AGT AGTR1 ATP2B1基因多態性與蕭山區原發性高血壓相關性分析

高佳兒 魏文娟 彭俊 張靜 陸云燕

高血壓是腦卒中及冠心病發病的首要危險因素，是全球導致死亡的最主要因素之一，發病機制仍不明確，是多種遺傳因素和環境因素共同作用引起的復雜性疾病。近年來，國內外學者對單核苷酸多態性（SNP）影響原發性高血壓的機制進行較多研究，然而結果卻不盡相同［1-4］。本文選取高血壓最重要的發病機制之一的腎素-血管緊張素-醛固酮系統中2 個主要的高血壓候選基因：血管緊張素原（AGT）基因、血管緊張素Ⅱ1 型受體（AGTR1）基因，及國外研究較多的質膜Ca2+-ATP 酶1（ATP2B1）基因為研究目標，旨在發現原發性高血壓患者的基因多態性，以及基因多態性與環境危險因素交互作用對高血壓形成的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 隨機選擇2016 年10 月至2018 年12月本院就診原發性高血壓患者100 例（HTN 組），正常血壓對照組70 例（對照組）。HTN 組納入標準：收縮壓≥140mmHg 和（或）舒張壓≥90mmHg，或自述正在服用抗高血壓藥物。對照組納入標準：收縮壓<140mmHg 且舒張壓<90mmHg，并從未行降壓治療。排除繼發性高血壓患者；有原發性腎臟疾病者；有內分泌疾病者；合并妊娠者。

1.2 方法 （1）一般資料采集：所有研究對象均留取清晨空腹肘靜脈血樣，30min 內分離血漿并于-20℃保存。測量身高、體重、腰圍和血壓等，計算體質量指數（BMI），采集有無吸煙、飲酒史等一般病史。所有生化指標在本院檢驗科同批次專人檢測完成包括空腹血糖（FBG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、尿酸、血肌酐、同型半胱氨酸（Hcy）等。（2）基因多態性位點的檢測及分析：取空腹EDTA 抗凝靜脈血300μl，應用血液基因組DNA 抽提試劑盒（美國Axygen 公司生產）提取基因組DNA，嚴格按試劑盒說明書操作。采用直接測序法對所有研究對象的目標SNP 位點進行基因型檢測。將需要檢測的SNP 位點作為靶序列，根據SNP 位點兩側的保守序列設計引物，引物設計合成以后（由上海派森諾生物科技股份有限公司合成），確認DNA 模板質量合格的情況下，使用BI-2720 PCR 擴增儀進行擴增，擴增條件按試劑盒說明書設定，PCR 產物純化后應用美國ABI 3730XL DNA 自動測序儀進行基因分型（由上海派森諾生物科技股份有限公司協助完成）。

1.3 統計學方法 采用SPSS 19.0 統計軟件。非正態分布計量資料以（±s）表示，組間比較用t 檢驗；非正態分布計量資料以M（Q1，Q3）表示，組間比較采用非參數檢驗。計數資料以%表示，用χ2檢驗。采用Logistic 回歸模型分析原發性高血壓的獨立相關因素，及基因與環境因素交互作用對高血壓的影響。P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組人群一般特征比較 HTN 組腰圍、BMI、FBG、TG、尿酸、血肌酐水平與對照組差異有統計學意義（P<0.05）；兩組人群在性別、年齡、是否吸煙及飲酒、血膽固醇水平、血Hcy 水平的差異無統計學意義（P>0.05）（見表1）。

表1 兩組人群一般特征比較（±s）

表1 兩組人群一般特征比較（±s）

項目 HTN組（n=100） 對照組（n=70） t/χ2值 P值年齡（歲） 58.36±12.70 57.26±13.29 0.409 0.684腰圍（cm） 92.75±9.74 74.52±16.46 8.241 0.001 BMI（mmol/L） 25.38±3.00 22.07±4.98 5.248 0.001 FBG（mmol/L） 6.29±1.35 5.05±0.56 8.078 0.001 TC（mmol/L） 4.58±1.00 4.22±0.89 1.770 0.079 TG（mmol/L） 1.81±1.02 1.38±0.78 2.105 0.037 LDL-C（mmol/L） 2.71±0.72 2.51±0.65 0.727 0.469 HDL-C（mmol/L） 1.35±0.29 1.33±0.30 0.277 0.782尿酸（mmol/L） 392.70±103.79 334.72±102.71 2.533 0.013肌酐（mmol/L） 75.98±19.95 65.85±21.18 3.123 0.002 Hcy（μmol/L） 15.08±10.53 11.68±5.93 1.646 0.103吸煙（n） 14/86 10/60 0.038 0.845飲酒（n） 22/78 10/60 1.383 0.240性別（男/女）（n） 53/47 46/24 3.397 0.065

