家禽胚蛋注射技術的應用研究(綜述)

賈良梁　夏俊花

摘? 要：益生菌可以是一種活菌制劑，也可以是細菌的代謝產物，它可以通過改變或重建動物腸道微生物菌群的組成來提高宿主的健康水平。益生元是植物中不能被宿主（動物）體內的酶分解的非淀粉多糖，能通過選擇性刺激動物腸道微生物菌群的生長與活性對宿主產生有益的影響，從而改善宿主的健康水平。益生菌和益生元已經在畜牧生產中得到廣泛的應用，一般經口補給，而胚胎供應或將成為給家禽添加益生菌或益生元的新途徑，擴展其在動物保健方面的新功能。

關鍵詞：益生菌;益生元;胚蛋注射技術

中圖分類號：S815 文獻標志碼：C 文章編號：1001-0769（2020）02-0001-02

1? 競爭性排斥培養物——益生菌

在對出殼肉雛雞經口腔人工感染 1×103 CFU、1×105 CFU或1×107 CFU鼠傷寒沙門氏菌耐萘啶酮酸菌株之前，Cox等（1992）利用胚蛋注射技術將一種未純化的厭氧培養的競爭性排斥培養物注射到即將出殼的入孵種蛋胚胎中，并檢測了其潛在保護效力。在孵化第18天，Cox等將分離自健康成年雞盲腸的該培養物按1∶1 000或1∶1 000 000稀釋，隨后取100 μL稀釋液手工注射到種蛋的氣室中。由于在一些已完成的試驗中種蛋的孵化率達到了商業生產可接受水平，同時用培養物處理的試驗雛雞能夠抵抗鼠傷寒沙門氏菌的攻毒，說明向入孵種蛋胚胎內注射競爭性排斥培養物可能成為給生活在污染環境中的雞提供抵抗沙門氏菌感染保護力的實用手段。

1997年，Meijerhof和Hulet報道了3項向入孵種蛋胚胎注射競爭性排斥培養物作為防止肉雞種蛋感染巴拿馬沙門氏菌保護措施潛在作用的試驗結果，試驗所用培養物含有多種未披露的精心挑選的細菌混合物。研究人員在孵化第18天用配置20-G針頭的注射器將含有1 mg干培養物的? ?0.2 mL液體手工注射到入孵種蛋的氣室或胚體中。結果發現，將培養物注入氣室可導致種蛋的孵化率下降，而注入胚體則可導致入孵種蛋的孵化率幾乎降為0。氣室注射帶來的影響是雛雞出殼后1周內的死亡率提高，其原因是卵黃吸收量減少。雖然試驗期間采用了無菌操作，但是這些研究人員認為雛雞出殼后第1周卵黃的吸收量減少是由于胚胎感染了較多的細菌。這可能與細菌通過入孵種蛋大頭端的孔侵入蛋中，最終經內層蛋殼膜進入胚胎有關。然而，保持蛋殼孔敞開是商業生產中的常規做法，胚蛋注射可以通過此孔進行。4周齡時，孵化期間經氣室注射該培養物的雛雞體內巴拿馬沙門氏菌污染水平與空白對照組雛雞的污染水平相接近，但是高于出殼時口服接種該培養物的雛雞的污染水平。

在最近的一項研究中，Teague等（2017）通過給白來航雞和肉雞接種火雞皰疹病毒（Herpesvirus of Turkey，HVT）疫苗評估了一種分離自家禽腸胃內容物的成分明確的益生菌培養物對提高雞抵抗馬立克氏病（Marek's Disease，MD）和腸炎沙門氏菌感染的能力。在孵化第18天，他們向入孵種蛋的胚胎羊膜腔中人工注射含有或不含HVT疫苗的1×104 CFU FloraMax?-B11乳酸菌，試驗雛雞在出殼當日經口接種腸炎沙門氏菌。在不影響入孵種蛋孵化率的同時，該益生菌降低了雛雞體內乳糖陽性革蘭氏陰性菌的水平以及腸炎沙門氏菌的感染率。他們的結論是，在不影響種蛋孵化率或HVT疫苗對MD的預防效果的情況下，FloraMax?-B11能提高雛雞抗腸炎沙門氏菌感染的能力，并且能夠提高雛雞出殼后前7 d的體重。

