2種彝藥對CCl₄誘導小鼠肝臟損傷的影響

董艷珍　郝應芬　王思蘆　肖文淵　吉木阿洛

摘要：為探討天胡荽（MT）和虎杖（JC）對四氯化碳誘導小鼠肝損傷的影響，分別以2種彝藥的不同濃度對模型小鼠連續7 d灌胃給藥，7 d后通過酶聯免疫吸附測定（ELISA）法檢測小鼠血清中總膽紅素（TBIL）、丙二醛（MDA）含量和肝勻漿中的超氧化物歧化酶（SOD）、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、谷草氨酸轉氨酶（AST）活性。結果表明，MT和JC均能不同程度地下調各項指標，JC效果總體優于MT。與模型組比，JC各濃度均可顯著下調TBIL和MDA含量，且均以低濃度效果最好，使TBIL下降了30.73%（P<0.05），MDA下降了22.42%（P<0.05），JC低濃度組對TBIL的下調作用優于聯苯雙酯（P<0.05）;聯苯雙酯與不同濃度的2種彝藥均能顯著降低ALT和AST水平，其中JC高濃度組的效果最好，使ALT比模型組和陽性組分別降低了32.37%（P<0.05）和14.55%（P<0.05），使AST比模型組和陽性組分別降低了26.95%（P<0.05）和8.31%（P>0.05）。JC具有顯著的保肝效果，可為臨床應用提供依據。

關鍵詞：彝藥;天胡荽;虎杖;四氯化碳;肝功能

中圖分類號： R285.5 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2020）07-0214-03

肝臟作為動物機體最大的代謝器官，其功能的完善是保障動物機體健康的重要前提。肝細胞常因病原微生物的侵入或有毒有害物質的攝入及代謝而造成損傷，引起肝炎、肝硬化、肝癌等疾病。現代研究表明，許多天然草藥對肝功能具有調節作用，彝醫臨床對肝病的診治具有一定的特色，如天胡荽（Hydrocotyle sibthorpioides，彝藥名為滿天星，簡稱MT）、虎杖（Polygonum cuspidatum，彝藥名為幾初，簡稱JC）均為四川涼山州特產，當地彝醫常用其治療肝病和黃疸。本研究探討了2種彝藥的水煎劑對CCl4誘導的急性肝炎中相關生化指標的影響，以評價其作用機制。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑

天胡荽（MT）、虎杖（JC）（西昌彝醫藥研究所）;聯苯雙酯滴丸（萬邦健制藥集團股份有限公司）;丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、谷草氨酸轉氨酶（AST）、總膽紅素（TBIL）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、Elisa試劑盒均購自武漢純度生物科技公司。

1.2 試驗動物

90只體質量為（20±2） g的清潔級健康昆明（KM）小鼠，由西昌學院動物科學學院動物醫學實驗室提供，常規飼養。

1.3 方法

1.3.1 藥物制備

彝藥水煎劑制備：將2種彝藥充分干燥至恒重后，分別取100 g粉碎后過80目篩，以適量去離子水分別煎煮15 min，過濾收集濾液，濾渣重復煎煮1次，合并濾液濃縮至100 mL，加入乙醇至其終濃度為75%，冷藏過夜后2 000 r/min離心10 min，取上清液回收掉乙醇后，用去離子水配制成濃度為1 g/mL，4 ℃冷藏備用。

聯苯雙酯懸液制備：將聯苯雙酯滴丸以適量去離子水研磨，配制成濃度為0.01 mg/mL的懸液。

1.3.2 動物分組與處理

將90只健康KM小鼠，隨機分為15個組，每組10只，雌雄各半。空白組和模型組每天以0.2 mL去離子水灌胃;2種彝藥各設高、中、低3個劑量組（1.00、0.50、0.25 g/mL），每天灌胃0.2 mL;陽性組以聯苯雙酯懸液0.2 mL灌胃;各組均連續灌胃7 d。除了空白組外，其余各組于分別于第3、5、7天對小鼠腹腔注射0.1% CCl4橄欖油0.2 mL/只。

各組均于最后一次給藥12 h后，摘眼球采血，分離血清待測;同時頸椎脫臼處死小鼠，精確稱取0.1 g肝組織，加入1 mL 4 ℃生理鹽水，用球磨儀勻漿器300次/min的振動頻率研磨90 s，于4 ℃3 000 r/min 離心10 min，取上清液待測。

