閩產(chǎn)厚樸葉的生藥顯微鑒定

曾禮芳，王海閣，湯七金，張曉俊，黃澤豪*

(1.福建中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，福建 福州 350122；2.福建省明溪縣醫(yī)院，福建 三明 365200)

厚樸為我國二級保護(hù)植物和二級保護(hù)中藥材，在我國已有兩千多年的藥用歷史，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品[1-2]。《中國藥典》2015年版收載本品為木蘭科植物厚樸MagnoliaofficinalisRehd.et Wils.或凹葉厚樸MagnoliaofficinalisRehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮[3]。厚樸葉是藥用植物厚樸的樹葉，為大型葉，一般長20～45 cm，寬10～25 cm，分布于福建、浙江、廣西、江西、湖南、湖北、四川、貴州、云南、陜西、甘肅等地[4]，閩產(chǎn)厚樸葉主要是指福建省天然分布和栽培的凹葉厚樸的葉片，據(jù)文獻(xiàn)記載，厚樸葉主要含厚樸酚、和厚樸酚[5]、木脂素、黃酮、多糖[6]、揮發(fā)油[7]等化學(xué)成分，具有抗菌[7]、抗氧化[8]、舒張血管[9]等藥理作用，但目前對于閩產(chǎn)厚樸葉的生藥顯微鑒定研究報道較少，因此本研究就其顯微鑒定方面做深入研究，旨在為閩產(chǎn)厚樸葉的道地性鑒別提供依據(jù)，也為將來閩產(chǎn)厚樸葉的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 材料

厚樸葉采于福建省三明市明溪縣胡坊鎮(zhèn)福西村，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室黃澤豪副教授鑒定為木蘭科凹葉厚樸Magnoliaofficinalis的葉片。

1.2 儀器與試劑

生物顯微鏡(YS100日本尼康公司)；照相機(jī)(E0S 60D佳能公司)；連續(xù)變倍體視顯微鏡(JSZ4南京江南光電(集團(tuán))股份有限公司)；快速開蓋萬能高速粉碎機(jī)(DFY-C-500溫嶺市林大機(jī)械有限公司)；顯微測量尺；顯微拍攝器材等。

水合氯醛試液；濃鹽酸；間苯三酚試液(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純)；蒸餾水。

2 實驗方法

應(yīng)用顯微技術(shù)對厚樸的葉片進(jìn)行顯微分析，包括組織鑒定和粉末鑒定。組織鑒定是通過觀察厚樸的切片鑒別其組織構(gòu)造特征；粉末鑒定是通過觀察厚樸的葉片、干品的粉末制片對其細(xì)胞分子及內(nèi)含物的特征進(jìn)行鑒定。

在此采用傳統(tǒng)的徒手切片、表皮撕取等方法進(jìn)行制片，分別對厚樸的葉進(jìn)行顯微鑒別觀察；干品藥材在進(jìn)行打粉過篩后進(jìn)行粉末制片觀察。觀察結(jié)果做好細(xì)胞大小、細(xì)胞后含物等測量及鑒別并及時拍照和做好數(shù)據(jù)記錄。

實驗中涉及的徒手切片、粉末制片兩種制片方法，其具體如下：

(1)徒手制片：取新鮮厚樸的葉進(jìn)行徒手切片，裝片，必要時用水合氯醛進(jìn)行透化處理，或加鹽酸-間苯三酚試液進(jìn)行染色，然后在顯微鏡下觀察，此方法較為方便快捷。

(2)表面制片：用眼科鑷子輕輕撕取葉的表面層置于載玻片的水或者水合氯醛試液內(nèi)，加蓋玻片，在顯微鏡下觀察。

(3)粉末制片：取葉片藥材粉末少許分別進(jìn)行加蒸餾水的不透化處理和加水合氯醛的透化處理，并分別進(jìn)行觀察，必要時加鹽酸-間苯三酚試液進(jìn)行染色。

3 實驗結(jié)果

3.1 葉橫切面(過中脈)

葉橫切面(過中脈)組織結(jié)構(gòu)特征，見圖1、圖2。

注：1.上表皮；2.柵欄組織；3.海綿組織；4.下表皮；5.非腺毛

注：1.上表皮；2.維管束；3.油細(xì)胞；4.髓部；5.維管束鞘纖維；6.非腺毛

實驗觀察結(jié)果：①葉的上下表皮均為1層類方形或類長方形細(xì)胞，上表皮細(xì)胞厚且大，切向延長，外被角質(zhì)層，表皮細(xì)胞外壁角質(zhì)層較薄，無表皮毛和氣孔；②柵欄組織約占葉橫切面的1/3，為2列細(xì)胞，柵欄組織較發(fā)達(dá)，細(xì)胞排列較整齊緊密，不通過中脈；③海綿組織約占葉橫切面的2/3，由多數(shù)薄壁細(xì)胞疏松排列，形成大的空隙(見圖1、圖2)；④主脈向葉背突出明顯，主脈髓部呈類圓形，較大，其中散有油細(xì)胞，在下皮與皮層之間有油細(xì)胞斷續(xù)排列成明顯的油細(xì)胞環(huán)帶，外韌型維管束約20個排列成環(huán)，每個維管束的韌皮部外側(cè)有纖維集成帽狀(見圖2)。