Oliveira等（2014）利用胚蛋注射技術將由枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）和屎腸球菌（Enterococcus faecium）組成的益生菌注入羅斯308肉雞的入孵種蛋胚胎中，以此研究該益生菌預防雛雞感染腸炎沙門氏菌的效果。在孵化第17.5天，他們用配置22-G針頭的注射器將該益生菌手工注入入孵種蛋的胚胎中。在所孵出雛雞4日齡時，他們用0.4 mL含1×106 CFU腸炎沙門氏菌的液劑對雛雞經口攻毒。結果發現，胚胎注射屎腸球菌可以減少腸炎沙門氏菌陽性的雛雞數，這表明益生菌在胚胎中的定植能夠使雛雞有效抵抗腸道菌的感染。與之類似，Triplett等（2017）同樣將枯草芽孢桿菌用作自動化商業性胚蛋注射所用益生菌的菌種，同時還將嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus）和動物雙歧桿菌（Bifidobacterium animalis）用作益生菌菌種。在種蛋孵化的第18天，研究人員將上述任意一種細菌按1×103 CFU、1×104 CFU、1×105 CFU或1×106 CFU稀釋的液劑（50 mL）注入肉雞入孵種蛋的胚胎羊膜腔中。結果發現，枯草芽孢桿菌顯著降低了種蛋的孵化率，種蛋孵化率隨著枯草芽孢桿菌注入濃度的升高而下降，當枯草芽孢桿菌的濃度提高到1×105 CFU時，種蛋的孵化率降低至1.67%。然而，嗜酸乳桿菌或動物雙歧桿菌的注射濃度達到1×106 CFU時，種蛋的孵化率未受影響。嗜酸乳桿菌的注射濃度為1×106 CFU時，入孵種蛋的孵化殘毒分析結果未受影響，當向入孵種蛋注入1×105 CFU或1×106 CFU的動物雙歧桿菌時，死雛和污染蛋的比例提高。因此，他們認為嗜酸乳桿菌和動物雙歧桿菌（而非枯草芽孢桿菌）是適合用作注入肉雞入孵種蛋胚胎的益生菌。

2? 益生元

在種蛋孵化的第12天，Sobolewska等（2017）利用胚蛋注射技術將商品化益生元產品DiNovo?注入種蛋的氣室中，以此測定其對羅斯308肉雞21日齡時的生產性能和多種腸組織形態學參數的影響。DiNovo?是海帶屬海藻的提取物，含有一定數量的昆布多糖和墨角藻聚糖。在動物體內，昆布多糖具有免疫調節的活性，墨角藻聚糖則具有抗病毒和抗菌的特性。對照組的入孵種蛋僅注入0.2 mL生理鹽水，試驗組的入孵種蛋注射相同體積的含0.88 mg DiNovo?的溶液。對42日齡雛雞檢測發現，益生元對多種生產性能參數無影響，但是對21日齡雛雞腸道的組織形態學有不同影響。在雛雞21日齡時，雖然DiNovo?未影響試驗組雛雞十二指腸的重量、長度、橫斷面積或直徑，但是提高了十二指腸的肌肉層厚度、絨毛寬度和隱窩深度。雛雞42日齡時，DiNovo?處理組雛雞的十二指腸絨毛的高度、寬度和橫斷面積均小于對照組雛雞的。Sobolewska等只能推斷出向入孵種蛋的胚胎注射益生元DiNovo?只會影響出殼肉用雛雞十二指腸的組織形態學特征，不會影響它們的生長性能。

原題名：In ovo applications in poultry： a review （英文）

原作者：E. D. Peebles（美國密西西比州立大學）