偏頭痛模型大鼠血漿一氧化氮和降鈣素基因相關(guān)肽含量變化及氟桂利嗪干預(yù)效果實(shí)驗(yàn)研究*

劉 斌，馬原源，毛文靜，鄧春穎，王彩霞，楊海霞

1．華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)一科(唐山 063000)；2.河北省遷安市老干部局醫(yī)院(遷安 064400)

偏頭痛(Migraine)是反復(fù)發(fā)作的一側(cè)或兩側(cè)搏動性頭痛，為臨床最常見的一種類型頭痛。WHO將重度偏頭痛列為嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量的慢性疾病之一，給社會和家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)[1-3]。探討偏頭痛的發(fā)病機(jī)制，尋求安全有效的防治偏頭痛藥物，是亟待解決的問題。有研究表明一氧化氮(Nitric oxide，NO)和降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitonin gene-related peptide，CGRP)與偏頭痛發(fā)病有關(guān)[4-5]。因此，本研究旨在通過制備偏頭痛大鼠模型，采用硝酸還原酶法測定NO含量和放射免疫法檢測頸靜脈血中CGRP含量變化及用氟桂利嗪進(jìn)行干預(yù)后對以上指標(biāo)的影響，探討偏頭痛的發(fā)病機(jī)制及氟桂利嗪的干預(yù)效果，為偏頭痛的防治提供依據(jù)。

材料與方法

1 動物和試劑 清潔級健康SD大鼠36只(雌雄各半，分籠喂養(yǎng))，鼠齡3～4個(gè)月，體重250～300 g，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所供給。全價(jià)顆粒飼料喂養(yǎng)，自由攝食，室溫20 ℃～25 ℃，相對濕度45%～55%，每日光照12 h，飼養(yǎng)1周熟悉環(huán)境后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。NO試劑盒(南京建成生物化學(xué)公司)，CGRP試劑盒 (上海西唐生物科技有限公司)，硝酸甘油(Glyceryltrinitrate ，GTN)注射液(北京益民藥業(yè)有限公司)，氟桂利嗪膠囊(西安楊森制藥有限公司)。

2 偏頭痛模型制備 采用GTN造模法。根據(jù)Cristina等[6]報(bào)道的方法，予大鼠皮下注射GTN(10 mg/kg)， GTN造模后30 min出現(xiàn)雙耳發(fā)紅、前肢頻繁搔頭、爬籠次數(shù)增多、煩躁不安等現(xiàn)象，持續(xù)3 h后出現(xiàn)蜷臥、活動減少等狀態(tài)，出現(xiàn)以上現(xiàn)象視為造模成功。觀察各組的情況并記錄。

3 動物分組 實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為生理鹽水對照組(對照組)、偏頭痛模型組(模型組)和氟桂利嗪干預(yù)組(氟桂利嗪組)，每組12只。

4 給藥方法 ①生理鹽水對照組(對照組)：每天以生理鹽水灌胃(10 ml/kg)，1次/d，連續(xù)7 d，第7天灌胃30 min后皮下注射生理鹽水2 ml；②偏頭痛模型組(模型組)：每天以生理鹽水灌胃(10 ml/kg)，1次/d，連續(xù)7 d，第7天灌胃30 min后造模；③氟桂利嗪干預(yù)組(氟桂利嗪組)：每天以氟桂利嗪懸液溶液灌胃(0.4 mg/kg)，1次/d，連續(xù)7 d，第7天灌胃30 min造模。

5 指標(biāo)測定 采用硝酸還原酶法測定NO含量和放射免疫法檢測頸靜脈血中CGRP含量，操作步驟均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

結(jié) 果

1 各組大鼠血漿NO含量的比較 與對照組比較，模型組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)(3 h、6 h)血漿中NO含量明顯增加，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)；6 h組血漿中NO含量少于3 h組，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。與模型組比較，氟桂利嗪組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)(3 h、6 h)血漿中NO含量明顯減少，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)；6 h組血漿中NO含量少于3 h組，兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。見表1。