2.2 兩組人群AGT、AGTR1、ATP2B1 基因代表性SNP 位點基因型分布的差異 AGT 基因兩個SNP 位點rs699、rs5051，AGTR1 基因一個SNP 位點rs5186，ATP2B1 基因一個SNP 位點rs12817819 的基因型頻率分布符合H-W 遺傳平衡定律（P>0.05），樣本具有群體代表性。上述SNP 位點兩組間差異均無統計學意義（P>0.05）（見表2）。

表2 兩組人群各SNP位點基因型分布的差異

2.3 基因多態性及環境因素與高血壓的相關性 經Logistic 回歸校正性別、年齡、BMI、血肌酐、血Hcy、尿酸后顯示，FBG、腰圍及TC 為原發性高血壓獨立危險因素，未發現基因多態性與高血壓相關聯（P>0.05）（見表3）。

表3 基因多態性及環境因素與原發性高血壓的相關性

2.4 基因多態性及環境因素交互作用對原發性高血壓的影響 Logistic 回歸分析顯示基因多態性與環境因素交互作用對原發性高血壓的影響無統計學意義（P>0.05）。FBG、TC、腰圍三者交互作用與原發性高血壓顯著相關（P<0.01），校正性別、年齡、BMI、血肌酐、血Hcy 水平、尿酸、吸煙等因素后，上述相關性仍有統計學意義（P<0.01）。

3 討論

隨著人口老齡化，以及肥胖、睡眠呼吸暫停低通氣綜合征的增多，我國高血壓患病率在2012 年已達25.2%，高血壓患者為2.7 億［5］，血壓達標率卻不足10%，嚴重危害人民群眾的生命安全，影響生活質量［6-7］。因此，闡明患者血壓升高的遺傳機制，尋找高血壓相關基因，具有非常重要的意義。

全基因組關聯研究（GWAS）發現較多與原發性高血壓有關的基因和單核苷酸多態性位點［8-10］。ATP2B1 基因便是其中之一，Kohara 等［11］在1484 例日本個體中進行單核苷酸多態性和候選基因分析，首次發現ATP2B1 基因為高血壓易感基因。Xu 等［12］發現ATP2B1 基因rs17249754 位點單核苷酸多態性與寧波漢族人群原發性高血壓發生密切相關。本資料未發現ATP2B1 基因位點rs12817819 與原發性高血壓存在相關性。兩個目標基因AGT、AGTR1 的所有SNP 位點兩組間差異均無統計學意義（P>0.05），經Logistic回歸分析，未發現上述基因多態性與原發性高血壓相關聯。

原發性高血壓的發生是由遺傳基因與環境因素相互作用的結果，具有病因的多元性和復雜性，可能受到多個基因位點及環境危險因素的共同影響［13-14］。本資料顯示，HTN 組腰圍、BMI、FBG、TG、尿酸、血肌酐水平與對照組差異有統計學意義。Logistic 回歸分析顯示FBG、TC 及腰圍為原發性高血壓獨立危險因素。此外本研究采用交互作用模型理論，探討基因多態性與環境因素交互作用對原發性高血壓的影響。Logistic 回歸分析結果顯示，基因多態性與環境因素交互作用對原發性高血壓的影響無統計學意義（P>0.05），FBG、TC、腰圍三者交互作用與原發性高血壓顯著相關（P<0.01），校正性別、年齡、BMI、血肌酐、血Hcy 水平、尿酸、吸煙等因素后，上述相關性仍有統計學意義（P<0.01）。

綜上所述，在蕭山區原發性高血壓患者中，環境因素FBG、TC、腰圍是原發性高血壓的獨立危險因素，三者交互作用與原發性高血壓顯著相關。但未發現目標基因位點多態性與原發性高血壓發病相關聯。本研究為高血壓遺傳學研究提供本地區的相關信息，但由于樣本量較小，會產生一定的局限性，未來有待于更大樣本量更多基因位點的研究揭示高血壓遺傳學方面的病因。