3.2 葉表面制片

葉表面制片特征，見圖3。

注：1.葉上表皮；2.葉下表皮；3.氣孔；4.非腺毛

實驗觀察結(jié)果：①上表皮細(xì)胞為不規(guī)則多角形，垂周壁微波狀彎曲，未見氣孔及非腺毛；②下表皮細(xì)胞為不規(guī)則多角形，垂周壁波狀彎曲，氣孔多見，多為平軸式，不等式或不定式氣孔偶見，較大，多細(xì)胞非腺毛較多且較長(見圖3)。

3.3 粉末制片

葉的粉末顯微特征，見圖4。

注：1-2.非腺毛；3-4.油細(xì)胞；5-7.導(dǎo)管；8-9.纖維

實驗觀察結(jié)果：①葉粉末呈灰綠色，非腺毛較多，大多由2個細(xì)胞組成；②纖維較多，散在或成束，壁較厚，孔溝不明顯；③油細(xì)胞較多，大多單個散在，細(xì)胞呈類圓形或卵圓形，直徑30～60 μm，長60～80 μm，壁稍厚，棕黃色，胞腔內(nèi)含黃色油滴狀物；④導(dǎo)管較多，主要為螺紋導(dǎo)管，也有梯紋導(dǎo)管(見圖4)。

4 討論

(1)將本實驗觀察結(jié)果與黃曉燕[10]的觀察結(jié)果進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地厚樸葉的顯微結(jié)構(gòu)有所區(qū)別，相同之處為：①葉上下表皮細(xì)胞為不規(guī)則多邊形，垂周壁波狀彎曲，葉下表面可見非腺毛及氣孔；②主脈均具油細(xì)胞環(huán)帶，每個維管束的韌皮部外側(cè)有纖維集成帽狀；③粉末均呈灰綠色，氣微香，多細(xì)胞非腺毛多見，纖維較多，散在或成束，油細(xì)胞較多。不同之處為：①閩產(chǎn)厚樸主脈向葉背突出較明顯，呈橢圓形，外韌型維管束約20個排列成環(huán)，主脈髓部油細(xì)胞較多，約55～70個，而川產(chǎn)厚樸約12～20個；②閩產(chǎn)厚樸海綿組織占比較大，約占2/3，川產(chǎn)厚樸約占1/3～2/3；③閩產(chǎn)厚樸葉表面制片上表皮垂周壁波狀彎曲較明顯，而下表皮垂周壁波狀彎曲較不明顯，柵欄組織不通過中脈，而川產(chǎn)厚樸柵欄組織過中脈；④閩產(chǎn)厚樸葉粉末制片纖維孔溝不明顯。

(2)閩產(chǎn)厚樸葉顯微觀察結(jié)果與文獻(xiàn)[10]相比未見石細(xì)胞，是樣品原因還是實驗誤差有待深入探究。

(3)真?zhèn)蝺?yōu)劣是中藥材鑒定與評價的核心內(nèi)容。厚樸葉作為福建省道地藥材之一[11]，市售品有其他產(chǎn)地或不同品種的混淆品需要鑒別，正確鑒別藥材真?zhèn)斡兄跒榈赖厮幉牡恼J(rèn)定提供科學(xué)依據(jù)。本研究結(jié)果顯示，閩產(chǎn)厚樸葉上表皮無表皮毛和氣孔，主脈呈橢圓形，外韌型維管束約20個排列成環(huán)，導(dǎo)管多為螺紋導(dǎo)管，纖維大多成束存在，孔溝不明顯等可作為正確區(qū)分閩產(chǎn)厚樸葉的依據(jù)，本實驗研究結(jié)果也為道地藥材——閩產(chǎn)厚樸葉的正確鑒別提供了部分科學(xué)依據(jù)，有助于科學(xué)評價藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣。

5 結(jié)語

本研究通過對閩產(chǎn)厚樸葉進(jìn)行生藥學(xué)顯微鑒定，結(jié)果表明閩產(chǎn)厚樸組織構(gòu)造具備的主要鑒別特征為：①橫切面組織結(jié)構(gòu)特征上可見主脈髓部呈橢圓形，較大，外韌型維管束約20個排列成環(huán)，含維管束鞘；②下表皮非腺毛具多細(xì)胞；③粉末特征主要為纖維散在或成束，油細(xì)胞較多，導(dǎo)管多為螺紋導(dǎo)管。因此，本研究對厚樸葉顯微鑒定方面的研究可為閩產(chǎn)厚樸葉的道地性鑒別提供依據(jù)，為閩產(chǎn)厚樸葉今后的開發(fā)利用提供參考資料。