2 各組大鼠血漿CGRP含量的比較 與對照組比較，模型組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)(3 h、6 h)血漿中CGRP含量明顯增加，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)；6 h組血漿中CGRP含量少于3 h組，兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。與模型組比較，氟桂利嗪組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)(3 h、6 h)血漿中CGRP含量明顯減少，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)；6 h組血漿中CGRP含量少于3 h組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。見表2。

表1 各組大鼠血漿NO含量的比較(μmol/L)

注：與對照組比較△P<0.01；與模型組比較▲P<0.01

表2 各組大鼠血漿CGRP含量的比較(μmol/L)

注：與對照組比較,△P<0.01；與模型組比較,▲P<0.01

討 論

偏頭痛的發(fā)作是一種復(fù)雜的神經(jīng)血管改變，目前對偏頭痛發(fā)生的病理機(jī)制尚未完全清楚。近年研究認(rèn)為三叉神經(jīng)對顱內(nèi)外血管的舒縮調(diào)節(jié)以及疼痛刺激傳導(dǎo)途徑的激活是關(guān)鍵性機(jī)制，局部血管活性物質(zhì)如NO、CGRP、5羥色胺(5-HT)、內(nèi)皮素、緩激肽等起著降低痛閾，增加疼痛敏感性的重要作用[7-9]。NO是一種小分子物質(zhì)，存在于人體的各個(gè)組織器官，具有擴(kuò)張血管，改善局部組織血運(yùn)等保護(hù)性作用[10]，但在過量的情況下又可能介導(dǎo)嚴(yán)重的神經(jīng)毒性及細(xì)胞毒性而造成組織損傷，實(shí)驗(yàn)證明NO調(diào)節(jié)三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)的敏感性，可刺激三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)，使三叉神經(jīng)核團(tuán)的一氧化氮合酶興奮，從而使中樞的興奮性增加。有研究發(fā)現(xiàn)NO在偏頭痛和其他頭痛產(chǎn)生中是一個(gè)十分關(guān)鍵的因子，被認(rèn)為是原發(fā)性頭痛的觸發(fā)點(diǎn)，在偏頭痛發(fā)病過程中起著關(guān)鍵作用[7]。CGRP是Rosenfold等[11]在1982年發(fā)現(xiàn)的含有37個(gè)氨基酸組成的血管活性神經(jīng)肽，存在于中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的感覺神經(jīng)元胞體和末梢，通過外周炎癥和中樞調(diào)節(jié)來提高偏頭痛患者的神經(jīng)傳遞。CGRP是最重要的血管活性物質(zhì)，具有強(qiáng)烈的擴(kuò)張血管作用，并能增加毛細(xì)血管通透性、血漿蛋白滲出，參與神經(jīng)源性炎癥的過程，在疼痛感覺調(diào)控中發(fā)揮重要作用[12-13]。本研究結(jié)果提示，與對照組比較，模型組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)(3 h、6 h)血漿中NO和CGRP含量明顯增加，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明NO和CGRP在偏頭痛發(fā)病過程中起著十分重要的作用。

鹽酸氟桂利嗪(西比靈)為哌嗪氟化衍生物，易通過血腦屏障，對腦血管有選擇性擴(kuò)張作用，能抑制血小板活性物質(zhì)釋放，阻斷鈣離子的跨膜內(nèi)流而防止偏頭痛的發(fā)作[14-16]，還可防止腦血管痙攣，抑制致痛物質(zhì)的釋放，提高腦細(xì)胞對缺氧的耐受性，有助于恢復(fù)紅細(xì)胞的變形能力，降低血黏度，增加腦血流量[17-20]。鹽酸氟桂利嗪能有效地減少頭痛的發(fā)作頻率，減輕頭痛的嚴(yán)重程度，達(dá)到預(yù)防和治療偏頭痛的作用。本研究結(jié)果提示，與模型組比較，氟桂利嗪組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)(3 h、6 h)血漿中NO和CGRP含量明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果表明氟桂利嗪可通過抑制血漿NO、CGRP而發(fā)揮治療偏頭痛的作用。