超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定魚肉組織中的恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星殘留量

羅賢靜麗

摘 要：本文建立了魚肉中恩諾沙星（ENRO）、環(huán)丙沙星（CIP）和沙拉沙星（SARA）殘留量的UPLC-MS/MS液相串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。結(jié)果表明：各組分在1～500 ng·mL-1范圍內(nèi)具有良好的線性，回收率為83.7%～103.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）為1.7%～5.4%，檢出限（LOD）為0.08～0.17 ?g·kg-1，定量限（LOQ）為0.34～0.56 ?g·kg-1。

關(guān)鍵詞：魚;恩諾沙星;環(huán)丙沙星;沙拉沙星;超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜

Abstract：A method was developed for the determination of enrofloxacin， ciprofloxacin and sarafloxacin in fish tissue by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS）. The results showed that there existed good linear relationships for the components in the range of 1～500 ng·mL-1， the recoveries were in the range of 83.7%～103.1% with the relative standard deviations of 1.7%～5.4%， the detection limits of determination in the range of 0.08～0.17 ?g·kg-1， the quantitation limits were 0.34 ～0.56 ?g·kg-1.

Key words：Fish; Enrofloxacin; Ciprofloxacin; Sarafloxacin; UPLC-MS/MS

恩諾沙星（Enrofloxacin，ENRO）、環(huán)丙沙星（Ciprofloxacin，CIP）和沙拉沙星（Sarafloxacin，SARA）均屬于喹諾酮類藥物（Quinolones，QNs）[1]。

喹諾酮是一類合成抗生素類藥物[2]，具廣譜抗菌活性，殺菌效果好，廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中疾病的治療[3]。喹諾酮類藥物可在水產(chǎn)動物體內(nèi)殘留，通過食物鏈進入人體，對人體產(chǎn)生直接危害。近年來，部分水產(chǎn)品養(yǎng)殖戶為提高產(chǎn)量，常在養(yǎng)殖過程中、濫用此類藥物，以致水產(chǎn)品安全事件頻發(fā)。為確保消費者安全，我國及歐盟等組織均對水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物的使用情況及殘留限量作出嚴(yán)格規(guī)定[4]。我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB 31650-2019中規(guī)定魚組織（皮+肉）中恩諾沙星（恩諾沙星與環(huán)丙沙星之和）的最大殘留限量為100 ?g·kg-1，沙拉沙星的最大殘留限量為30 ?g·kg-1。歐盟（EC）在1999年3月公布的508/1999號法規(guī)規(guī)定的最高殘留限量為恩諾沙星和環(huán)丙沙星總限量為30 ?g·kg-1[5]。本文選擇魚組織為研究對象，建立了3種喹諾酮類藥物殘留的提取和檢測方法。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

試劑。乙腈為LC-MS級別、甲酸、正己烷為HPLC級別;酸化乙腈：99 mL乙腈中加入1 mL甲酸，混勻;5%乙腈甲酸水溶液：95 mL水中加入5 mL乙腈和100 ?L甲酸，混勻;恩諾沙星（ENRO）和環(huán)丙沙星（CIP）購自安譜公司，沙拉沙星（SARA）購自Dr公司，純度均大于94.0%。

儀器。XevoTMTQ-S液相色譜串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（Waters公司）;電子天平（萬分之一，Mettler-Toledo）。

1.2 樣品前處理

稱取魚肉試樣（皮+肉）2 g（精確至0.001 g）于50 mL離心管中，加入10 mL酸化乙腈，渦旋1 min，超聲提取10 min，5 000 r·min-1離心5 min，將全部上清液轉(zhuǎn)入另一50 mL離心管中，剩余殘渣用10 mL酸化乙腈再重復(fù)提取1次，合并全部上清液，加入10 mL乙腈飽和正己烷渦旋1 min，5 000 r·min-1離心5 min，去除上層正己烷層，再加入10 mL乙腈飽和正己烷，重復(fù)除脂1次，轉(zhuǎn)移下層乙腈層于50 mL離心管中，40 ℃水浴條件下氮吹至凈干，用1 mL5%乙腈甲酸水溶液定容，渦旋混勻，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。

1.3 實驗條件

色譜柱：ACQUITY UPLC? BEH C18（1.7 μm，2.1 mm×100 mm）;流動相：0.1%甲酸水+乙腈，梯度洗脫;電噴霧正離子掃描模式，多反應(yīng)監(jiān)測（MRM），離子源溫度150 ℃，母離子，子離子的錐孔電壓和碰撞能量見表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍和定量限

本次實驗標(biāo)準(zhǔn)曲線制作了9個點，分別為1、2、5、10、20、50、100、200 ng·mL-1和500 ng·mL-1，呈良好線性關(guān)系，以20次方法測定低限加上樣品測定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差的3倍作為方法檢出限，10倍作為方法定量限，測定結(jié)果見表2。

2.2 加標(biāo)回收率實驗

分別稱取魚肉試樣2 g（精確至0.001 g）進行3水平濃度添加實驗，根據(jù)GB/T 27404-2008的要求，3水平添加濃度分別為0.5、30、100 ?g·kg-1，按照1.2的方法進行樣品前處理，上機測定，計算加標(biāo)回收率和精密度，計算結(jié)果見表3。

3 結(jié)論

本研究以超高效液相色譜-四級桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法建立了魚肉中3種喹諾酮類藥物殘留的檢測方法。分析結(jié)果顯示在1～500 ng·mL-1范圍內(nèi)具有良好的線性，回收率為83.7%～103.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.7%～5.4%。本方法準(zhǔn)確度高，檢出限低，適用于魚肉中恩諾沙星（ENRO）、環(huán)丙沙星（CIP）和沙拉沙星（SARA）等喹諾酮類藥物殘留檢測。

參考文獻：

[1]劉麗貞，周婉蘋，薛 冰.高效液相色譜-熒光檢測法同時測定魚肉組織中的諾氟沙星、環(huán)丙沙星和恩諾沙星殘留[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2008（7）：1296-1297，1307.

[2]李雅麗，胥傳來.喹諾酮類藥物殘留檢測方法[J].食品科學(xué)，2007（11）：628-633.

[3]張 樂.水產(chǎn)品中環(huán)丙沙星殘留量檢測方法的比較優(yōu)化[J].杭州農(nóng)業(yè)科技，2006（6）：17-18.

[4]梁晶晶，徐瀟穎，丁宇琦，等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測定水產(chǎn)品中19種喹諾酮類藥物殘留[J].分析測試學(xué)報，2018，37（2）：224-230.

[5]施 冰，張志剛，吳抒懷，等.LC/MS/MS測定水產(chǎn)品中7種氟喹諾酮類抗菌素殘留量的方法研究[J].檢驗檢疫科學(xué)，2004（S1）：25-30.