杏鮑菇多糖的抗疲勞活性研究*

陳津津，馮嘉誠

（天津理工大學，天津 300384）

杏鮑菇（Pleurotus eryngii）又名刺芹側耳，富含多種營養成分，在食用菌中占據重要地位[1]。杏鮑菇干品富含蛋白質，含量超過21%，灰分含量超過7%，游離氨基酸和甘露醇含量均超過2%，杏鮑菇菌絲體和子實體富含維生素C；此外，杏鮑菇富含多種礦物質，其中包括鈣、鋅、銅、鎂等[2]；同時，杏鮑菇具備一定的藥用價值，有養胃潤腸、抗癌、增強免疫力、降血脂的功效，經常食用還可以起到美容護膚的作用。杏鮑菇多糖，簡稱PEP，其主要功效包括抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、抑菌、增強免疫力、清除自由基等[4]。杏鮑菇多糖在磺化之后抗氧化和抑菌的功效均有大幅度提升，抑菌效果最明顯的是作用于金黃色葡萄球菌CMCC26003和大腸桿菌ATCC25922[5]。杏鮑菇含有一種新型蛋白質，有明顯的抗癌效果[6]。通過對杏鮑菇多糖的抗疲勞效果進行研究，以期為杏鮑菇多糖的利用提供基礎數據。

1 材料準備和試驗過程

1.1 試驗動物

準備24只性別為雄性且身體健康的CL級KM種小鼠，小鼠體重約為20 g；統一安排進行動物室喂養，室內溫度保持在24℃左右，相對濕度不得低于45%，不高于65%，按照規定時間喂水和食物，喂養1周之后便可投入試驗使用[7]。

1.2 試劑

研究需要的試劑主要有5%三氯乙酸、95%乙醇溶液、葡萄糖（分析純）、硫酸（分析純）、硫脲（分析純）、蒽酮（分析純） 以及生理鹽水。蒽酮試劑配制選用72%濃硫酸，蒽酮的摻入比例為0.05%，硫脲的摻入比例為1%，將配制好的蒽酮試劑放入冰箱冷藏。

1.3 杏鮑菇多糖

選用吉林省圖們市石觀鎮延邊深山源生物技術有限公司生產的新鮮杏鮑菇4 kg，用切片機切成厚度適中的片狀，杏鮑菇和70%乙醇溶液體積按照1∶20的比例放入真空濃縮煎藥機中煎3 h，倒取液體經過濃縮處理之后保留2 000 mL過濾；過濾好的液體加入95%乙醇溶液，再次過濾留取濾渣加入蒸餾水1 000 mL，提取上層液體與乙醇混合；沉淀物烘干之后研末，按照不同的濃度要求加入適量蒸餾水混勻。

1.4 試驗過程

將小鼠分為對照組和給藥組，其中給藥組按照杏鮑菇多糖的給藥劑量分為高劑量、中劑量、低劑量3個組，每組隨機分6只小鼠。為給藥組的3組小鼠分別灌入劑量為 10 mg·kg-1d-1、20 mg·kg-1d-1、50 mg·kg-1d-1杏鮑菇多糖，而對照組的小鼠只需灌入同等劑量的蒸餾水，連續灌喂1周，以此來研究杏鮑菇多糖的抗疲勞功效。

最后1次給小鼠灌胃之后的30 min，測定小鼠的爬桿時間，記錄小鼠在爬桿上持續的時長，記錄3次之后的累計時長就是爬桿時間。

最后1次給小鼠灌胃之后30 min，將小鼠放入規格為 0.9 m × 0.45 m × 0.45 m 的游泳箱內，深度0.35 m，水溫25℃左右。每只小鼠尾部都捆綁其體重5%的鉛皮在游泳箱內自由泳。小鼠從進入游泳箱內直至死亡的這段時間就是小鼠的力竭性游泳時間。

在試驗過程中小鼠體重測量時間間隔3 d，共測量3次，對照組和給藥組的小鼠經過解剖測定各臟器重量，計算臟器與體重的比值，也就是臟器系數。

通過蒽酮法繪制葡萄糖標準曲線，配制6種不同濃度的標準葡萄糖溶液，濃度從 0～2.5 mg·mL-1，每種濃度相差0.5 mg·mL-1，體積均為100 mL，取不同濃度的標準葡糖糖溶液2 mL與蒽酮試劑10 mL共置試管中，放入沸水中15 min，冷卻后放置在波長為620 nm的可見光下測定吸光度。

小鼠力竭性游泳時間測定后將其解剖，取肝臟和后肢肌肉放入生理鹽水清洗之后用濾紙吸干水分；稱取100 mg肝臟和后肢肌肉加入8 mL的5%三氯乙酸研磨成糊狀。將上清液和4 mL的95%乙醇溶液混合，放置一夜之后沉淀出多糖，3 000 r·min-1離心15 min；去除上清液，10 min后在糖原中加入蒸餾水2 mL，溶解后的糖原加入試管中，在另一試管中加入等量蒸餾水，每個試管中加入蒽酮試劑10 mL，放入沸水中15 min，在波長為620 nm的可見光下測定吸光度。通過吸光度用標準方程式計算肝糖原和肌糖原含量 （P，mg·100-1g-1）[8]，其公式為：

