容到50 mL，得到樣品液的稀釋液。分別準(zhǔn)確移取黑枸杞樣品稀釋液1 mL 4份平行測(cè)定，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.88%，說(shuō)明儀器精密度良好。并計(jì)算得出黑枸杞中多酚含量為1.002 4%。

2.2.3加樣回收率試驗(yàn)

準(zhǔn)確移取1 mL黑枸杞樣品稀釋溶液4份，分別加入綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.3、0.4、0.5、0.6 mL，進(jìn)行差分脈沖伏安法測(cè)定。結(jié)果回收率在95%～105%之間，平均回收率為102.38%，表明此法較為準(zhǔn)確。

2.2.4穩(wěn)定性試驗(yàn)

準(zhǔn)確移取4 mL綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別在0、45、75、105 min進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果表明本測(cè)試品溶液在45 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3 結(jié) 論

本次實(shí)驗(yàn)初次采用差分脈沖伏安法測(cè)定黑枸杞中的多酚，以綠原酸為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，綠原酸溶液濃度在1.27～8.48 mg/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，并且綠原酸溶液和樣品溶液的峰電位基本一致。此方法測(cè)得枸杞中的多酚的百分含量為1.002 4%，平均加樣回收率為102.38%，說(shuō)明此方法適合測(cè)定枸杞中的多酚，為黑枸杞的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供一定的參考價(jià)值。