1.3.3 肝功能指標測定

按照Elisa試劑盒使用說明，以酶標儀測定各指標的標準曲線，計算各組小鼠血清或肝臟勻漿中的TBIL、MDA含量和AST、ALT、SOD活性。

1.3.4 數據處理

各組數據均以平均值±標準差表示，并對數據進行組間方差分析，以P<0.05表示組間差異顯著。

2 結果與分析

2.1 2種彝藥對小鼠血清TBIL、MDA水平的影響

結果表明，與空白組比，模型組的TBIL含量升高了11.68%（P>0.05），差異不顯著;MDA含量升高了11.91%（P<0.05），差異顯著，表明CCl4可能誘導小鼠肝臟處理TBIL的能力有下降的趨勢，而肝臟的抗氧化能力則顯著降低。與模型組比，陽性組的聯苯雙酯可顯著提高肝細胞抗氧化功能，降低TBIL（P>0.05）和MDA（P<0.05）含量，而MT組高、中濃度均能顯著降低血清TBIL含量，其中高濃度效果最好，使血清TBIL含量降低了22.13%（P<0.05），同時比陽性組效果好，且差異顯著（P<0.05）;不同濃度的MT組均可顯著降低血清MDA含量，其中高濃度效果最好，使MDA含量比模型組降低了19.43%;表明MT對CCl4誘導肝損傷小鼠的血清TBIL、MDA含量具有下調作用，且呈劑量依賴性。

與模型組比，各濃度JC組均可顯著下調TBIL（P<0.05）和MDA（P<0.05）含量，且均以低濃度效果最好，使TBIL含量下降了30.73%，MDA含量下降了22.42%，JC低濃度組對TBIL的下調作用優于聯苯雙酯。表明JC可能通過促進肝臟代謝及抗氧化功能，從而抑制CCl4損傷肝細胞（表1）。

2.2 2種彝藥對小鼠肝臟勻漿ALT、AST、SOD活性的影響

試驗結果表明，與空白組比，CCl4未引起小鼠肝臟的SOD表達發生變化，但使模型組ALT和AST在肝勻漿中的活性均顯著升高（P<0.05），表明肝細胞出現顯著的損傷。與模型組比，陽性藥物聯苯雙酯與2種彝藥不同劑量均能顯著降低ALT和AST活性，其中JC高濃度組的效果最好，使ALT比模型組和陽性組分別降低了32.37%（P<0.05）和14.55%（P<0.05），使AST比模型組和陽性組分別降低了26.95%（P<0.05）和8.31%（P>0.05），說明MT和JC均可能通過抵抗或抑制CCl4代謝的某環節發揮不同程度的保肝效果，且JC組的效果整體優于MT組，但二者與聯苯雙酯均對肝臟SOD的活性無顯著影響（表2）。

3 討論

研究表明，CCl4在肝臟內被細胞色素P450激活產生具有毒性的三氯甲基自由基和三氯甲基過氧自由基，對肝細胞膜和細胞器膜均有破壞作用，從而導致肝細胞壞死。陽性藥物聯苯雙酯可以通過對抗自由基，發揮保肝降酶、減輕肝臟損傷的作用。

天胡荽的現代藥理研究表明，其主要的活性成分為黃酮類槲皮素，具有抗炎活性[1]。天胡荽具有抗乙型肝炎病毒表面抗原的活性[2]，以及抗肝纖維化作用[3]，在臨床用于治療病毒性肝炎及黃疸。虎杖的藥理研究表明，其大黃素等蒽醌類化合物具有病毒、抗菌活性[4]。虎杖苷的分子結構中含有許多共軛雙鍵，清除自由基是虎杖苷抗氧化的途徑之一，因此具有顯著的抗氧化性[5];同時虎杖苷通過阻斷NF-κB途徑，下調腫瘤壞死因子（TNF-α）、白介素6（IL-6）和白介素1b（IL-1b）的表達發揮抗炎活性[6-7]。目前這2種草藥對肝臟功能的影響研究報道較少，洪照友等研究表明，虎杖水煎劑可能通過降低肝缺血性損傷組織中氧自由基的含量，減少其對肝組織的損傷[8]。

本試驗中，由CCl4代謝產生的自由基引起細胞膜脂質發生過氧化反應產生MDA，而血清MDA含量在一定程度可以反映細胞的損傷程度，試驗結果表明，2種彝藥對血清MDA含量具有下調作用，但對肝臟組織SOD的活性沒有顯著影響，說明2種彝藥的保肝作用可能與SOD活性無關，而是通過抑制代謝CCl4的氧化酶活性或者含有能與自由基反應的抗氧化活性基團實現的。同時，本試驗結果表明，MT和JC的水煎劑均可不同程度地降低小鼠肝臟中的ALT和AST的活性，說明二者可能通過對抗自由基維護肝細胞膜穩定性，減少肝細胞損傷，同時還能促進肝細胞對間接膽紅素的轉化，有利于直接膽紅素的排泄，從而降低血清TBIL含量，發揮臨床治療肝炎性黃疸的作用。

參考文獻：

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[8]洪照友，高 毅，詹興海. 中藥虎杖對大鼠肝臟缺血性損傷保護的形態學觀察[J]. 世界華人消化雜志，2000（2）：162-164.