式中：OD表示試管吸光度；2表示試管內蒸餾水體積（mL）；V表示試管內液體體積（mL）；m表示肝臟和后肢肌肉組織的重量（g）；0.9表示葡萄糖和糖原轉換系數。

1.5 統計方法

試驗中的數據結果統計可以采用SPSS 16.0軟件分析。

2 試驗結果分析

2.1 小鼠臟器系數的試驗結果分析

杏鮑菇多糖對小鼠臟器系數的影響見表1。

表1 杏鮑菇多糖對小鼠臟器系數的影響Tab.1 Effect of Pleurotus eryngii polysaccharide on the organ coefficient of mice

從表1結果可以看出，對照組和給藥組的小鼠臟器系數并無明顯差異；說明在一定時間段內適量的杏鮑菇多糖不會影響小鼠的臟器系數，也就是說定時定量的杏鮑菇多糖不會損傷小鼠臟器[9]。

2.2 小鼠爬桿時間試驗結果

杏鮑菇多糖對小鼠爬桿時間的影響見表2。

表2 杏鮑菇多糖對小鼠爬桿時間的影響Tab.2 Effect of Pleurotus eryngii polysaccharide on rod climbing time in mice

從表2可以看出，對比對照組，杏鮑菇多糖高劑量、中劑量、低劑量3組給藥組小鼠爬桿時間均更長，高劑量組比中、低劑量組小鼠爬桿時間又更長，且差異顯著。這也就表明，杏鮑菇多糖攝入量越多，小鼠的爬桿時間越長。說明杏鮑菇多糖對小鼠運動有促進作用。

2.3 小鼠力竭性游泳時間試驗結果

杏鮑菇多糖對小鼠游泳時間的影響見表3。

表3 杏鮑菇多糖對小鼠游泳時間的影響Tab.3 Effect of Pleurotus eryngii polysaccharide on useful time in mice

從表3可以看出，與對照組相比，3組給藥組小鼠力歇性游泳時間更長，而高劑量組比中劑量、低劑量組小鼠力歇性游泳時間又更長，且差異顯著。

2.4 小鼠肝糖原儲備量試驗結果分析

杏鮑菇多糖對小鼠肝糖原儲備量的影響見表4。

表4 杏鮑菇多糖對小鼠肝糖原儲備量的影響Tab.4 Effect of Pleurotus eryngii polysaccharide on liver glycogen reserve in mice

從表4可以看出，與對照組相比，3組給藥組肝糖原儲量都要高，高劑量組比中劑量、低劑量組小鼠肝糖原儲量更高，且差異顯著。

2.5 小鼠肌糖原儲備量試驗結果

對比對照組，3組給藥組小鼠肌糖原儲量更高，高劑量組比中劑量組、低劑量組小鼠肌糖原儲量更高，且差異顯著。這也就表明，杏鮑菇多糖攝入量越多，小鼠的肌糖原儲量越高，杏鮑菇多糖為小鼠運動提供了一定能量。

3 討論

運動耐力是通過爬桿時間和力歇性游泳時間測定，時間越長說明運動耐力越強。此次實驗對比了對照組和給藥組的小鼠爬桿時間和力歇性游泳時間，結果發現給藥組小鼠爬桿時間和力歇性游泳時間更長，尤其是給藥組中高劑量組的小鼠爬桿時間和力歇性游泳時間明顯高于其他組，也就表明杏鮑菇多糖有利于小鼠運動耐力的增強。肌肉活動主要依靠糖類供給能量，血糖、肝/肌糖原是人體主要糖類。血糖可以直接為人體提供能量，人體長時間劇烈運動會消耗大量血糖，影響中樞神經為人體提供能量，因此人體會感覺疲勞[10]。血糖不足的情況下，肝糖原和肌糖原分解之后會通過血液繼續為人體輸送能量，如果人體繼續保持高強度運動狀態，肝糖原和肌糖原不足無法繼續為肌肉提供能量，人體會因血糖不足感覺疲勞，所以運動耐力的強弱也是由肝糖原和肌糖原含量決定的。此次試驗將對照組和給藥組的小鼠力歇性游泳后肝糖原和肌糖原含量做對比，結果顯示，給藥組比對照組的小鼠肝糖原和肌糖原儲量更高，高劑量組比效果更明顯，且差異顯著。杏鮑菇多糖攝入量越多，小鼠的肝糖原和肌糖原儲量越高，這也就說明了杏鮑菇多糖具備抗疲勞的作用。